專利名稱：口腔菌叢改善劑、抗菌劑及生長(zhǎng)促進(jìn)劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及口腔菌叢改善劑、抗菌劑和生長(zhǎng)促進(jìn)劑，它們都含有神經(jīng)節(jié)苷脂作為活性成分。并且，本發(fā)明還涉及具有口腔菌叢改善作用、抗菌作用和生長(zhǎng)促進(jìn)作用并具有神經(jīng)節(jié)苷脂摻混其中的飲料和食品或飼料。
背景技術(shù)：
已知許多細(xì)菌生存在人口腔及消化道中，存在的種類約為300-400，數(shù)量超過(guò)60億。這些細(xì)菌在口腔中以菌落形式存在，形成口腔菌叢。口腔中的有害細(xì)菌可導(dǎo)致細(xì)菌感染如蛀牙(齲齒)和牙周疾病這兩種牙醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的主要疾病。大多數(shù)細(xì)菌不僅存在于唾液中而且存在于牙斑中(稱為口腔細(xì)菌簇)，粘附于牙齒表面和牙齒與牙齦間的間隙中。在由口腔細(xì)菌引起的疾病中，注意力主要集中在蛀牙(齲齒)和牙周疾病。因此，許多研究主要集中在齲齒細(xì)菌和牙周疾病細(xì)菌的抑菌劑和殺菌劑成分。防止齲齒的抗菌劑成分包括殺菌劑如氯己定、抗生素、非離子和陰離子(負(fù)離子)表面活性劑(例如，參見(jiàn)專利文獻(xiàn)1-4)。但是，一些抗菌劑成分也具有副作用如毒性。一些抗菌劑成分具有的缺點(diǎn)是，在口服抗菌劑成分時(shí)，抗菌劑成分存在不舒服的苦味或使牙齒或口腔粘膜染色。另一方面，近來(lái)發(fā)現(xiàn)，可利用每天作為食品攝取的物質(zhì)成分，例如茶中的兒茶素和來(lái)源于多種植物的多酚化合物作為活性成分。但是，在其功效方面仍然存在問(wèn)題有待解決。例如，如果從日常食品中獲取這些成分，不能達(dá)到這些成分所需的量。并且，還有許多現(xiàn)實(shí)問(wèn)題有待解決。例如，為增加效力，需要同時(shí)攝取對(duì)齲齒細(xì)菌特異性的抗體。而且，近來(lái)，從牙周疾病、口臭和口腔衛(wèi)生的角度來(lái)看，不僅需要控制齲齒細(xì)菌而且需要控制口腔細(xì)菌，并且，有一些關(guān)于抑制代表性牙周疾病細(xì)菌牙齦卟啉菌(Porphyromonas gingivalis)和中間普雷沃菌(Prevotella intermedia)的成分的報(bào)道(例如，參見(jiàn)非專利文獻(xiàn)1)。
構(gòu)成口腔菌叢的細(xì)菌包括有害致病菌(有害細(xì)菌)和無(wú)害且有用的細(xì)菌(有益細(xì)菌)?？谇恢幸阎挠泻?xì)菌包括表兄鏈球菌(Streptococcus sobrinus)、變異鏈球菌(Streptococcus mutans)、咽峽炎鏈球菌(Streptococcus anginosus)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等。已知的有用細(xì)菌包括緩癥鏈球菌(Streptococcus mitis)等。已知表兄鏈球菌是齲齒細(xì)菌，有害程度比變異鏈球菌強(qiáng)，眾所周知它是臨床上引起齲齒的主要原因。咽峽炎鏈球菌常常在患有食管癌的患者口腔中檢測(cè)到，提示咽峽炎鏈球菌可能是引起食管癌的原因。并且，金黃色葡萄球菌不僅眾所周知是各種膿腫的病原體，而且可引起并發(fā)癥，例如伴隨有免疫功能降低或病毒感染如流感的肺炎，這是疾病嚴(yán)重或死亡的直接原因。另一方面，緩癥鏈球菌通常存在于口腔中，占口腔細(xì)菌的80％，已知是形成恒定菌叢的主要細(xì)菌類型。
