人kiaa0101基因的用途及其相關(guān)藥物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地涉及人KIAA0101基因的用途及其相關(guān)藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] RNA干擾（RNA interference, RNAi)即用核苷酸組成的短的雙鏈RNA(dsRNA)進 行轉(zhuǎn)錄后基因沉默。它可高效、特異地阻斷體內(nèi)特定基因的表達，導(dǎo)致其降解，從而引起 生物體內(nèi)特異基因的沉默，使細胞表現(xiàn)出某種基因表型的缺失，是近年來新興的一種常用 的研究基因功能、尋找疾病治療方法的實驗室技術(shù)。研究表明，長度為21-23nt的雙鏈 RNA能夠在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平特異性的引起RNAi (Tuschl T，Zamore PD, Sharp PA, Bartel DP. RNAi: double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at 21to 23nucleotide intervals. Cell 2000;101:25-33·)。腫瘤患者雖經(jīng)化療、放療和綜合治 療，但五年生存率仍很低，如能對腫瘤發(fā)病和進展有關(guān)的基因進行干預(yù)，將能為腫瘤的治療 開辟新途徑。近年來，RNAi已成為腫瘤的基因治療的有效策略。利用RNAi技術(shù)可以抑制 原癌基因、突變的抑癌基因、細胞周期相關(guān)基因、抗凋亡相關(guān)基因等的表達來抑制腫瘤進程 (Uprichard, Susan L. The therapeutic potential of RNA interference. FEBS Letters 2005 ;579:5996-6007.)。
[0003] KIAA0101(增值細胞核抗原結(jié)合蛋白，PAF15)是由KIAA0101基因編碼的蛋白，定 位于人類15號染色體長臂22區(qū)31帶（15q22. 31)，共含有5個外顯子區(qū)，編碼111個氨基 酸，其中第15位賴氨酸、第24位賴氨酸存在單/雙泛素化修飾，而第63位賴氨酸存在單泛 素化修飾（neXtProt/Ensembl/Reactome)。其主要定位于細胞核，在核周區(qū)也有少量分布， 且在不同物種間進化高度保守（NCBI Reference Sequence:NP_001025160.1)。KIAA0101 蛋白只在細胞周期的S期和G2期表達，與G2/M期達到高峰，在有絲分裂結(jié)束時表達急劇下 降。該蛋白的表達還具有組織特異性，在肝臟、胰臟和胎盤中高表達。KIAA0101在DNA復(fù) 制期間起著調(diào)控DNA修復(fù)的作用，當DNA損傷時KIAA0101的第15位和第24位賴氨酸發(fā)生 單泛素化，招募DNA聚合酶跨越損傷缺口合成DNA從而達到修復(fù)。該蛋白的過表達會促進 紫外線照射導(dǎo)致的DNA損傷的修復(fù)并阻止細胞死亡，而其表達抑制則會阻礙DNA復(fù)制及細 胞存活[Simpson F, Lammerts van Bueren K, Butterfield N et al. The PCNA-associated factor KIAA0101/pl5(PAF)binds the potential tumor suppressor product p33INGlb. Exp Cell Res 2006 ；312:73 - 85. Turchi L, Fareh M, Aberdam E et al. ATF3and pl5PAF are novel gatekeepers of genomic integrity upon UV stress. Cell Death Differ 2009 ; 16 : 728 - 37. van Bueren KL, Bennetts JS, Fowles LF,Berkman JL,Simpson F, fficking C. Murine embryonic expression of the gene for the UV-responsive protein pl5 (PAF) .Gene Expr Patterns 2007;7:47 - 50·]。
[0004] 關(guān)于KIAA0101在腫瘤相關(guān)領(lǐng)域的報道很少。為了研究KIAA0101和腫瘤的相關(guān)性， 本發(fā)明選取結(jié)腸癌細胞模型，以RNAi為手段研究KIAA0101在結(jié)腸癌發(fā)生和發(fā)展中的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于公開與人KIAA0101基因相關(guān)的治療方法及藥物，以RNA干擾 (RNAi)為手段研究KIAA0101基因在腫瘤細胞的存活和凋亡過程中的作用。
[0006] 本發(fā)明第一方面，以RNA干擾為手段，研究了 KIAA0101基因在腫瘤發(fā)生和發(fā)展 中的作用，公開了一種抑制或降低腫瘤細胞生長、增殖、分化和/或存活的方法，該方法包 括：向腫瘤細胞施用一種能夠特異性抑制KIAA0101基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，或能夠特異性抑制 KIAA0101蛋白的表達或活性的分子，以此來抑制腫瘤細胞的生長、增殖、分化和/或存活。
