專利名稱：：爪哇棒束孢霉菌株及其在防治斜紋夜蛾方面的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物農(nóng)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及高效爪哇棒束孢霉菌株及其在防治害蟲方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：斜紋夜蛾5^o^pfera/zYwra(Fabricius)是一種關(guān)注都很高的的世界性害蟲。它的食性極雜，可取食十字花科、茄科、葫蘆科等99科290多種農(nóng)作物。斜紋夜蛾原來(lái)是間歇性發(fā)生害蟲，約34年大發(fā)生1次，20世紀(jì)90年代以后，由于農(nóng)業(yè)種植結(jié)構(gòu)的調(diào)整，蔬菜等經(jīng)濟(jì)作物面積和設(shè)施栽培面積的迅猛增擴(kuò)，增加了斜紋夜蛾取食、繁殖場(chǎng)所和越冬場(chǎng)所，以及夏季高溫少雨和濫用農(nóng)藥殺傷天敵，使斜紋夜蛾災(zāi)連年大發(fā)生，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)很大的損失。目前對(duì)斜紋夜蛾的防治仍以化學(xué)防治為主。由于化學(xué)農(nóng)藥的大量使用，加上操作上的不規(guī)范或者農(nóng)民實(shí)際操作中的難以規(guī)范，使斜紋夜蛾普遍產(chǎn)生了抗藥性，并隨之帶來(lái)了環(huán)境污染問(wèn)題。自20世紀(jì)60年代以來(lái)，印度、埃及、日本、土耳其等地以及我國(guó)的臺(tái)灣、上海等地區(qū)相繼報(bào)道了斜紋夜蛾對(duì)多種殺蟲劑均已產(chǎn)生了抗性，其中包括有機(jī)氯、有機(jī)磷、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯以及蘇云金桿菌(Bt)等。鑒于大量使用化學(xué)農(nóng)藥防治斜紋夜蛾所帶來(lái)的抗藥性和環(huán)境污染等問(wèn)題，有必要尋求更加持續(xù)有效的防治措施，尤其是生物防治措施，以克服化學(xué)農(nóng)藥帶來(lái)的負(fù)面效應(yīng)。斜紋夜蛾的天敵較多，已記錄的有169種，其中大多數(shù)為天敵昆蟲，侵染斜紋夜蛾的真菌只有3種，分別是赭曲霉(A^wgz7/woc/zracew)、球孢白僵菌(5eawven'a6asw'a"a)禾口萊氏野村菌(M附調(diào)ean7—)。棒束孢霉屬()原歸屬于擬青霉屬(尸"e"7omyc^)，是一類重要的昆蟲病原真原，分布廣泛，目前可用來(lái)防治線蟲、蚜蟲、朱砂葉螨、煙粉虱、小菜蛾和草地夜蛾等害蟲，但未見利用棒束孢菌霉防治斜紋夜蛾的報(bào)導(dǎo)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種高效爪哇棒束孢霉菌株。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述高效爪哇棒束孢霉菌株防治斜紋夜蛾的應(yīng)用。本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)本發(fā)明提供了一種防治斜紋夜蛾的高效爪哇棒束孢霉/ran'ayavaw'cw(Friedrichs&Bally)菌株Ij01。所述菌株分類地位屬于真菌門(Eumycota)、有絲分裂孢子真菌類(Mitosporicfiingi)、絲孢綱(Hyphomycetes)、絲孢目(Hyphomycetales)、絲孢禾斗(Hyphomycetaceae)、棒孢霉屬(/M^)。所述菌株巳在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏日期是2008年10月27日，保藏號(hào)CCTCCM208171，具體內(nèi)容是爪哇棒束孢霉Ij01Zsan'ayavaw/cw(Friedrichs&Bally)Ij01。本發(fā)明運(yùn)用自然篩選法，通過(guò)采集天然感病的昆蟲、常規(guī)的分離純化菌株、致病性測(cè)定、生物學(xué)特性及生產(chǎn)性狀比較、生產(chǎn)菌株確定等步驟獲得一株對(duì)斜紋夜蛾高效且穩(wěn)定性好的爪哇棒束孢""r/"_/m^"/cw(Friedrichs&Bally)菌株IjOl。所述菌株分類地位真菌門(Eumycota)、有絲分裂孢子真菌類(Mitosporicfiingi)、絲孢綱(Hyphomycetes)、絲孢目(Hyphomycetales)、絲孢禾斗(Hyphomycetaceae)、棒孢霉屬(/^n'勻。未發(fā)現(xiàn)有性世代。Ij01菌株的形態(tài)學(xué)特征在PDA平板上，菌落圓形，菌絲白色，孢子層灰紫色，無(wú)孢梗束。在Czapek-Dox平板上，菌落生長(zhǎng)較慢，近圓形，菌絲白色，孢子層顏色稍淡。