本發(fā)明涉及含有神經(jīng)節(jié)苷脂作為活性成分的口腔菌叢改善劑，涉及用于改善口腔菌叢的飲料、食品或飼料。已知神經(jīng)節(jié)苷脂通過(guò)拮抗性抑制病毒、細(xì)菌、細(xì)菌毒素等粘附氣管或消化道來(lái)防止感染。但是，直到目前還不知道，神經(jīng)節(jié)苷脂本身具有抗菌作用。還有一個(gè)新的發(fā)現(xiàn)是，神經(jīng)節(jié)苷脂具有對(duì)抗有害口腔細(xì)菌的抗菌作用并同時(shí)具有促進(jìn)有用口腔細(xì)菌生長(zhǎng)的作用。本發(fā)明的發(fā)明者已經(jīng)申請(qǐng)了發(fā)明專利，該專利描述了通過(guò)使用含鞘氨醇骨架作為活性成分的化合物來(lái)達(dá)到防止和改善牙周疾病的作用(參見(jiàn)專利文獻(xiàn)5)。具有鞘氨醇骨架的化合物包括神經(jīng)節(jié)苷脂。但是，該發(fā)明是基于以下發(fā)現(xiàn)具有鞘氨醇骨架的化合物具有抑制破骨細(xì)胞的骨再吸收作用，通過(guò)抑制牙槽骨的降低以有效防止牙周疾病。因此，該發(fā)明與本發(fā)明不同，本發(fā)明涉及神經(jīng)節(jié)苷脂具有抗菌作用的發(fā)現(xiàn)，并涉及具有對(duì)有害口腔細(xì)菌有抗菌作用和對(duì)常常同時(shí)聚居的有用口腔細(xì)菌有生長(zhǎng)促進(jìn)作用的口腔菌叢改善劑。
最近的研究揭示了以下問(wèn)題，具有上述抗菌成分的殺菌劑、抗生素和表面活性劑抑制了口腔中存在的幾乎所有細(xì)菌的生長(zhǎng)，因而這些殺菌劑、抗生素和表面活性劑具有優(yōu)異的殺菌作用，但是，這些殺菌劑、抗生素和表面活性劑在較大的程度上也破壞了口腔菌叢。抑制通常在口腔菌叢中占絕大多數(shù)的有用口腔細(xì)菌的生長(zhǎng)使得口腔菌叢不穩(wěn)定，可能導(dǎo)致有害口腔細(xì)菌的增殖。
因此，不是使用具有防止多種細(xì)菌的廣譜抗菌性殺菌劑來(lái)殺死口腔中的所有細(xì)菌，而是需要保留有用細(xì)菌以待利用，通過(guò)允許其在口腔中存在以提供活體所需的作用。
而且，需要具有對(duì)口腔中有害細(xì)菌有抗菌作用但對(duì)有用口腔細(xì)菌具有生長(zhǎng)促進(jìn)作用而不會(huì)抑制其生長(zhǎng)，且作用溫和的抗菌劑。
專利文獻(xiàn)1JP-A-09-286712專利文獻(xiàn)2JP-A-11-147814專利文獻(xiàn)3JP-A-09-240816專利文獻(xiàn)4JP-A-2001-064163專利文獻(xiàn)5JP-A-2001-158735非專利文獻(xiàn)1Ishikawa，Hiroki及其它四位，Bulletin of Japan PeriodonticsSociety，第45卷，第1期，105-112，2003。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的問(wèn)題本發(fā)明的目的是提供一種口腔菌叢改善劑以及用于改善口腔菌叢的飲料或食品，從疾病如齲齒和牙周病的角度來(lái)看，上述物質(zhì)不會(huì)殺死口腔中的所有細(xì)菌而是具有針對(duì)有害細(xì)菌的抗菌作用，并且對(duì)要保留的口腔細(xì)菌具有生長(zhǎng)促進(jìn)作用，從而在口腔中形成所需的菌叢。并且，本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供對(duì)口腔中有害細(xì)菌有抗菌作用的抗菌劑或抗菌飲料和食品。而且，本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供口腔細(xì)菌生長(zhǎng)促進(jìn)劑以及對(duì)要保留的口腔細(xì)菌具有生長(zhǎng)促進(jìn)作用的用于促進(jìn)口腔細(xì)菌的飲料或食品。
解決問(wèn)題的方法本發(fā)明的發(fā)明者對(duì)食品成分進(jìn)行了廣泛的研究，從疾病如齲齒和牙周病的角度來(lái)看，這些成分顯示出對(duì)抗口腔中有害細(xì)菌的抗菌作用，但從在口腔中形成所需菌叢的角度來(lái)看，這些成分對(duì)口腔中需保留的細(xì)菌具有生長(zhǎng)促進(jìn)作用。結(jié)果，本發(fā)明的發(fā)明者最近發(fā)現(xiàn)，從哺乳動(dòng)物乳汁中分離和純化的神經(jīng)節(jié)苷脂具有這種作用，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明。已知神經(jīng)節(jié)苷脂通過(guò)拮抗性抑制病毒、細(xì)菌、細(xì)菌毒素等粘附氣道(即氣管)或消化道來(lái)防止感染。但是，直到現(xiàn)在還不知道，神經(jīng)節(jié)苷脂本身具有抗菌作用。