基于生物標(biāo)志物的腫瘤早期檢測(cè)試紙條的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實(shí)用新型涉及生命健康技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本實(shí)用新型涉及基于生物標(biāo)志物 的腫瘤早期檢測(cè)試紙條。
【背景技術(shù)】
[0002] 甲胎蛋白（a-fetoprotein AFP)是單一多聚體肽鍵糖蛋白，含590個(gè)氨基酸，分 子量約為70KD，與血清白蛋白、維生素結(jié)合蛋白屬同一基因家族。AFP于胎兒6周開始合成， 12-15周達(dá)到高峰。出生后1-2年降至成人水平。AFP是診斷肝癌靈敏度高和特異性好的 腫瘤標(biāo)志物，是臨床診斷原發(fā)性肝細(xì)胞癌的主要實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，常用于原發(fā)性肝癌臨床檢查 及普查。癌胚抗原（carcino-embryonic antigen CEA)是一種分子量為180_200kDa的多 糖蛋白復(fù)合物。它存在2-6月齡的胎兒胃腸道組織和直、結(jié)腸癌細(xì)胞組織中，胃癌、胰腺癌、 卵巢癌、食道癌等組織中也有存在。通常CEA被認(rèn)為是一種廣譜的腫瘤標(biāo)志物。目前市場(chǎng) 上的廣譜的腫瘤的早期判斷僅僅單獨(dú)依靠單一的腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)，常常因?yàn)閱我坏臋z驗(yàn) 周期長(zhǎng)，靈敏度低，從而無法確保腫瘤的診斷率以及甚至?xí)绊懩[瘤患者后續(xù)的治療和生 命健康。 【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0003] 本實(shí)用新型的主要目的在于提供一種基于生物標(biāo)志物的腫瘤早期檢測(cè)試紙條，同 時(shí)檢測(cè)AFP和CEA，對(duì)于腫瘤發(fā)生的判斷起到協(xié)同互補(bǔ)作用，可以根據(jù)實(shí)際檢測(cè)結(jié)果，為腫 瘤早期提供輔助判斷，縮短檢測(cè)周期，增加了檢測(cè)的靈敏度，方便了用戶使用。
[0004] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型提供了一種基于生物標(biāo)志物的腫瘤早期檢測(cè)試紙 條。
[0005] 所述基于生物標(biāo)志物的腫瘤早期檢測(cè)試紙條包括底襯以及設(shè)置于所述底襯上的 包被膜，所述包被膜上依次設(shè)置有樣品墊、包被線區(qū)和吸水紙；
[0006] 所述包被線區(qū)依次設(shè)置有標(biāo)記線、質(zhì)控線、AFP檢測(cè)線和CEA檢測(cè)線。
[0007] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述AFP檢測(cè)線包括能與待檢測(cè)抗原AFP特異性結(jié)合的第 一 AFP單克隆抗體；所述CEA檢測(cè)線包括能與待檢測(cè)抗原CEA特異性結(jié)合的第一 CEA單克 隆抗體。
[0008] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述待檢測(cè)抗原AFP為人源AFP，所述待檢測(cè)抗原CEA為人 源 CEA。
[0009] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述標(biāo)記線包括被熒光膠乳標(biāo)記的第二AFP單克隆抗體、 第二CEA單克隆抗體和兔IgG抗體。
[0010] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述質(zhì)控線包括羊抗兔IgG抗體。