顯微鏡下菌絲透明，無(wú)色，寬度2.66士0.18prn;分生孢子梗與菌絲相似，不成孢梗束，長(zhǎng)10.38士3.26nm，寬2.73±0.25pm;產(chǎn)孢細(xì)胞瓶梗葫蘆狀，最寬處直徑2.75±0.35pm，長(zhǎng)7.92±1.11pm，輪狀直接著生于菌絲上或分生孢子梗上；瓶梗；分生孢子無(wú)色，長(zhǎng)橢圓形，兩端較尖，長(zhǎng)5.47士1.23nm，寬2.09士0.36pm。本發(fā)明同時(shí)提供了所述高效爪哇棒束孢霉菌株在防治斜紋夜蛾方面的應(yīng)用。Ij01菌株對(duì)斜紋夜蛾的毒力在不同孢子濃度下，斜紋夜蛾2齡幼蟲的平均累計(jì)死亡率隨著處理濃度的升高與時(shí)間的延長(zhǎng)而顯著增加，當(dāng)濃度為50000個(gè)分生孢子/mL時(shí)，在處理后第6天和第8天，斜紋夜蛾的死亡率即分別達(dá)到48.33%和51.26%。觀測(cè)數(shù)據(jù)經(jīng)對(duì)數(shù)一幾率值分析法計(jì)算出半致死劑量，隨著處理后時(shí)間的延長(zhǎng)，半致死濃度逐步變小，LQo值在1()S分生孢子個(gè)數(shù)/mL數(shù)量級(jí)上下波動(dòng)。致死中時(shí)間，當(dāng)濃度為lxl()S個(gè)孢子/mL時(shí)，致死中時(shí)為5.0天，95%置信區(qū)間是4.16.3天。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和有益效果本發(fā)明所述高效爪哇棒束孢霉菌對(duì)防治斜紋夜蛾高效；本發(fā)明所述的高效爪哇棒束孢霉菌是一種昆蟲病原真菌，作為一種活體生物農(nóng)藥，具有不同于現(xiàn)有化學(xué)殺蟲劑的全新作用機(jī)理、對(duì)環(huán)境無(wú)污染、無(wú)殘留的特征，適應(yīng)有機(jī)食品生產(chǎn)的要求。圖lIj01菌株在PDA平板培養(yǎng)基上的菌落圖2Ij01菌株在Czapek-Dox平板培養(yǎng)基上的菌落圖3Ij01菌株的孢子結(jié)構(gòu)圖4Ij01菌株的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步詳細(xì)闡述本發(fā)明。下述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，本發(fā)明主要闡述所述菌株的發(fā)明思想，實(shí)施方式不一一在實(shí)施例中追述，但并不因此限制本發(fā)明，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化，應(yīng)被視為等效的置換方式，包含在本發(fā)明內(nèi)。實(shí)施例1通過(guò)采集廣州市一種感病的斜紋夜蛾蟲尸、采用常規(guī)通用技術(shù)分離純化菌株、致病性測(cè)定、生物學(xué)特性及生產(chǎn)性狀比較、生產(chǎn)菌株確定等步驟獲得一株對(duì)斜紋夜蛾高效且穩(wěn)定性好的爪哇棒束孢Z^nhy.mww'cws(Friedrichs&Bally)菌株Ij01。孢子懸浮液配制從斜面菌種上挑取孢子，接入己經(jīng)滅菌的0.%的吐溫-80溶液中，用血球計(jì)數(shù)板測(cè)量孢子濃度，并調(diào)整到107孢子/mL。種子培養(yǎng)將2mL孢子懸浮液接種于98mL種子培養(yǎng)基中，在180r/min和26。C條件下?lián)u瓶培養(yǎng)23天即成種子液。種子培養(yǎng)基成分0.5%蛋白胨的Czapek-Dox:蛋白胨5g，NaN033g，K2HP041g，MgS047H200.5g，KCl0,5g，F(xiàn)eS047H200.01g，蔗糖30g，瓊脂1520g，水1000mL。發(fā)酵培養(yǎng)先將大米蒸熟，裝入保鮮袋中，待其冷卻至常溫后，接種上述種子液，接種比例為515%(V/W)，在2528。C條件下培養(yǎng)2周左右，收獲分生孢子。IjOl菌株的形態(tài)學(xué)特征如附圖1所示，在PDA平板上，菌落圓形，菌絲白色，孢子層灰紫色，無(wú)孢梗束。如附圖2所示，在Czapek-Dox平板上，菌落生長(zhǎng)較慢，近圓形，菌絲白色，孢子層顏色稍淡。如附圖3和附圖4所示，顯微鏡下菌絲透明，無(wú)色，寬度2.66±0.18^im;分生孢子梗與菌絲相似，不成孢梗束，長(zhǎng)10.38±3.26pm，寬2.73士0.25產(chǎn)孢細(xì)胞瓶梗葫蘆狀，最寬處直徑2.75±0.35pm，長(zhǎng)7.92士1.11pm，瓶梗直接著生于菌絲上，輪生，分生孢子生于瓶梗上，瓶梗葫蘆形；或者瓶梗著生于分生孢子梗上，分生孢子梗生于菌絲上；瓶梗；分生孢子無(wú)色，長(zhǎng)橢圓形，兩端較尖，長(zhǎng)5.47士1.23,，寬2.09士0.36,實(shí)施例2利用本菌株防治斜紋夜蛾參照實(shí)施例1所述方法收獲的分生孢子用吐溫-80溶液配制成濃度為106107分生孢子/mL的懸浮液，采用葉面噴霧法將本懸浮液施用于田間，在斜紋夜蛾的第二齡幼蟲發(fā)生高峰期施用。