還有一個(gè)新的發(fā)現(xiàn)是，神經(jīng)節(jié)苷脂具有對(duì)抗有害口腔細(xì)菌的抗菌作用并同時(shí)具有促進(jìn)有用口腔細(xì)菌生長(zhǎng)的作用。如上所述，例如，已知表兄鏈球菌、咽峽炎鏈球菌和金黃色葡萄球菌是有害的口腔細(xì)菌。已知的有用細(xì)菌包括緩癥鏈球菌等。對(duì)從乳汁純化的神經(jīng)節(jié)苷脂對(duì)這些口腔細(xì)菌的作用的研究表明，所有神經(jīng)節(jié)苷脂具有對(duì)抗有害細(xì)菌的抗菌作用和對(duì)有用細(xì)菌的生長(zhǎng)促進(jìn)作用。就是說(shuō)，本發(fā)明涉及包含神經(jīng)節(jié)苷脂作為活性成分的口腔菌叢改善劑。而且，本發(fā)明還涉及具有神經(jīng)節(jié)苷脂摻混其中的用于改善口腔菌叢的食品、飲料或飼料。
而且，本發(fā)明涉及一種抗菌劑和抗菌飲料、食品或飼料，它們都包含神經(jīng)節(jié)苷脂作為活性成分且具有對(duì)抗口腔中有害細(xì)菌的抗菌作用。本發(fā)明抗菌劑、抗菌飲料、食品或飼料具有對(duì)抗有害口腔細(xì)菌的抗菌作用但對(duì)有用的口腔細(xì)菌無(wú)抗菌作用，因而這些抗菌劑以及抗菌飲料、食品或飼料非常有效。
而且，本發(fā)明還涉及生長(zhǎng)促進(jìn)劑和生長(zhǎng)促進(jìn)性飲料、食品或飼料，它們都包含神經(jīng)節(jié)苷脂作為活性成分并且對(duì)口腔中需要保留的口腔細(xì)菌具有生長(zhǎng)促進(jìn)作用。生長(zhǎng)促進(jìn)劑和生長(zhǎng)促進(jìn)性飲料、食品或飼料對(duì)有用的口腔細(xì)菌具有生長(zhǎng)促進(jìn)作用，但對(duì)有害的口腔細(xì)菌沒(méi)有生長(zhǎng)促進(jìn)作用而是對(duì)其具有抗菌作用，因而這些生長(zhǎng)促進(jìn)劑以及生長(zhǎng)促進(jìn)性飲料、食品或飼料非常有效。
發(fā)明效果通過(guò)神經(jīng)節(jié)苷脂來(lái)防止有害細(xì)菌的生長(zhǎng)和促進(jìn)總是存在的有用細(xì)菌的生長(zhǎng)可非常有效地將口腔菌叢維持在良好狀態(tài)，可用于防止口腔細(xì)菌引起的各種疾病。因此，將神經(jīng)節(jié)苷脂混合以形成制劑，提供了包含神經(jīng)節(jié)苷脂作為活性成分的口腔菌叢改善劑，其具有防止有害細(xì)菌生長(zhǎng)的作用和促進(jìn)總是存在的有用細(xì)菌的生長(zhǎng)的作用。并且，通過(guò)將神經(jīng)節(jié)苷脂混合入飲料或食品中，提供了用于改善口腔菌叢的飲料、食品或飼料。
而且，本發(fā)明可提供抗菌劑以及抗菌飲料、食品或飼料，它們都包含神經(jīng)節(jié)苷脂作為活性成分并具有對(duì)抗口腔中有害細(xì)菌的抗菌作用。
而且，本發(fā)明還提供了生長(zhǎng)促進(jìn)劑以及用于促進(jìn)生長(zhǎng)的飲料、食品或飼料，它們都包含神經(jīng)節(jié)苷脂作為活性成分并具有對(duì)需要保留的口腔細(xì)菌的生長(zhǎng)促進(jìn)作用。
本發(fā)明的最佳實(shí)施方式本發(fā)明中神經(jīng)節(jié)苷脂的來(lái)源沒(méi)有具體限制。但是，以乳汁為原料獲得的神經(jīng)節(jié)苷脂是理想的神經(jīng)節(jié)苷脂，用作口腔菌叢改善劑或用于改善口腔菌叢的飲料、食品或飼料；用作抗菌劑或用于抗菌飲料、食品或飼料；以及用作生長(zhǎng)促進(jìn)劑或用于促進(jìn)生長(zhǎng)的飲料、食品或飼料。乳汁包含許多神經(jīng)節(jié)苷脂GD3是乳汁作為理想原料的一個(gè)原因。在從乳汁制備神經(jīng)節(jié)苷脂或濃縮乳汁以增加神經(jīng)節(jié)苷脂的含量方面，其方法沒(méi)有具體限制。通過(guò)例如滲析、硫酸銨分級(jí)、凝膠過(guò)濾或等電點(diǎn)沉淀的方法，可從酪乳制備脂肪球膜形式的神經(jīng)節(jié)苷脂。