專利名稱：一種超氧化物歧化酶蘋果及其生產方法與專用生物制劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種具有高含量生物保護酶的蘋果及其生產方法與專用生物制劑，特別是涉及一種具有高含量超氧化物歧化酶(SOD)的蘋果及其生產方法與專用生物制劑。
背景技術：
SOD酶是生物重要保護酶之一，具有增強機體免疫力，防衰老的功能。專利號為93103774.3，發(fā)明名稱為“一種產生超氧化物歧化酶的芽孢桿菌及其生產方法”的中國發(fā)明專利中公開了一株芽孢桿菌，菌株保藏號為CGMCC 0175，該菌株具有較強的產生超氧化物歧化酶的能力。
蘋果是深受人們喜愛的水果，也是我國入世后為數不多的具有明顯國際競爭力的農產品之一。目前世界蘋果年總產量近6000萬噸，人均蘋果占有量約10公斤，我國為15公斤，高于世界人均水平5公斤，因此對蘋果進行品質改進，特別是使蘋果具有一些特殊的醫(yī)療保健作用意義非常重大。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種生產具有高含量超氧化物歧化酶(SOD)蘋果的專用生物制劑。
該專用生物制劑的活性成分是3.0×1010cfu/g的芽孢桿菌CGMCC 0175。
所述制劑中還含有所述菌體5-7倍重量份數比的輕質碳酸鈣或草炭或腐植酸，輕質碳酸鈣或草炭或腐植酸的細度一般為0.08-0.1mm，優(yōu)選的為0.09mm。
本發(fā)明的第二個目的是提供一種具有高含量超氧化物歧化酶(SOD)蘋果及其生產方法。
本發(fā)明所提供的超氧化物歧化酶(SOD)蘋果，含有20-50IU/g的超氧化物歧化酶。
所述蘋果的可溶性固形物大于等于14.7％；可滴定酸小于等于0.27g/100ml；硬度為12-18kg/cm2。
一種生產超氧化物歧化酶(SOD)蘋果的方法，是向樹冠噴霧或/和樹干注射蘋果專用SOD制劑。
在實際應用中，所述向樹冠噴霧蘋果專用SOD制劑的方法是，每畝每次用蘋果專用SOD生物制劑40-60克，兌水100-200公斤，共噴5-7次，每次間隔25-30天。其中較優(yōu)選的是每畝每次用50克，共噴6次，所述樹干注射蘋果專用SOD制劑，包括以下步驟1)鉆孔，在根莖部鉆孔，孔深達髓心部；
2)注射，向孔中注射蘋果專用SOD制劑，每畝每次用65-85克，溶于1-3公斤水中，共注射3-5次，其中較優(yōu)選的是每畝每次用75克，溶于2公斤水中，套袋蘋果共注射4次。
上述過程中，鉆孔應在根莖部50cm之內，鉆孔與樹干呈45-80度的夾角，孔徑5-5.5mm，鉆孔數量2-3個。
蘋果專用SOD制劑通過芽孢桿菌在蘋果樹體內繁殖、轉移，提高蘋果體內的SOD活性和含量。蘋果專用SOD制劑菌株產生的SOD酶有較強的耐溫抗熱性和抗逆能力，在70℃條件下處理1小時，酶活為原酶活的47％；100℃條件下處理30分鐘，酶活為原酶活的37％；對臭氧、高溫高酸的耐性很強。用本發(fā)明的方法生產的SOD蘋果不僅保持了原有蘋果的優(yōu)良性狀，而且SOD含量明顯提高，具有增強人體免疫力和延緩衰老的功效，在深加工過程中仍可保持較高的SOD酶活。
蘋果專用SOD制劑可以與其它栽培管理措施結合實施，不增加工時，同時可以與其它殺蟲劑、殺菌劑(殺細菌劑除外)、植物生長調節(jié)劑、葉面肥、化學肥料等農化物質混合使用，不影響使用效果。
具體實施例方式
