專利名稱：缺陷短波毛單胞菌及其發(fā)酵方法、制劑與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種缺陷短波毛單胞菌及含有該缺陷短波毛單胞菌的制劑，該缺陷短波毛單胞菌的發(fā)酵方法與該缺陷短波毛單胞菌在煙葉種植方面的應(yīng)用以及基于該應(yīng)用的煙葉種植方法。
背景技術(shù)：
目前，為提高煙葉產(chǎn)量，促進(jìn)煙葉細(xì)胞分裂，所采取的方法通常是在煙葉表面噴施赤霉素等化學(xué)調(diào)節(jié)劑。雖然利用化學(xué)調(diào)節(jié)劑能在一定程度上增加煙葉產(chǎn)量，但使用化學(xué)調(diào)節(jié)劑對煙葉品質(zhì)的提高并沒有明顯的幫助，還容易造成煙葉復(fù)烤后變黑等負(fù)面效果，煙葉等級下降。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是提供一種既能幫助提高煙葉產(chǎn)量，同時能幫助提高煙葉品質(zhì)的缺陷短波毛單胞菌，以及含有該缺陷短波毛單胞菌的制劑，該制劑能提高煙葉品質(zhì)與產(chǎn)量，同時提供一種繁殖該缺陷短波毛單胞菌的發(fā)酵方法與該缺陷短波毛單胞菌在提高煙葉產(chǎn)量與數(shù)量上的應(yīng)用以及基于該應(yīng)用的煙葉種植方法。為本發(fā)明的第一個發(fā)明目的，本發(fā)明提供了保藏于CGMCC保藏號為CGMCC NO. 4122的缺陷短波毛單胞菌，該生物材料樣品保藏單位地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏日期2010年08月23日，分類命名的拉丁名稱Brevundimonas diminuta，本發(fā)明的缺陷短波毛單胞菌，該菌能促進(jìn)煙葉細(xì)胞分裂進(jìn)而增大煙葉面積、增加煙葉產(chǎn)量；提高煙葉成熟度和油分，煙葉復(fù)烤后顏色金黃；減少外源化學(xué)物質(zhì)使用量，實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)全生態(tài)煙葉的目標(biāo)。為達(dá)到本發(fā)明的第二個發(fā)明目的，本發(fā)明提供了一種促進(jìn)煙葉生長用制劑，所述制劑為保藏于CGMCC保藏號為CGMCC NO. 4122的缺陷短波毛單胞菌的溶液。本發(fā)明的促進(jìn)煙葉生長用制劑，制劑所含菌能促進(jìn)煙葉細(xì)胞分裂進(jìn)而增大煙葉面積、增加煙葉產(chǎn)量；提高煙葉成熟度和油分，煙葉復(fù)烤后顏色金黃；減少外源化學(xué)物質(zhì)使用量，實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)全生態(tài)煙葉的目標(biāo)。為達(dá)到本發(fā)明的第三個發(fā)明目的，本發(fā)明提供了保藏于CGMCC保藏號為CGMCC NO. 4122的缺陷短波毛單胞菌在促進(jìn)煙葉生長方面的應(yīng)用。該應(yīng)用能促進(jìn)煙葉細(xì)胞分裂進(jìn)而增大煙葉面積、增加煙葉產(chǎn)量；提高煙葉成熟度和油分，煙葉復(fù)烤后顏色金黃；減少外源化學(xué)物質(zhì)使用量，實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)全生態(tài)煙葉的目標(biāo)。為達(dá)到本發(fā)明的第四個發(fā)明目的，本發(fā)明提供了保藏于CGMCC保藏號為CGMCC NO. 4122的缺陷短波毛單胞菌的發(fā)酵培養(yǎng)方法，包括如下步驟a、菌種活化從斜面保藏管中取1環(huán)保藏號為CGMCC NO. 4122的菌種的菌苔至 30mL液體培養(yǎng)基中，37°C、200—250rpm搖瓶培養(yǎng)20—M小時，制得培養(yǎng)好的搖瓶A ；