[0011] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述標(biāo)記線和所述質(zhì)控線之間、所述質(zhì)控線和所述AFP檢 測(cè)線之間以及所述AFP檢測(cè)線和所述CEA檢測(cè)線之間的間隔設(shè)置為2mm-5mm。
[0012] 本實(shí)用新型采用上述技術(shù)方案，帶來的技術(shù)效果為：本實(shí)用新型實(shí)施例提供的基 于生物標(biāo)志物的腫瘤早期檢測(cè)試紙條包括底襯以及設(shè)置于底襯上的包被膜，包被膜上依次 設(shè)置有樣品墊、包被線區(qū)和吸水紙；包被線區(qū)依次設(shè)置為標(biāo)記線、質(zhì)控線、AFP檢測(cè)線和CEA 檢測(cè)線；標(biāo)記線包括被熒光膠乳標(biāo)記的第二AFP單克隆抗體、第二CEA單克隆抗體和兔IgG 抗體，質(zhì)控線包括羊抗兔IgG抗體;AFP檢測(cè)線和CEA檢測(cè)線分別包括能與待檢測(cè)抗原AFP 特異性結(jié)合的第一 AFP單克隆抗體和能與待檢測(cè)抗原CEA特異性結(jié)合的第一 CEA單克隆抗 體。本實(shí)用新型提供的試紙條通過AFP與CEA兩項(xiàng)聯(lián)檢，對(duì)于腫瘤發(fā)生的判斷起到協(xié)同互 補(bǔ)作用，可以根據(jù)實(shí)際檢測(cè)結(jié)果，為腫瘤早期提供輔助判斷，縮短檢測(cè)周期，增加了檢測(cè)的 靈敏度，方便了用戶使用。
【附圖說明】
[0013] 圖1為本實(shí)用新型基于生物標(biāo)志物的腫瘤早期檢測(cè)試紙條較佳實(shí)施例的內(nèi)部結(jié) 構(gòu)示意圖；
[0014] 圖2為本實(shí)用新型基于生物標(biāo)志物的腫瘤早期檢測(cè)試紙條較佳實(shí)施例的包被線 區(qū)的不意圖；
[0015] 圖3為采用本實(shí)用新型基于生物標(biāo)志物的腫瘤早期檢測(cè)試紙條與德靈儀器針對(duì) 相同臨床樣本測(cè)量出的AFP的相關(guān)性圖；
[0016] 圖4為采用本實(shí)用新型基于生物標(biāo)志物的腫瘤早期檢測(cè)試紙條與德靈儀器針對(duì) 相同臨床樣本測(cè)量出的CEA的相關(guān)性圖。
[0017] 本實(shí)用新型目的的實(shí)現(xiàn)、功能特點(diǎn)及優(yōu)點(diǎn)將結(jié)合實(shí)施例，參照附圖做進(jìn)一步說明。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本實(shí)用新型，并不用于限定本 實(shí)用新型。
[0019] 本實(shí)用新型的主要目的在于提供一種基于生物標(biāo)志物的腫瘤早期檢測(cè)試紙條，同 時(shí)檢測(cè)AFP和CEA，對(duì)于腫瘤發(fā)生的判斷起到協(xié)同互補(bǔ)作用，可以根據(jù)實(shí)際檢測(cè)結(jié)果，為腫 瘤早期提供輔助判斷，縮短檢測(cè)周期，增加了檢測(cè)的靈敏度，方便了用戶使用。
[0020] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型提供了一種基于生物標(biāo)志物的腫瘤早期檢測(cè)試紙 條。
[0021] 圖1為本實(shí)用新型基于生物標(biāo)志物的腫瘤早期檢測(cè)試紙條較佳實(shí)施例的內(nèi)部結(jié) 構(gòu)示意圖；圖2為本實(shí)用新型基于生物標(biāo)志物的腫瘤早期檢測(cè)試紙條較佳實(shí)施例的包被線 區(qū)的示意圖。參照?qǐng)D1和圖2,在本實(shí)施例中，所述基于生物標(biāo)志物的腫瘤早期檢測(cè)試紙條 10包括底襯101以及設(shè)置于所述底襯101上的包被膜102,所述包被膜102上依次設(shè)置有 樣品墊1021、包被線區(qū)和吸水紙；
[0022] 所述包被線區(qū)1022依次設(shè)置有標(biāo)記線10221、質(zhì)控線10222、AFP檢測(cè)線10223和 CEA檢測(cè)線10224。
