專利名稱：芍藥離體組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及芍藥的組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
芍藥(Paeonia lactiflora Pall.)為芍藥科(Paeoniaceae)芍藥屬(Paeonia)多年生宿根草本植物，也是我國著名的觀賞、藥用植物，栽培歷史悠久，花大色艷，香氣濃郁，被奉為“花相”。經(jīng)過幾千年的人工栽培選育，芍藥優(yōu)良品種的繁殖主要以無性分株法為主，3～5年分株一次，繁殖周期長、繁殖系數(shù)低，給芍藥的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展帶來困難。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的旨在建立芍藥組織培養(yǎng)再生系統(tǒng)，為芍藥優(yōu)良品種的快速無性繁殖提供一種高效可行的技術(shù)途徑。
本發(fā)明剪取帶芽鱗芍藥莖尖，洗凈后吸去水分，置于酒精中消毒，除去芽鱗、切取莖尖，用NaHClO溶液消毒，無菌水沖洗干凈后，接種至添加VC50mg·L-1、pH5.6的1/2MS培養(yǎng)基中。培養(yǎng)室條件為溫度25℃±1，光照時(shí)間12～14h/d，光照強(qiáng)度2000lx±100lx。
本發(fā)明為芍藥優(yōu)良品種的快速無性繁殖提供一種高效可行的技術(shù)途徑。
上述消毒灑精濃度為70％酒精，消毒時(shí)間為10～15s。
上述NaHClO溶液的濃度為0.1％，消毒時(shí)間為10～15min。
沖冼水用無菌水，沖洗3～5次后接種至培養(yǎng)基中。
本發(fā)明的芽增殖培養(yǎng)基以1/2MS+0.5BAmg·L-1+1.0GAmg·L-1為優(yōu)選。
其中，1/2MS培養(yǎng)基中無機(jī)鹽大量元素重量為MS培養(yǎng)基正常含量的50％。
莖尖培養(yǎng)的取材時(shí)間在10～11月，或于9月下旬掘起莖芽置4℃條件下冷藏5～6周后接種培養(yǎng)。
采用芍藥莖尖進(jìn)行離體組織培養(yǎng)，35～40天后即有幼芽增殖，可實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種的快速繁殖，給芍藥栽培的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展帶來決勝性依據(jù)。
具體實(shí)例
1材料與方法莖尖培養(yǎng)材料選自重瓣型品種“大富貴(P.lactiflora‘Da Fu Gui’)”休眠芽。
于10-11月取地栽芍藥休眠芽為供試材料，或于9月下旬掘起莖芽置4℃冷藏預(yù)處理5周后取芽離體培養(yǎng)。剪取帶芽鱗莖尖，用毛刷在洗潔精溶液中清洗干凈，置于流水沖洗30min后，吸水紙吸去水分，轉(zhuǎn)入70％酒精中消毒15s；無菌水沖洗后除去芽鱗、切取莖尖，用0.1％NaHClO溶液消毒15min，無菌水沖洗3～5次，接種至1/2MS+0.5BAmg·L-1+1.0GAmg·L-1培養(yǎng)基中；其中，1/2MS培養(yǎng)基中無機(jī)鹽大量元素重量為MS培養(yǎng)基正常含量的50％、蔗糖3％、瓊脂0.8％、VC50mg·L-1，pH5.6。培養(yǎng)室條件為溫度25℃±1，光照時(shí)間14h/d，光照強(qiáng)度2000lx。
2結(jié)果與分析2.1不同取樣時(shí)間對(duì)莖尖培養(yǎng)的影響表1 取材時(shí)期對(duì)莖尖培養(yǎng)的影響

*培養(yǎng)基1/2MS+0.5BAmg·L-1+1.0GAmg·L-1由表1可以看出，露地栽培品種的適宜取材時(shí)間在10～11月或于9月下旬掘起莖芽置4℃冷藏處理5～6周，離體培養(yǎng)的成活率和分化率最高。此時(shí)接種，休眠芽萌動(dòng)和生長迅速；或于9月下旬掘起莖芽置4℃冷藏處理5～6周，分化的試管苗健壯。取材時(shí)間在2月或4℃冷藏8～9周處理，大部分材料的芽鱗已經(jīng)裂開、芽已伸長，導(dǎo)致試材消毒困難、污染率高。其它時(shí)間因芽的休眠尚未徹底解除，內(nèi)部存在抑制物質(zhì)，生長緩慢，成活率和分化率均較低。