b、發(fā)酵罐培養(yǎng)將培養(yǎng)好的搖瓶A接種到發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)，接種方式采用火焰接種，接種量為1%，培養(yǎng)溫度37°C，攪拌轉(zhuǎn)速180—200rpm，通氣量1 1，罐壓0. 02MPa， 培養(yǎng)時間發(fā)酵時間M 36h，完成發(fā)酵；所述斜面的固體培養(yǎng)基制備方法如下25重量份的豆芽加100重量份的去離子水煮沸20分鐘，過濾除渣，補(bǔ)足蒸發(fā)的水分，加5重量份的葡萄糖、2重量份的瓊脂粉溶解混勻，調(diào)整PH值至7. 0，121°C滅菌30分鐘后制得固體培養(yǎng)基，所述菌株搖瓶與發(fā)酵罐培養(yǎng)用培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，制備方法如下25重量份的豆芽加100重量份的去離子水煮沸20分鐘，過濾除渣，補(bǔ)足蒸發(fā)掉的水分，加入5重量份的葡萄糖溶解混勻，調(diào)整PH值至7. 0,121°C滅菌30分鐘后制得。使用本發(fā)酵方法能有效促使保藏號為CGMCC NO. 4122的缺陷短波毛單胞菌生長繁殖。為達(dá)到本發(fā)明的第五個發(fā)明目的，本發(fā)明提供了一種煙葉的栽培方法，將含有保藏于CGMCC保藏號為CGMCC NO. 4122的缺陷短波毛單胞菌的溶液經(jīng)400倍稀釋后噴施于煙葉表面。使用該方法能有效促進(jìn)煙葉細(xì)胞分裂進(jìn)而增大煙葉面積、增加煙葉產(chǎn)量；提高煙葉成熟度和油分，煙葉復(fù)烤后顏色金黃；減少外源化學(xué)物質(zhì)使用量，實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)全生態(tài)煙葉的目標(biāo)。作為上述栽培方法的優(yōu)化，在煙葉打頂后第5天將含有如權(quán)利要求1所述的缺陷短波毛單胞菌的溶液稀釋液噴施于煙葉表面。作為上述栽培方法的優(yōu)化，所述噴施過程進(jìn)行至葉面滴水為止。作為上述栽培方法的優(yōu)化，所述噴施過程于晴天午后進(jìn)行。
具體實(shí)施例方式為詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容、構(gòu)造特征、所實(shí)現(xiàn)目的及效果，以下結(jié)合實(shí)施方式詳予說明。制備斜面的固體培養(yǎng)基取25重量份的豆芽加100重量份的去離子水煮沸20分鐘，過濾除渣，補(bǔ)足蒸發(fā)掉的水分，加5重量份的葡萄糖、2重量份的瓊脂粉溶解混勻，調(diào)整 PH值至7. 0,121°C滅菌30分鐘后制得固體培養(yǎng)基，制備菌株搖瓶與發(fā)酵罐培養(yǎng)用液體培養(yǎng)基取25重量份的豆芽加100重量份的去離子水煮沸20分鐘，過濾除渣，補(bǔ)足蒸發(fā)掉的水分，加入5重量份的葡萄糖溶解混勻，調(diào)整 pH值至7. 0，121°C滅菌30分鐘后制得?；罹鷶?shù)測定滅菌的固體培養(yǎng)基趁熱倒到無菌的培養(yǎng)皿內(nèi)(每個培養(yǎng)皿裝約 20mL)冷卻制成平板，菌液依梯度稀釋至10_8，依次取10-8、10-7、10-6、10_5菌液各0. ImL于平板中央，每個濃度重復(fù)3次，無菌涂布棒涂布均勻，37°C培養(yǎng)Mh，取菌落數(shù)在30-300的平板作為計數(shù)平板，計算菌液活菌數(shù)。菌種的發(fā)酵培養(yǎng)過程如下a.菌種活化從斜面保藏管中取1環(huán)保藏號為CGMCC NO. 4122的菌種的菌苔至 30mL液體培養(yǎng)基中37°C、200—250rpm培養(yǎng)20—M小時，制得培養(yǎng)好的搖瓶A ；b.發(fā)酵罐培養(yǎng)將培養(yǎng)好的搖瓶A接種到發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)，接種方式采用火焰接
4種，接種量為1%，培養(yǎng)溫度37°C，攪拌轉(zhuǎn)速180—200rpm，通氣量1 1，罐壓0. 02MPa， 培養(yǎng)時間發(fā)酵時間M 36h，完成發(fā)酵；將發(fā)酵液無菌包裝，制得促進(jìn)煙葉生長用制劑。將制得的促進(jìn)煙葉生長用制劑做煙葉種植對比試驗(yàn)試驗(yàn)地點(diǎn)貴州省務(wù)川縣煙草科技示范園；供試烤煙品種K326本試驗(yàn)設(shè)三個處理(1)液體菌劑；(2)清水對照；( 常規(guī)對照。試驗(yàn)設(shè)計采用完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計，共3個區(qū)組。種植密度為1100株/畝，株距0.5m，行距l(xiāng).aii，各處理間設(shè) 1保護(hù)行。各種栽培管理措施按照當(dāng)?shù)馗弋a(chǎn)優(yōu)質(zhì)烤煙栽培技術(shù)精心管理。各處理煙葉達(dá)到工藝成熟時進(jìn)行采收，采用三段式烘烤工藝烘烤。噴施時間煙葉打頂后第5天噴施。噴施方法將菌液經(jīng)400倍稀釋后噴施于煙葉表面，噴施量以葉面滴水為宜；噴施最好選擇在晴天午后進(jìn)行，避免雨天及晴天正午噴施。試驗(yàn)效果如下表所示