實施例1、蘋果專用SOD生物制劑的生產一、菌株的發(fā)酵生產1、生產中的技術指標滅菌條件溫度121-125℃，壓力0.11-0.14mpa，時間30min培養(yǎng)條件溫度28-34℃，壓力0.05mpa，通氣值1∶1，pH值7-7.5放罐指標含菌量≥50億/ml，芽孢形成≥70％，雜菌率≤0.3％2、菌種生產從芽孢桿菌CGMCC 0175原菌種斜面上挑取少許在備用斜面試管內劃線，置于28-30℃溫箱中培養(yǎng)24h，取出檢查，確認無雜菌污染，菌體生長整齊時，再繼續(xù)培養(yǎng)24-48h，然后涂片、染色，并在油鏡下觀察，無雜菌污染，孢子整齊時，作為發(fā)酵生產的菌種。
3、發(fā)酵生產發(fā)酵生產分種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)兩部分進行，發(fā)酵液達到規(guī)定指標時及時放罐。
二、制備生物制劑1、添加吸附劑向得到的發(fā)酵液中投入6倍菌體重量細度為0.09mm的輕質碳酸鈣或草炭或腐植酸，然后機械攪拌3-6小時，使芽孢桿菌充分被載體吸附。
2、壓濾采用明流式或暗流式板扛壓濾機濾去多余水份。
3、干燥低溫干燥(不超過70℃)，使含水率≤5％。
4、粉碎用超細度粉碎機粉碎，細度要求為100％通過0.09mm孔徑篩，控制細度的目的是為防止使用時堵塞噴頭。
5、包裝實施例2、采用樹冠噴霧法生產SOD蘋果選用蘋果樹長勢旺盛，已進入生產期的富士蘋果果園。
每畝每次用蘋果專用SOD生物制劑50克，一般兌水100-200公斤，混和稀釋均勻，視樹體大小、栽培密度調整用水量。套袋富士，共噴6次，現蕾期噴1次，套袋前幼果期噴1次，套袋后噴3次，每次間隔25-30天，在取袋后噴1次；噴灑應達到葉片、樹干、果實等部位稀釋液均勻附著，一般應在上午10點前或下午3點后噴施。果園進行正常的栽培管理，收獲時得到的蘋果即是超氧化物歧化酶蘋果，該種蘋果的超氧化物歧化酶為20-50IU/g，蘋果的可溶性固形物大于等于14.7％；可滴定酸小于等于0.27g/100ml；硬度為12-18kg/cm2。
該實施例的方法也適用于新紅星、花冠等品種，對于這些品種，在現蕾期至采收期共噴6次，每次至少間隔25天。
實施例3、采用樹干注射法生產SOD蘋果選用蘋果樹長勢旺盛，已進入生產期的果園。
1、鉆孔，在根莖部50cm之內，鉆與樹干夾角45-80度的孔，孔徑5-5.5mm，鉆孔數量2-3個，深度達髓心部。
2.注射，每畝每次用蘋果專用SOD制劑75克，一般溶于2公斤水中，套袋蘋果共注射4次，現蕾期(4月底)1次，套袋后3次，時間分別為6月底、7月底、8月底。將單株所需蘋果專用SOD制劑稀釋液裝入滴注袋，垂直掛于距地面1.5米左右高的中心枝杈上，并排出管道中的氣體，然后將滴注針頭插入鉆孔即可進行注射。注射完畢，注孔用干樹枝塞緊，與樹皮剪平，并堆土保護注孔。在天氣晴朗時注射時間一般為2-12小時。注射時，蘋果專用SOD制劑至少提前4小時溶解。果園進行正常的栽培管理，收獲時得到的蘋果即是超氧化物歧化酶蘋果，該種蘋果的超氧化物歧化酶為20-50IU/g，蘋果的可溶性固形物大于等于14.7％；可滴定酸小于等于0.27g/100ml；硬度為12-18kg/cm2。
實施例4、本發(fā)明超氧化物歧化酶蘋果SOD酶活的測定一、SOD酶活的測定SOD酶活的測定采用NBT光化學法1、NBT反應液的制備配制pH7.8，50mmol/L的磷酸緩沖液1000ml，加入1.933mg的L-甲硫氨酸(L-Met)，待完全溶解后，放入45.8mg氯化硝基氮藍四唑(NBT)，0.47mg核黃素(配成0.47mg/ml溶液，吸取1ml加入)和29.0mg乙二胺四乙酸(EDTA)，溶液終濃度Met為13mmol/L；NBT為6.3×10-3mmol/L；核黃素(VB2)為1.3×10-3mmol/L；EDTA為0.1mmol/L，置于棕色試劑瓶中，用黑布罩遮光，于4℃冰箱中可保存1個月。
2、材料的預處理蘋果果肉用研缽研碎，按照果肉∶50mM磷酸緩沖液＝1∶2的比例加入緩沖液，10000rpm離心10分鐘，取上清液進行SOD酶活測定。