[0007] 所述腫瘤細胞選自其生長與KIAA0101蛋白的表達或活性相關(guān)的腫瘤細胞。較優(yōu) 的，所述腫瘤細胞選自結(jié)腸癌。
[0008] 所述抑制或降低腫瘤細胞生長、增殖、分化和/或存活的方法中，所述分子的施用 量為足夠降低KIAA0101基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，或者足夠降低KIAA0101蛋白的表達或活性的 劑量。進一步的，所述KIAA0101基因的表達至少被降低50%、80%、90%、95%或99%。
[0009] 所述分子可選自但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂類、小分子化學(xué)藥、抗體藥、 多肽、蛋白或干擾慢病毒。
[0010] 所述核酸包括但不限于：反義寡核苷酸、雙鏈RNA(dsRNA)、核酶、核糖核酸內(nèi)切酶 ΠΙ制備的小干擾RNA(esiRNA)或者短發(fā)夾RNA(shRNA)。
[0011] 所述雙鏈RNA、核酶、esiRNA或者shRNA含有KIAA0101基因的啟動子序列或 KIAA0101基因的信息序列。
[0012] 進一步的，所述雙鏈RNA為小干擾RNA(siRNA)。所述小干擾RNA包含第一鏈和 第二鏈，所述第一鏈和所述第二鏈互補共同形成RNA二聚體，并且所述第一鏈的序列與 KIAA0101基因中15-27個連續(xù)的核苷酸序列基本相同。所述小分子干擾RNA能特異性結(jié)合 靶序列所編碼的mRNA片段，并特異性沉默人KIAA0101基因的表達。
[0013] 進一步的，所述小干擾RNA的第一鏈序列與KIAA0101基因中的靶序列基本相同。 較優(yōu)的，所述KIAA0101基因中的靶序列含有如SEQ ID NO: 1所示的序列。
[0014] 所述KIAA0101基因中的靶序列即為所述小分子干擾RNA特異性沉默KIAA0101基 因表達時，與所述的小分子干擾RNA互補結(jié)合的mRNA片段所對應(yīng)的KIAA0101基因中的片 段。
[0015] 較佳的，所述KIAA0101基因來源于人。
[0016] 本發(fā)明第一方面還公開了一種分離的人KIAA0101基因在制備或篩選腫瘤治療藥 物，或者在制備腫瘤診斷藥物中的用途。
[0017] 進一步的，所述腫瘤選自結(jié)腸癌。
[0018] 所述將分離的KIAA0101基因用于制備或篩選腫瘤治療藥物包括兩方面的內(nèi)容： 其一，將KIAA0101基因作為藥物或制劑針對腫瘤細胞的作用靶標應(yīng)用于制備腫瘤治療藥 物或制劑；其二，將KIAA0101基因作為藥物或制劑針對腫瘤細胞的作用靶標應(yīng)用于篩選腫 瘤治療藥物或制劑。
[0019] 所述將KIAA0101基因作為藥物或制劑針對腫瘤細胞的作用靶標應(yīng)用于制備腫瘤 治療藥物或制劑具體是指：將KIAA0101基因作為RNA干擾作用的靶標，來研制針對腫瘤細 胞的藥物或制劑，從而能降低腫瘤細胞內(nèi)KIAA0101基因的表達水平。
[0020] 所述將KIAA0101基因作為藥物或制劑針對腫瘤細胞的作用靶標應(yīng)用于篩選腫瘤 治療藥物或制劑具體是指：將KIAA0101基因作為作用對象，對藥物或制劑進行篩選，以找 到可以抑制或促進人KIAA0101基因表達的藥物作為腫瘤治療備選藥物。如本發(fā)明所述的 KIAA0101基因小分子干擾RNA(siRNA)即是以人KIAA0101基因為作用對象篩選獲得的，可 用作具有抑制腫瘤細胞增殖作用的藥物。除此之外，諸如抗體藥物，小分子藥物等也可將 KIAA0101基因及其蛋白作為作用對象。
[0021] 所述將KIAA0101基因用于制備腫瘤診斷藥物，是指將KIAA0101基因表達產(chǎn)物作 為一項腫瘤診斷指標應(yīng)用于腫瘤診斷藥物的制備。
[0022] 通過免疫組織化學(xué)的方法檢測KIAA0101基因在腫瘤組織、正常組織和腫瘤周圍 正常組織中的表達水平。研究發(fā)現(xiàn)：KIAA0101基因在腫瘤組織中的表達量顯著高于正常組 織和腫瘤周圍正常組織。提示KIAA0101基因可能作為一種癌基因，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā) 揮重要作用；KIAA0101基因的表達水平可能成為腫瘤診斷的標志。
[0023] 所述腫瘤治療藥物為能夠特異性抑制KIAA0101基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，或能夠特異 性抑制KIAA0101蛋白的表達或活性的分子，從而降低腫瘤細胞中KIAA0101基因的表達水 平，達到抑制腫瘤細胞的增殖、生長、分化和/或存活的目的。
[0024] 所述通過分離的KIAA0101基因制備或篩選獲得的腫瘤治療藥物或者腫瘤診斷藥 物包括但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂類、小分子化學(xué)藥、抗體藥、多肽、蛋白或干擾慢 病毒。
[0025] 所述核酸包括但不限于：反義寡核苷酸、雙鏈RNA(dsRNA)、核酶、核糖核酸內(nèi)切酶 ΠΙ制備的小干擾RNA(esiRNA)或者短發(fā)夾RNA(shRNA)。
[0026] 所述腫瘤治療藥物的施用量為足夠降低人KIAA0101基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，或者足 夠降低人KIAA0101蛋白的表達或活性的劑量。以使人KIAA0101基因的表達至少被降低 50%、80%、90%、95% 或 99%。
[0027] 采用前述腫瘤治療藥物治療腫瘤的方法，主要是通過降低人KIAA0101基因的表