并且，如JP-A-63-269992所述，用蛋白水解酶從乳汁制備分解物(decomposate)溶液并將該分解物溶液進(jìn)行凝膠過(guò)濾或超濾，可制備包含高含量神經(jīng)節(jié)苷脂的物質(zhì)?；蛘撸ㄟ^(guò)使用孔徑0.1μm或更小的微孔濾膜或通過(guò)采用截留分子量100,000Da或更高的超濾膜方法，來(lái)制備神經(jīng)節(jié)苷脂(JP-A-05-269353)。而且，通過(guò)水解神經(jīng)節(jié)苷脂GD3(JP-A-05-279379)或通過(guò)使唾液酸酶與神經(jīng)節(jié)苷脂GD3反應(yīng)，來(lái)制備神經(jīng)節(jié)苷脂GM3。
本發(fā)明提供了口腔菌叢改善劑或口腔菌叢改善性飲料、食品或飼料；抗菌劑或抗菌飲料、食品或飼料；以及生長(zhǎng)促進(jìn)劑或生長(zhǎng)促進(jìn)性飲料、食品或飼料。而且，在本發(fā)明中，不需要分離神經(jīng)節(jié)苷脂GD3和神經(jīng)節(jié)苷脂GM3，它們可以混合物形式使用。從節(jié)省純化有關(guān)的工作量和成本的角度出發(fā)，在本發(fā)明口腔菌叢改善劑或口腔菌叢改善性飲料、食品或飼料、抗菌劑或抗菌飲料、食品或飼料、以及生長(zhǎng)促進(jìn)劑或生長(zhǎng)促進(jìn)性飲料、食品或飼料中，優(yōu)選使用包含神經(jīng)節(jié)苷脂GT3、神經(jīng)節(jié)苷脂GM3和神經(jīng)節(jié)苷脂GD3的高神經(jīng)節(jié)苷脂含量的部分。
當(dāng)口腔菌叢改善劑、抗菌劑和生長(zhǎng)促進(jìn)劑用作藥物時(shí)，其形式?jīng)]有具體限制，這取決于給藥方法、它們所治療的疾病種類、形狀、部位及其它條件，可適當(dāng)?shù)剡x擇多種形式，例如片劑、膠囊、粉末劑、顆粒劑和飲料。因此，本發(fā)明上述口腔菌叢改善劑、抗菌劑和生長(zhǎng)促進(jìn)劑可單獨(dú)用作藥物或與通常使用的各種添加劑(即糖、淀粉和醇)如載體和稀釋劑組合使用。
本發(fā)明口腔菌叢改善劑、抗菌劑和生長(zhǎng)促進(jìn)劑可以多種形式制備和應(yīng)用于口腔，包括牙齒護(hù)理制劑如牙膏、牙粉和牙液、漱口水、含漱劑、口腔糊劑、牙齦按摩膏、含漱片和錠劑。
作為與本發(fā)明口腔菌叢改善劑、抗菌劑和生長(zhǎng)促進(jìn)劑混合的其它組分，可根據(jù)使用目的和模式采用合適的組分。例如，在牙粉的制備過(guò)程中，通常以5-95％，優(yōu)選15-60％的量摻入拋光劑如二水合磷酸二鈣、無(wú)水磷酸二鈣、磷酸一鈣、磷酸三鈣、碳酸鈣、焦磷酸鈣、不溶性偏磷酸鈉、無(wú)定形二氧化硅、結(jié)晶二氧化硅、硅鋁酸鹽、氧化鋁、氫氧化鋁、磷酸三鎂、碳酸鎂、硫酸鎂、二氧化鈦和樹(shù)脂。在糊劑組合物如牙膏的制備過(guò)程中，通常以0.3-5％的量摻入粘合劑如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羧甲基羥乙基纖維素鈉、羥乙基纖維素、海藻酸鈉、角叉菜膠、阿拉伯膠、黃原膠、西黃蓍膠、刺梧桐樹(shù)膠、聚乙烯醇、聚丙烯酸鈉、羧乙烯基聚合物和聚乙烯吡咯烷酮。在類似糊劑或液體組合物如牙膏或漱口水的制備過(guò)程中，通常以10-70％的量摻入粘度改進(jìn)劑如聚乙二醇、乙二醇、山梨糖醇、丙三醇、丙二醇、1，3-丁二醇、木糖醇(xylit)、麥芽糖醇(maltit)和乳糖醇(1actit)。而且，需要時(shí)，可適當(dāng)?shù)負(fù)饺胂憔腿绫『珊途G薄荷；芳香物質(zhì)如1-薄荷醇、香芹酮、丁香酚和茴香腦；甜味劑和防腐劑如糖精鈉、蛇菊苷、二氫查爾酮新橙皮苷(neohesperidyl dihydrochalcone)、甘草皂苷、紫蘇亭和對(duì)甲氧基肉桂醛。注意，在本發(fā)明中，還可摻入活性成分如mutanase、山梨酸、阿來(lái)西定、扁柏酚、氯化十六烷基吡啶鎓、烷基甘氨酸、二氨基乙基甘氨酸烷酯、尿囊素、ε-氨基己酸、氨甲環(huán)酸、甘菊環(huán)、維生素E、水溶性單或二磷酸酯、季銨化合物、氯化鈉和中藥提取物。
可制備本發(fā)明口腔菌叢改善性、抗菌性和生長(zhǎng)促進(jìn)性飲料或食品，并以應(yīng)用于口腔的多種形式使用，例如糖果、口香糖、冷飲料、乳品飲料、發(fā)酵乳、冰淇淋和生奶油。