3、測定方法吸取30μl樣品，放入10ml透明玻璃小燒杯中，加入3mlNBT反應液，混勻，在28℃SOD光化反應室中，2×15W日光燈光照20分鐘(光照為4000勒克司)，在560nm處測定吸光度，以NBT反應液作空白對照，每組設3次重復，整個測定過程除光化反應外，均在避光或弱光條件下進行。同時測試過程中以美國″Sigma″公司、上海寶安公司的標準酶和貴州老來福藥業(yè)公司生產的SOD口服液作為測試對照。
4、計算SOD酶活(IU/g)＝(OD對照-OD樣品)/(1/2OD對照)×稀釋倍數二、本發(fā)明超氧化物歧化酶蘋果SOD酶活的測定測定實施例1和實施例2生產的SOD蘋果中的SOD酶活性，結果如表1所示，表明SOD蘋果中SOD酶活顯著高于普通蘋果，且在a＝0.05水平差異顯著。說明通過該項技術可以生產出具有高含SOD酶活的SOD保健功能蘋果。
表1、SOD蘋果中SOD酶活測定結果

實施例5、本發(fā)明超氧化物歧化酶(SOD)蘋果SOD的抗熱性測定將SOD蘋果樣品在100℃中保持20分鐘，測定SOD蘋果和對照蘋果的SOD酶活性。
測定結果如表2所示，表明，經過熱處理后，SOD蘋果中仍保持較高的SOD酶活，但對照含有的SOD酶活極低。說明通過該項技術生產的SOD蘋果，適于在常溫下保存和進行深加工，仍能保持較高的SOD活性。
表2、SOD蘋果中SOD的抗熱性測定

權利要求
1.一種蘋果專用SOD制劑，它的活性成分是2.5-3.5×1010cfu/g的芽孢桿菌CGMCC 0175。
2.根據權利要求1所述的SOD制劑，其特征在于所述制劑中還含有所述菌體5-7倍重量份數比的輕質碳酸鈣或草炭或腐植酸。
3.根據權利要求1或2所述的SOD制劑，其特征在于所述輕質碳酸鈣或草炭或腐植酸的細度為0.08-0.1mm。
4.一種超氧化物歧化酶蘋果，其特征在于它含有20-50 IU/g的超氧化物歧化酶。
5.根據權利要求4所述的蘋果，其特征在于所述蘋果的可溶性固形物大于等于14.7％；可滴定酸小于等于0.27g/100ml；硬度為12-18kg/cm2。
6.一種生產超氧化物歧化酶蘋果的方法，是向樹冠噴霧或/和樹干注射蘋果專用SOD制劑，該制劑的活性成分是2.5-3.5×1010cfu/g的芽孢桿菌CGMCC 0175。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于所述向樹冠噴霧蘋果專用SOD制劑的方法是，每畝每次用蘋果專用SOD生物制劑40-60克，兌水100-200公斤，共噴5-7次，每次間隔25-30天。
8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于所述樹干注射蘋果專用SOD制劑，包括以下步驟1)鉆孔，在根莖部鉆孔，孔深達髓心部；2)注射，向孔中注射蘋果專用SOD制劑，每畝每次用65-85克，溶于1-3公斤水中，套袋蘋果共注射3-5次。
9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于所述鉆孔在根莖部50cm之內，鉆孔與樹干呈45-80度的夾角，孔徑5-5.5mm，鉆孔數量2-3個。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種超氧化物歧化酶(SOD)蘋果及其生產方法與專用生物制劑，本發(fā)明所提供的專用生物制劑的活性成分是3.0×10
文檔編號A01H3/00GK1559196SQ200410006548
公開日2005年1月5日 申請日期2004年3月8日 優(yōu)先權日2004年3月8日
發(fā)明者王 琦, 彭增康, 楊占江, 梅汝鴻, 王 琦 申請人:三門峽市農業(yè)科技咨詢服務中心