[0023] 在本實(shí)施例中，所述試紙條10包括底襯101及設(shè)在底襯101上的包被膜102,包被 膜102上設(shè)有樣品墊1021、包被線區(qū)1022和吸水紙1023。在檢測(cè)的過程中，吸水紙1023 的主要成分是纖維素，用于提供檢測(cè)所需的毛細(xì)作用力，吸水紙的材料可以是自由棉絨，也 可以是玻璃纖維，優(yōu)選自由棉絨的材料。由于纖維素是天然的大分子有機(jī)物，紙張中的纖維 素交錯(cuò)呈網(wǎng)狀，因此纖維素交錯(cuò)形成的網(wǎng)狀中有很多空隙，這些空隙可以含住吸水紙1023 上的水分，從而產(chǎn)生張力。此外水由于勢(shì)能，從濃度高的一側(cè)流向濃度低的一側(cè)，因此在實(shí) 驗(yàn)操作的過程中，如果從一側(cè)吸水，則有利于滴加的檢測(cè)樣品快速的擴(kuò)散從加樣處到硝酸 纖維素膜上，利于實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。硝酸纖維素膜（nitrocellulose filter membrane，簡(jiǎn)稱NC 膜），是免疫反應(yīng)的發(fā)生處。當(dāng)通過樣品墊1021，在吸水紙1023的作用下把樣品從起始上 樣點(diǎn)轉(zhuǎn)移至包被線區(qū)，在檢測(cè)試紙條10下游控制著樣品沿著NC膜膜片流動(dòng)。
[0024] 所述包被線區(qū)1022包括有從靠近所述樣品墊1021端至靠近所述吸水紙1023端 依次平行設(shè)置、且相互間隔的包被有第二AFP單克隆抗體、第二CEA單克隆抗體和兔IgG抗 體的標(biāo)記線10221、包被有羊抗兔IgG抗體的質(zhì)控線10222、包被有能與待檢測(cè)抗原AFP特 異性結(jié)合的第一 AFP單克隆抗體的AFP檢測(cè)線10223、以及包被有能與待檢測(cè)抗原CEA特 異性結(jié)合的第一 CEA單克隆抗體的CEA檢測(cè)線10224。所述標(biāo)記線10221上熒光膠乳標(biāo) 記的抗體采用熒光稀釋液進(jìn)行稀釋，所述熒光稀釋液包括：1. 0% -I. 5% BSA，2. 5% -5% 蔗糖，0· 1% -0· 5% Tween-20,0. 08-0. 1% NaN3,余量為 0· 01-0. 02M、ρΗ7· 2 的 PBS ;牛血清 白蛋白（BSA)，是牛血清中的一種白蛋白，能減輕有些抗體的變性，對(duì)于某些不利環(huán)境因素 如加熱，表面張力及化學(xué)因素引起的抗體的變性，起到穩(wěn)定、減輕的效果，減少外界因素對(duì) 實(shí)驗(yàn)的干擾。此外在本實(shí)用新型實(shí)施例中加入BSA，可增強(qiáng)產(chǎn)物的穩(wěn)定性。Tween-20為聚 氧乙烯去水山梨醇單月桂酸酯和一部分聚氧乙烯雙去水山梨醇單月桂酸酯的混合物，是一 種表面活性劑，在本實(shí)用新型實(shí)施例中促進(jìn)抗體與抗體的結(jié)合的作用，磷酸鹽緩沖液又稱 PBS，是由磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉組成的溶液，用于樣品的稀釋。疊氮鈉又稱NaN3，在本 實(shí)用新型實(shí)施例中起到防腐的作用；所述質(zhì)控線10222、AFP檢測(cè)線10223和CEA檢測(cè)線 10224上包被的抗體均采用包被緩沖液進(jìn)行稀釋，所述包被緩沖液包括：0. 08-0. 1 % NaN3, 余量為〇. 01-0. 〇2M、pH7. 2的PBS。所述包被膜102為硝酸纖維素膜，所述硝酸纖維素膜的 爬速為95s~135s/4cm。所述熒光膠乳標(biāo)記的第二AFP單克隆抗體和熒光乳膠標(biāo)記的第 二CEA單克隆抗體的濃度均為0. 25-1. Omg/ml，在試紙條10上的用量均為0. 02-0. 1 μ g/ cm2,按5%~30%的比例進(jìn)行稀釋；所述焚光乳膠標(biāo)記的兔IgG抗體的濃度為0. 25-1. Omg/ ml，按5% -15%的比例進(jìn)行稀釋，在試紙條10上的用量為0. 001-0. 0