為了將神經(jīng)節(jié)苷脂摻入飲料或食品中以制備本發(fā)明口腔菌叢改善性、抗菌性和生長(zhǎng)促進(jìn)性飲料和食品，例如，可將神經(jīng)節(jié)苷脂直接加入到飲料或食品的主要物質(zhì)中或?qū)⑸窠?jīng)節(jié)苷脂與水的混合物加入到飲料或食品(例如糖果、口香糖、冷飲料、乳品飲料、發(fā)酵乳、干酪食品、糕餅、面包和快餐)中。
可制備本發(fā)明口腔菌叢改善性、抗菌性和生長(zhǎng)促進(jìn)性飼料并以給予動(dòng)物的一般飼料形式(例如寵物食品)使用。為了將神經(jīng)節(jié)苷脂摻入飼料中以制備本發(fā)明口腔菌叢改善性、抗菌性和生長(zhǎng)促進(jìn)性飼料，例如，可將神經(jīng)節(jié)苷脂直接加入到飼料的主要物質(zhì)中或?qū)⑸窠?jīng)節(jié)苷脂與水的混合物加入到飼料如寵物食品中。
本發(fā)明各種口腔菌叢改善劑、抗菌劑和生長(zhǎng)促進(jìn)劑的攝入量或劑量通常不是固定的，其取決于口腔細(xì)菌的類型等，在體重60公斤的成人的情況下，攝入量或劑量通常為0.1-100毫克/天，或優(yōu)選為1-10毫克/天。
在本發(fā)明中，當(dāng)將神經(jīng)節(jié)苷脂摻入一般食品中時(shí)，神經(jīng)節(jié)苷脂相對(duì)于食品的量通常為0.1毫克-10克/100克，優(yōu)選為1毫克-1克/100克。當(dāng)神經(jīng)節(jié)苷脂的量小于0.1毫克/100克時(shí)，產(chǎn)生的作用弱，當(dāng)神經(jīng)節(jié)苷脂的量大于10克/100克時(shí)，產(chǎn)生的作用沒(méi)有很大提高。
注意，除非另有說(shuō)明，在本說(shuō)明書(shū)中，所有百分比(％)是重量百分比。
下面，將以試驗(yàn)實(shí)施例的方式更詳細(xì)地描述本發(fā)明。但是，本發(fā)明并不限于這些實(shí)施例。
試驗(yàn)例1(抗菌活性的分析)通過(guò)徑向擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)神經(jīng)節(jié)苷脂對(duì)口腔細(xì)菌的影響。就是說(shuō)，將3毫克胰蛋白酶處理的大豆培養(yǎng)基(Tryptic Soy medium，Difco)、20μl Tween20和100毫克瓊脂糖溶解在10毫升超純水中并滅菌。將100μl OD620為0.2(5×107cfu/ml)的細(xì)菌溶液加入到無(wú)菌培養(yǎng)基中，然后將所得混合液粉碎在培養(yǎng)皿中，室溫下固化。在各個(gè)固化的培養(yǎng)基中制備直徑約2.5毫米的孔，將5μl用于評(píng)價(jià)抗菌作用的來(lái)源于乳汁的各個(gè)神經(jīng)節(jié)苷脂GM3或神經(jīng)節(jié)苷脂GD3溶液加入到孔中，37℃下孵育1小時(shí)。并且，將0.6克胰蛋白酶處理的大豆培養(yǎng)基和100毫克瓊脂糖溶解在超純水中得到無(wú)菌培養(yǎng)基，將該培養(yǎng)基置于固化培養(yǎng)基上面，室溫下固化，然后，37℃下孵育箱中靜止培養(yǎng)。18小時(shí)后，測(cè)定培養(yǎng)基中形成的孔周圍清亮區(qū)的直徑。將通過(guò)抑制細(xì)菌生長(zhǎng)形成的清亮區(qū)的直徑(毫米)減去培養(yǎng)基中形成的孔的直徑(毫米)所得的長(zhǎng)度定義為抗菌活性。另一方面，當(dāng)培養(yǎng)基中孔周圍形成細(xì)菌菌落且觀察到不透明區(qū)時(shí)，認(rèn)為發(fā)生了生長(zhǎng)促進(jìn)作用，將不透明區(qū)的直徑(毫米)減去培養(yǎng)基中形成的孔的直徑(毫米)所得的長(zhǎng)度定義為生長(zhǎng)促進(jìn)活性。進(jìn)行試驗(yàn)的菌株包括有害的口腔細(xì)菌-表兄鏈球菌6715株、咽峽炎鏈球菌ATCC33397株和金黃色葡萄球菌Cowan I；聚居口腔細(xì)菌-無(wú)乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)ATCC46448株和內(nèi)氏放線菌(Actinomycesnaeslundii)JCM8349株；以及有用的口腔細(xì)菌緩癥鏈球菌GTC495株、緩癥鏈球菌ATCC6249株和緩癥鏈球菌ATCC903株。