權(quán)利要求
1.保藏于CGMCC保藏號為CGMCCNO. 4122的缺陷短波毛單胞菌。
2.一種促進(jìn)煙葉生長用制劑，其特征在于，所述制劑為含有權(quán)利要求1所述缺陷短波毛單胞菌的溶液。
3.保藏于CGMCC保藏號為CGMCCNO. 4122的缺陷短波毛單胞菌在促進(jìn)煙葉生長方面的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的缺陷短波毛單胞菌的發(fā)酵培養(yǎng)方法，包括如下步驟；a、菌種活化從斜面保藏管中取1環(huán)保藏號為CGMCCNO. 4122的菌種的菌苔至30mL液體培養(yǎng)基中，37°C、200-250rpm搖瓶培養(yǎng)20-- 小時，制得培養(yǎng)好的搖瓶A ；b、發(fā)酵罐培養(yǎng)將培養(yǎng)好的搖瓶A接種到發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)，接種方式采用火焰接種，接種量為1%，培養(yǎng)溫度37°C，攪拌轉(zhuǎn)速180—200rpm，通氣量1 1，罐壓0. 02MPa，培養(yǎng)時間發(fā)酵時間24 36h，完成發(fā)酵；所述斜面的固體培養(yǎng)基制備方法如下25重量份的豆芽加100重量份的去離子水煮沸 20分鐘，過濾除渣，補(bǔ)足蒸發(fā)的水分，加5重量份的葡萄糖、2重量份的瓊脂粉溶解混勻，調(diào)整pH值至7. 0,121°C滅菌30分鐘后制得固體培養(yǎng)基；所述菌株搖瓶與發(fā)酵罐培養(yǎng)用培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，制備方法如下25重量份的豆芽加100重量份的去離子水煮沸20分鐘，過濾除渣，補(bǔ)足蒸發(fā)掉的水分，加入5重量份的葡萄糖溶解混勻，調(diào)整PH值至7. 0,121°C滅菌30分鐘后制得。
5.一種煙葉的栽培方法，其特征在于，將含有如權(quán)利要求1所述的缺陷短波毛單胞菌的溶液噴施于煙葉表面。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的栽培方法，其特征在于，在煙葉打頂后第5天將含有如權(quán)利要求1所述的缺陷短波毛單胞菌的溶液經(jīng)400倍稀釋后噴施于煙葉表面。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的栽培方法，所述噴施過程進(jìn)行至葉面滴水為止。
8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的栽培方法，所述噴施過程于晴天午后進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明提供了保藏于CGMCC保藏號為CGMCC NO.4122的缺陷短波毛單胞菌及含有該缺陷短波毛單胞菌的制劑，該缺陷短波毛單胞菌的發(fā)酵方法與該缺陷短波毛單胞菌在煙葉種植方面的應(yīng)用以及基于該應(yīng)用的煙葉種植方法。本發(fā)明的缺陷短波毛單胞菌，該菌能促進(jìn)煙葉細(xì)胞分裂進(jìn)而增大煙葉面積、增加煙葉產(chǎn)量；提高煙葉成熟度和油分，煙葉復(fù)烤后顏色金黃；減少外源化學(xué)物質(zhì)使用量，實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)全生態(tài)煙葉的目標(biāo)。
文檔編號C12N1/20GK102191193SQ20111002439
公開日2011年9月21日 申請日期2011年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月21日
發(fā)明者丁延芹, 姚良同, 杜秉海, 董少英 申請人:福州農(nóng)博士生物技術(shù)有限公司