IjOl菌株對(duì)斜紋夜蛾的毒力在不同孢子濃度下，斜紋夜蛾2齡幼蟲的平均累計(jì)死亡率隨著處理濃度的升高與時(shí)間的延長(zhǎng)而顯著增加，見表l，當(dāng)濃度為50000個(gè)分生孢子/mL時(shí)，在處理后第6天和第8天，斜紋夜蛾的死亡率即分別達(dá)到48.33%和51.26%。觀測(cè)數(shù)據(jù)經(jīng)對(duì)數(shù)一幾率值分析法計(jì)算出半致死劑量，見表2，隨著處理后時(shí)間的延長(zhǎng)，半致死濃度逐步變小，1^5()值在105分生孢子個(gè)數(shù)/mL數(shù)量級(jí)上下波動(dòng)。致死中時(shí)間，當(dāng)濃度為1><105個(gè)孢子/mL時(shí)，致死中時(shí)為5.0天，95%置信區(qū)間是4.16.3天。表1IjOl菌株對(duì)斜紋夜蛾2齡幼蟲的殺蟲活性<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表2IjOl菌株對(duì)斜紋夜蛾2齡幼蟲的LQo及其95%置信區(qū)間(1()S個(gè)分生孢子/mL)處理后3天處理后5天處理后7天處理后9天處理后11天4.39(3.126.19)1.24(0.951.61)1.05(0.821.35)0.92(0.72U9)0.82(0.641.05)10權(quán)利要求1、一種爪哇棒束孢霉菌株，所述菌株Ij01分類地位屬于真菌門、有絲分裂孢子真菌類、絲孢綱、絲孢目、絲孢科、棒孢霉屬。保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏日期是2008年10月27日，保藏號(hào)CCTCCM208171。2、一種權(quán)利要求1所述爪哇棒束孢霉菌株的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于防治斜紋夜蛾。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述爪哇棒束孢霉菌株的應(yīng)用，其特征在于所述防治斜紋夜蛾是收獲爪哇棒束孢霉菌株分生孢子，用吐溫80溶液配制成濃度為106107分生孢子/11^的懸浮液，于斜紋夜蛾的第二齡幼蟲發(fā)生高峰期采用葉面噴霧法將懸浮液施用于田間。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述爪哇棒束孢霉菌株的應(yīng)用，其特征在于所述收獲爪哇棒束孢霉菌株分生孢子包括以下步驟(1)孢子懸浮液配制從斜面菌種上挑取孢子，接入已經(jīng)滅菌的0.05%的吐溫-80溶液中，用血球計(jì)數(shù)板測(cè)量孢子濃度，并調(diào)整到1()7孢子/mL;(2)種子培養(yǎng)將孢子懸浮液接種種子培養(yǎng)基中，在180r/min和26"C條件下?lián)u瓶培養(yǎng)23天即成種子液；(3)發(fā)酵培養(yǎng)將大米蒸熟，裝入保鮮袋中，待其冷卻至常溫后，接種種子液，在2528"C條件下培養(yǎng)2周，收獲分生孢子。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述爪哇棒束孢霉菌株的應(yīng)用，其特征在于步驟(2)所述種子培養(yǎng)基成分為0.5%蛋白胨的Czapek-Dox:蛋白胨,5g、NaN033g、K2HP041g、MgS047H200.5g、KCl0.5g、FeSO4'7H2O0.01g、蔗糖30g、瓊脂1520g和水1000mL。6、根據(jù)權(quán)利要求4所述爪哇棒束孢霉菌株的應(yīng)用，其特征在于步驟(3)所述接種種子液的比例為515%(V/W)。全文摘要本發(fā)明公開了一種爪哇棒束孢霉菌株及其應(yīng)用。所述高效爪哇棒束孢Isariajavanicus(Friedrichs&Bally)菌株Ij01分類地位屬于真菌門、有絲分裂孢子真菌類、絲孢綱、絲孢目、絲孢科、棒孢霉屬。所述菌株已在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏日期是2008年10月27日，保藏號(hào)CCTCCM208171。本發(fā)明所述高效爪哇棒束孢霉菌是一種昆蟲病原真菌，對(duì)防治斜紋夜蛾高效，作為一種活體生物農(nóng)藥，具有不同于現(xiàn)有化學(xué)殺蟲劑的全新作用機(jī)理、對(duì)環(huán)境無(wú)污染、無(wú)殘留的特征，適應(yīng)有機(jī)食品生產(chǎn)的要求。文檔編號(hào)A01P7/04GK101514325SQ20081021940公開日2009年8月26日申請(qǐng)日期2008年11月25日優(yōu)先權(quán)日2008年11月25日發(fā)明者任順祥,胡瓊波申請(qǐng)人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)