枯草桿菌肽是從枯草桿菌分離的抗菌成分，用作陽(yáng)性對(duì)照，將顯示抗菌活性2.0毫米或更大的樣品定義為陽(yáng)性(具有抗菌活性)。對(duì)于生長(zhǎng)促進(jìn)作用，將具有生長(zhǎng)促進(jìn)活性1.0毫米或更大的樣品定義為陽(yáng)性(具有生長(zhǎng)促進(jìn)活性)。
表1桿菌肽 GM3 GD3表兄鏈球菌6715 ++ +咽峽炎鏈球菌ATCC33397++ +金黃色葡萄球菌Cowan I++ +緩癥鏈球菌GTC495 +* *緩癥鏈球菌ATCC6249 +* *緩癥鏈球菌ATCC903+* *無(wú)乳鏈球菌ATCC46448 +- -內(nèi)氏放線菌JCM8349+- -+具有抗菌活性-沒(méi)有抗菌活性*具有生長(zhǎng)促進(jìn)活性結(jié)果如表1所示。試驗(yàn)結(jié)果表明，加入桿菌肽作為陽(yáng)性對(duì)照的樣品顯示對(duì)所有受試菌株的抗菌活性。另一方面，所有加入神經(jīng)節(jié)苷脂GM3或神經(jīng)節(jié)苷脂GD3溶液的樣品顯示對(duì)有害的口腔細(xì)菌表兄鏈球菌6715株、咽峽炎鏈球菌ATCC33397株和金黃色葡萄球菌Cowan I株有抗菌活性，而對(duì)無(wú)乳鏈球菌ATCC46448株和內(nèi)氏放線菌JCM8349株既沒(méi)有抗菌活性也沒(méi)有生長(zhǎng)促進(jìn)活性，即對(duì)它們沒(méi)有作用。相反，加入神經(jīng)節(jié)苷脂GD3或神經(jīng)節(jié)苷脂GM3溶液的樣品對(duì)有用的細(xì)菌即三種緩癥鏈球菌株具有生長(zhǎng)促進(jìn)活性。
上述結(jié)果表明，從乳汁純化的神經(jīng)節(jié)苷脂GM3或神經(jīng)節(jié)苷脂GD3各自具有對(duì)有害細(xì)菌的抗菌作用和對(duì)有用細(xì)菌的生長(zhǎng)促進(jìn)作用。
參考例1
(從乳汁制備神經(jīng)節(jié)苷脂)根據(jù)制備神經(jīng)節(jié)苷脂的常規(guī)方法(JP-A-63-269992)，制備來(lái)源于乳汁的神經(jīng)節(jié)苷脂。就是說(shuō)，在40℃下，將蛋白水解酶胰蛋白酶作用于含神經(jīng)節(jié)苷脂的乳汁物質(zhì)15小時(shí)以分解蛋白質(zhì)，將所得蛋白質(zhì)分解產(chǎn)物溶液透析通過(guò)截留分子量10,000的膜，得到神經(jīng)節(jié)苷脂含量高的部分。凍干神經(jīng)節(jié)苷脂含量高的部分，然后溶解在氯仿-甲醇(1∶1)溶液中。將所得溶液通過(guò)陰離子交換樹(shù)脂(DEAE-SephadexPharmacia出品)，以使神經(jīng)節(jié)苷脂吸附在樹(shù)脂上。然后，用氯仿-甲醇(1∶1)溶液沖洗陰離子交換樹(shù)脂，用0.1M醋酸鈉水溶液-甲醇溶液洗脫神經(jīng)節(jié)苷脂。減壓下將洗脫液濃縮至干，透析除去鹽，凍干。用薄層色譜法(間苯二酚法)檢測(cè)所得神經(jīng)節(jié)苷脂部分(部分A)，結(jié)果為神經(jīng)節(jié)苷脂GM3∶神經(jīng)節(jié)苷脂GD3∶神經(jīng)節(jié)苷脂GT3＝10∶90∶1。在本發(fā)明口腔菌叢改善劑或口腔菌叢改善性飲料、食品或飼料；抗菌劑或抗菌飲料、食品或飼料；以及生長(zhǎng)促進(jìn)劑或生長(zhǎng)促進(jìn)性飲料、食品或飼料中，不需要分離神經(jīng)節(jié)苷脂GD3和神經(jīng)節(jié)苷脂GM3，可作為兩者的混合物使用。在這種情況下，使用部分A。
另外，對(duì)部分A進(jìn)行分級(jí)(fractionate)。就是說(shuō)，將部分A懸浮在氯仿-甲醇(8∶8(v/v))溶液中，將該懸浮液加入到硅膠柱上(Iatrobead；Iatron Labotries，Inc出品)，并進(jìn)行從氯仿-甲醇溶液8∶2(v/v)到2∶8(v/v)的梯度洗脫，以將其分級(jí)成神經(jīng)節(jié)苷脂GM3部分(部分B)、神經(jīng)節(jié)苷脂GD3部分(部分C)和神經(jīng)節(jié)苷脂GT3部分(部分D)。薄層色譜法檢測(cè)各個(gè)神經(jīng)節(jié)苷脂部分表明，各個(gè)神經(jīng)節(jié)苷脂部分純度為95％或更高。
