血栓彈力圖儀質(zhì)控品及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及臨床血栓彈力圖儀凝血檢測項目質(zhì)量控制領(lǐng)域，特別涉及一種血栓彈 力圖儀質(zhì)控品及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 血栓彈力圖儀用于監(jiān)測血液樣品的凝聚狀態(tài)以輔助患者的臨床評估。血栓彈力圖 儀廣泛應(yīng)用于心臟外科、器官移植、腫瘤和放射治療中或后期的術(shù)后出血和（或)血栓形成 的情況監(jiān)測。
[0003] 儀器采用凝固法，模擬生理血液凝固條件，加入某種試劑，啟動血液凝集反應(yīng)，使 樣本中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為交聯(lián)纖維蛋白，使樣本發(fā)生凝固。儀器內(nèi)部的電機驅(qū)動承載血 標本的樣品杯以一定角度(如4度45分)和周期(如10秒)轉(zhuǎn)動，一旦血栓形成，置于血標本樣 品杯中的金屬探針受到標本的切應(yīng)力作用，隨之出現(xiàn)左右旋動。金屬針的旋動被非接觸式 角度旋動傳感器(如電感式角度傳感器)感應(yīng)，轉(zhuǎn)化為電量交給處理器處理，儀器的軟件會 自動記錄所測血樣的動力學(xué)變化，便形成凝血曲線。
[0004] 凝血是一個非常復(fù)雜的生理生化級聯(lián)反應(yīng)，其實質(zhì)是通過一系列的酶促反應(yīng)。可 分為凝血酶原激活物的形成、凝血酶原的激活和纖維蛋白的生成三個基本步驟。根據(jù)凝血 酶原激活物形成途徑的不同，血液凝固可分為內(nèi)源性通路凝血、外源性通路凝血和內(nèi)外源 共同通路凝血。其中不同的參數(shù)代表的意義如下：
[0005] R值:反應(yīng)時間，是指血樣開始運作至第一塊可檢測得到的血凝塊(儀器掃描圖上 幅度= 2mm)形成所需的時間。R值因抗凝劑及凝血因子缺乏而延長，因血液呈高凝狀態(tài)而縮 短。
[0006] K值:血凝塊的形成時間，是指從測量R值終點起(血凝塊開始形成）至血凝塊硬度 達到某一固定水平(振幅= 20mm)的時間。因此，K值用來評估血凝塊強度達到某一水平的速 度或動力學(xué)特性。K值的縮短受增加的纖維蛋白原水平的影響，而受到血小板功能的影響則 較小。
[0007] Angle值:血凝塊逐漸形成的動力學(xué)特性，Angle與K時間密切相關(guān)，因為兩者都是 血凝塊聚合速度函數(shù)。在血液處于低凝狀態(tài)時，血凝塊的最終狀況是振幅達不到20mm(此時 K無法確定）。因此，Angle比K時間更全面。
[0008] MA值:最大振幅，用來評估已形成的血凝塊的最大強度或硬度(最大切應(yīng)系數(shù)），影 響血凝塊強度的因素有兩個，即纖維蛋白和血小板，其中血小板作用要比纖維蛋白大。
[0009] 隨著血栓彈力圖儀檢測項目不斷拓展到疾病診斷和治療的各個領(lǐng)域，對檢測儀器 進行檢驗室內(nèi)的質(zhì)量控制也顯得尤為重要。經(jīng)查詢國家食品藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)站，取得血 栓彈力圖儀質(zhì)控品注冊批文僅有兩家單位:一家為進口，市場上限制供應(yīng)，且價格不菲；一 家為國產(chǎn)，沒有商品化供應(yīng)。因此提供一種用豬血漿制備的血栓彈力圖儀質(zhì)控品方法及制 得質(zhì)控品具有現(xiàn)實意義：一是為本公司研發(fā)的血栓彈力圖儀臨床監(jiān)測提供質(zhì)控依據(jù)和方 法。二是拓寬使用在進口血栓彈力圖儀和相關(guān)的國產(chǎn)血栓彈力圖儀上。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明提供一種對檢測儀器變化敏感、檢測成本低的血栓彈力圖儀質(zhì)控品。
[0011] 本發(fā)明還提供一種所述血栓彈力圖儀質(zhì)控品的制備方法。
[0012] 本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：
[0013] -種血栓彈力圖儀質(zhì)控品的制備方法，該方法包括以下步驟：
[0014] 步驟1，采集新鮮豬全血，分離血漿；
[0015] 步驟2,將所述血漿分成2部分，第1部分用于提取纖維蛋白原和凝血因子，第2部分 進行適當(dāng)稀釋得到稀釋血漿；