2.2不同培養(yǎng)基對(duì)芽增殖的影響表2 不同培養(yǎng)基對(duì)莖尖培養(yǎng)的影響

*取材時(shí)間為1月，每組接種數(shù)30，統(tǒng)計(jì)平均值。
試驗(yàn)結(jié)果(表2)表明，BA與GA組合的培養(yǎng)基芽分化效果優(yōu)于BA與KT組合。1.5BAmg·L-1+0.5KTmg·L-1培養(yǎng)基中的叢生芽、葉片數(shù)量較少，苗生長較高。在添加BA、GA的培養(yǎng)基中，叢生芽、葉片數(shù)量較多，苗壯。繼代培養(yǎng)中，切取單芽接種，35～40d后基部形成新芽；但隨著代數(shù)增加，叢生芽、葉數(shù)量逐漸降低，苗生長轉(zhuǎn)弱，部分芽尖、葉枯死，出現(xiàn)白化苗；到第四代已基本轉(zhuǎn)為玻璃苗、白化苗，且褐變嚴(yán)重。芽增殖培養(yǎng)以1/2MS+0.5BAmg·L-1+1.0GAmg·L-1為最佳培養(yǎng)基。
3總結(jié)芍藥莖尖離體培養(yǎng)，不同取材時(shí)間的培養(yǎng)效果不一樣，以10-11月份或于9月下旬掘起莖芽置4℃冷藏處理5～6周為最佳。取材過早休眠尚未解除，生長較慢，苗弱；過遲則芽已生長，滅菌困難。叢芽增殖培養(yǎng)周期35～40d，最佳增殖培養(yǎng)基1/2MS+0.5BAmg·L-1+1.0GAmg·L-1。
上述MS培養(yǎng)基的全名為Murashige and Skoon(1962)培養(yǎng)基BA的中文化學(xué)名為6-芐基氨基嘌呤GA的中文化學(xué)名為赤霉素KT的中文化學(xué)名為6-糠基氨基嘌呤。
權(quán)利要求
1.芍藥離體組織培養(yǎng)方法，其特征在于剪取帶芽鱗芍藥莖尖，洗凈后吸去水分，置于酒精中消毒，除去芽鱗、切取莖尖，用NaHClO溶液消毒，無菌水沖洗干凈后，接種至添加Vc50mg·L-1、pH5.6的1/2MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)室條件為溫度25℃±1℃，光照時(shí)間12～14h/d，光照強(qiáng)度2000lx±100lx。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述芍藥離體組織培養(yǎng)方法，其特征在于上述消毒用酒精濃度為70％酒精，消毒時(shí)間為10～15s。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述芍藥離體組織培養(yǎng)方法，其特征在于上述NaHClO溶液的濃度為0.1％，消毒時(shí)間為10～15min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述芍藥離體組織培養(yǎng)方法，其特征在于用無菌水沖洗3～5次后接種至培養(yǎng)基中。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述芍藥離體組織培養(yǎng)方法，其特征在于培養(yǎng)基中還含有0.5BAmg·L-1和1.0GAmg·L-1。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4或5所述芍藥離體組織培養(yǎng)方法，其特征在于莖尖培養(yǎng)的取材時(shí)間在10～11月，或于9月下旬掘起莖芽置4℃條件下冷藏5～6周后接種培養(yǎng)。
全文摘要
芍藥離體組織培養(yǎng)方法，本發(fā)明涉及芍藥的組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。剪取帶芽鱗芍藥莖尖，洗凈后吸去水分，置于酒精中消毒，除去芽鱗、切取莖尖，用NaHClO溶液消毒，無菌水沖洗干凈后，接種至添加V
文檔編號(hào)A01H4/00GK1675992SQ200510039010
公開日2005年10月5日 申請(qǐng)日期2005年4月19日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月19日
發(fā)明者何小弟, 金飚, 李良俊, 徐緯緯, 賈妮, 王淼, 孫維娟, 陳建斌 申請(qǐng)人:揚(yáng)州大學(xué)