實(shí)施例1(制備口腔菌叢改善劑)根據(jù)日本藥典第13版制劑附錄一般準(zhǔn)則(General Rule for Preparations ofCommentary)中關(guān)于“粉末”的條款，將1.0重量％來(lái)源于乳汁的神經(jīng)節(jié)苷脂GD3(參考例1中的神經(jīng)節(jié)苷脂部分C)與59.0重量％乳糖(日本藥典)和40.0重量％馬鈴薯淀粉(日本藥典)均勻混合，產(chǎn)生本發(fā)明口腔菌叢改善性粉末。
實(shí)施例2
(制備抗菌性粉末)采用實(shí)施例1所述相同的配方和方法，制備作用于有害口腔細(xì)菌的本發(fā)明抗菌性粉末。
實(shí)施例3(制備生長(zhǎng)促進(jìn)性粉末)采用實(shí)施例1所述相同的配方和方法，制備作用于有益口腔細(xì)菌的本發(fā)明生長(zhǎng)促進(jìn)性粉末。
實(shí)施例4(制備片劑)按照表2所示配方混合物質(zhì)，并通過(guò)壓片機(jī)(Y-5010-Q，F(xiàn)uji MedicalMachine制造)(條件1-4噸)壓制所得混合物，產(chǎn)生本發(fā)明口腔菌叢改善性片劑。
表2原料名稱含水結(jié)晶葡萄糖 93.0鈣 5.0糖酯1.0來(lái)源于乳汁的神經(jīng)節(jié)苷脂GM3 0.5(參考例1中的神經(jīng)節(jié)苷脂部分B)芳香劑 0.5100.0實(shí)施例5(制備果汁飲料)根據(jù)表3所示配方混合物質(zhì)，加熱滅菌，并包裝在容器中，以形成本發(fā)明口腔菌叢改善性果汁飲料。
表3原料名稱重量％混合的異構(gòu)化糖 15.0橘子汁 10.0鈣 0.5檸檬酸 0.5芳香劑 0.2來(lái)源于乳汁的神經(jīng)節(jié)苷脂 0.1(參考例1中的神經(jīng)節(jié)苷脂部分A)水 73.7100.0實(shí)施例6(制備加工的干酪)根據(jù)表4所示配方混合物質(zhì)，乳化溫度85℃下乳化，產(chǎn)生本發(fā)明的口腔菌叢改善性加工干酪。
表4原料名稱重量％高達(dá)干酪43.0切達(dá)干酪43.0檸檬酸鈉2.0來(lái)源于乳汁的鈣 1.0來(lái)源于乳汁的神經(jīng)節(jié)苷脂 0.5(參考例1中的神經(jīng)節(jié)苷脂部分A)水 10.5100.0實(shí)施例7(制備牙膏)根據(jù)表5所示，在制劑中混合物質(zhì)，形成捏合產(chǎn)物，將所得物質(zhì)包裝在容器中，以形成本發(fā)明口腔菌叢改善性牙膏。
表5原料名稱重量％甘油55.0二氧化硅20.0二水合磷酸二鈣 10.0來(lái)源于乳汁的神經(jīng)節(jié)苷脂 5.0(參考例1中的神經(jīng)節(jié)苷脂部分A)黃原膠 1.0薄荷芳香劑 1.0二氧化鈦0.7氟化鈉 0.3蒸餾水 7.0100.0實(shí)施例8(制備牙膏)采用如實(shí)施例7所述相同的配方和方法，制備作用于有害口腔細(xì)菌的本發(fā)明抗菌牙膏。
實(shí)施例9(制備牙膏)采用如實(shí)施例7所述相同的配方和方法，制備作用于有益口腔細(xì)菌的本發(fā)明生長(zhǎng)促進(jìn)性牙膏。
實(shí)施例10(制備含漱液)根據(jù)表6所示配方混合物質(zhì)，制備本發(fā)明口腔菌叢改善性含漱液。
表6原料名稱重量％乙醇8.0山梨糖醇5.0丙二醇 5.0來(lái)源于乳汁的神經(jīng)節(jié)苷脂 5.0(參考例1中的神經(jīng)節(jié)苷脂部分A)芳香劑 1.0蒸餾水 76.0實(shí)施例11(制備口腔菌叢改善性口香糖)在表7所示配方中混合物質(zhì)，并用常規(guī)方法模制，產(chǎn)生本發(fā)明口腔菌叢改善性口香糖。