[0016] 步驟3,將提取的纖維蛋白原和凝血因子加入稀釋血漿中，得到母液，調(diào)節(jié)R值、K 值、Angle值、MA值在L1和L2的范圍內(nèi)，其中L1質(zhì)控品的范圍為R值0-3min、K值0-3min、Angle 值77-89deg、MA值44-63mm; L2 質(zhì)控品的范圍為R值0-3min、K值 0-4min、Angle 值68-85deg、MA 值24_43mm;
[0017] 步驟4,將步驟3得到的溶液進行分裝，凍干即得。本發(fā)明所制備的質(zhì)控品有LI和L 2兩種規(guī)格，穩(wěn)定性好，可滿足檢驗室模擬正常和異常兩種血樣質(zhì)控需求。
[0018] 作為優(yōu)選，步驟2所述的提取纖維蛋白原和凝血因子的方法為:將第1部分血漿置 于-20 ±10 °C的環(huán)境下24-48小時，然后置于2-8°C的環(huán)境下放置12-24小時解凍，再將析出 的凝塊用絲網(wǎng)過濾，得纖維蛋白原粗品，沖洗溶解凍干備用；
[0019] 上述絲網(wǎng)過濾液離心，收集下部沉淀，得凝血因子粗品，溶解凍干備用。得到的纖 維蛋白原粗品的純度為65-85%。
[0020] 作為優(yōu)選，第2部分血漿的稀釋方法為:取稀釋液與血漿以（1-2) :(2-3)的體積比 混合，控制MA值在40 ± 4mm;稀釋液為梓檬酸鈉和氯化鈉的混合溶液，濃度為3.8wt %的梓檬 酸鈉溶液和濃度為〇. 9wt %的氯化鈉溶液以1:9的體積混合即得?？刂芃A值在40mm左右的意 義在于獲得一個適當(dāng)?shù)捏w系，為定量加入的纖維蛋白原，確保最終溶液的MA值在55-63mm之 間奠定基礎(chǔ)，同時又不至于過多影響后續(xù)對R和K的值調(diào)節(jié)。
[0021 ]作為優(yōu)選，步驟3所述的纖維蛋白原和凝血因子加入方法:將纖維蛋白原的干燥品 配制成lg/ml的溶液，按照稀釋血漿體積10%加入纖維蛋白原溶液;凝血因子配制成0.3g/ ml的溶液，按照稀釋血漿體積5 %加入凝血因子溶液。
[0022]作為優(yōu)選，所配制得母液的R、K、Angle、MA四個參數(shù)值在L1的范圍內(nèi)，對母液:稀釋 液以體積比2:1進行稀釋，可制得L2。
[0023]作為優(yōu)選，步驟1中的豬全血為生豬屠宰時割破動脈時采集的新鮮血液，抗凝劑為 3.8wt %的檸檬酸鈉溶液，按血液體積和抗凝劑體積比為9:1輕柔混合均勻。分離血漿的方 法可采取離心法或沉降法。離心采用3000rpm/min，10分鐘。沉降法可采用4°C環(huán)境下沉降 24-48小時。小心吸取上層血漿。
[0024]作為優(yōu)選，該方法具體為：
[0025]步驟1獲得豬血漿
[0026]在生豬屠宰時，割破動脈取得豬全血，將此豬全血和3.8wt %的檸檬酸鈉抗凝劑溶 液按9:1的體積比例混合，混勻后的全血在2-8°C條件下放置24-48小時分層，吸取上層血 漿;或者是將全血通過離心分離血漿，離心力3000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，得到上層血漿；
[0027]步驟2提取纖維蛋白原和凝血因子
[0028]首先取步驟1所得的血漿，置于_20°C冷凍庫中24小時，直至凍成冰塊，然后將其置 于4-8°C冷藏12-24小時，熔融的血漿中出現(xiàn)白色凝塊，用絲網(wǎng)將此白色凝塊從血漿中過濾 分離，分離的白色凝塊即為纖維蛋白原，將此纖維蛋白原沖洗后溶解于生理鹽水中，凍干備 用；
[0029]上述絲網(wǎng)過濾液，用冷凍離心機2-4°C9000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘收集沉淀物，即得凝 血因子粗品，將此沉淀物溶解于生理鹽水中，凍干備用；
[0030] 步驟3配制基質(zhì)血漿
[0031]取步驟1所得的血漿，首先用血栓彈力圖儀復(fù)鈣測試R、K、Angle、MA四項參數(shù)基礎(chǔ) 值，該血漿的MA值一般在65-85mm之間，然后根據(jù)MA值的大小，用稀釋液進行適當(dāng)稀釋，使得 稀釋血漿的MA值在40-45mm之間，該血漿可作為血栓彈力圖儀質(zhì)控品的基質(zhì)血漿使用；
[0032] 步驟4配制質(zhì)控品母液
[0033]將所得的纖維蛋白凍干粉末用純化水溶解，配制成濃度為0.5-2g/ml的溶液，即為 纖維蛋白溶液；
[0034]將所得的凝血因子凍干粉末用純化水溶解，配制成濃度為0.1-0.5g/ml的溶液，即 為凝血因子溶液；
[0035]按照基質(zhì)血漿使用體積的5-10 %加入纖維蛋白溶液，攪勻后得混合溶液1，取樣測 試，控制混合溶1的MA值控制在55-60mm之間，K值控制在0.5-1.5min之間；
[0036]將已調(diào)制符合要求的混合溶液1，按照基質(zhì)血漿使用體積的0.5-2%加入凝血因子 溶液，攪勻后得混合溶液2。取樣測試，控制混合溶2的對直在