表7原料名稱 重量％口香糖膠基 20.0玉米糖漿 10.0右旋糖單水合物 10.0乳糖 5.0甘油 5.0來(lái)源于乳汁的神經(jīng)節(jié)苷脂 1.0(參考例1中的神經(jīng)節(jié)苷脂部分A)水 49.0100.0實(shí)施例12(制備抗菌性口香糖)采用如實(shí)施例11所述相同的配方和方法，制備作用于有害口腔細(xì)菌的本發(fā)明抗菌性口香糖。
實(shí)施例13(制備生長(zhǎng)促進(jìn)性口香糖)采用如實(shí)施例11所述相同的配方和方法，制備作用于有益口腔細(xì)菌的本發(fā)明生長(zhǎng)促進(jìn)性口香糖。
(制備口腔菌叢改善性狗糧)根據(jù)表8所示配方混合物質(zhì)，120℃下滅菌4分鐘，以產(chǎn)生本發(fā)明口腔菌叢改善性狗糧。
表8原料名稱 重量％脫脂奶粉 14.0豆餅 12.0棕櫚油23.2大豆油4.0玉米油2.0纖維素2.8礦物質(zhì)混合物 2.0來(lái)源于乳汁的神經(jīng)節(jié)苷脂1.0(參考例1中的神經(jīng)節(jié)苷脂部分A)水 39.0100.0工業(yè)可利用性本發(fā)明口腔菌叢改善劑、抗菌劑和生長(zhǎng)促進(jìn)劑本身可用作藥物，此外，需要時(shí)，口腔菌叢改善劑、抗菌劑和生長(zhǎng)促進(jìn)劑可與各種常用的添加劑如載體和稀釋劑組合使用。
而且，根據(jù)本發(fā)明，可將神經(jīng)節(jié)苷脂直接加入到飲料或食品的主要物質(zhì)中或?qū)⑸窠?jīng)節(jié)苷脂與水的混合物加入到可應(yīng)用于口腔的各種形式中，例如糖果、口香糖、冷飲料、乳品飲料、發(fā)酵乳、冰淇淋和生奶油。這樣，可制備口腔菌叢改善性、抗菌性和生長(zhǎng)促進(jìn)性飲料和食品。
而且，可將神經(jīng)節(jié)苷脂直接加入到飼料的主要物質(zhì)中。或者，將神經(jīng)節(jié)苷脂與水的混合物制備成通?？山o予動(dòng)物和加入到動(dòng)物飼料中的形式，例如寵物食品。這樣，可制備口腔菌叢改善性、抗菌性和生長(zhǎng)促進(jìn)性飼料。
權(quán)利要求
1.一種口腔菌叢改善劑，其包含神經(jīng)節(jié)苷脂作為活性成分。
2.如權(quán)利要求1所述的口腔菌叢改善劑，其特征在于，所述神經(jīng)節(jié)苷脂是神經(jīng)節(jié)苷脂GD3和/或神經(jīng)節(jié)苷脂GM3。
3.一種包含摻入其中的神經(jīng)節(jié)苷脂的口腔菌叢改善性飲料、食品或飼料。
4.一種針對(duì)表兄鏈球菌、咽峽炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌的抗菌劑，其包含神經(jīng)節(jié)苷脂作為活性成分。
5.一種針對(duì)緩癥鏈球菌的生長(zhǎng)促進(jìn)劑，其包含神經(jīng)節(jié)苷脂作為活性成分。
6.一種包含神經(jīng)節(jié)苷脂的對(duì)抗表兄鏈球菌、咽峽炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌的抗菌性飲料、食品或飼料。
7.一種包含摻入其中的神經(jīng)節(jié)苷脂的針對(duì)緩癥鏈球菌的生長(zhǎng)促進(jìn)性飲料、食品或飼料。
全文摘要
旨在提供一種能夠在口腔中形成有利菌叢的口腔菌叢改善劑，以及用于改善口腔菌叢的食品或飲料。含神經(jīng)節(jié)苷脂作為活性成分的口腔菌叢改善劑以及含神經(jīng)節(jié)苷脂的用于改善口腔菌叢的食品、飲料或飼料顯示了對(duì)口腔中從齲齒和疾病如牙周疾病來(lái)看是不希望的有害細(xì)菌的抗菌作用，并顯示了對(duì)口腔中需要保留的有用細(xì)菌的生長(zhǎng)促進(jìn)作用。并且，在抗菌劑或抗菌性飲料、食品或飼料；生長(zhǎng)促進(jìn)劑或用于促進(jìn)生長(zhǎng)的食品、飲料或飼料中，神經(jīng)節(jié)苷脂是有效的活性成分。
文檔編號(hào)A23K1/16GK1950093SQ20058001441
公開(kāi)日2007年4月18日 申請(qǐng)日期2005年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月7日
發(fā)明者川上浩, 花田信弘, 今井奨 申請(qǐng)人:雪印乳業(yè)株式會(huì)社