防治稠李巢蛾、丁香尺蛾、天幕毛蟲林木害蟲高效殺蟲真菌菌株篩選技術的制作方法
【專利說明】
所屬技術領域
[0001]本發(fā)明屬于生物技術，是以害蟲僵蟲為材料培養(yǎng)、篩選、復狀優(yōu)良真菌菌株，利用害蟲生真菌粉劑防治主要林木害蟲技術。
【背景技術】
[0002]近年來，東北林區(qū)天幕毛蟲、巢蛾類、尺蛾類等林木害蟲的發(fā)生呈上升趨勢。以往林木害蟲的防治，較多采用化學防治方法，不但使害蟲產生抗藥性，而且亦殺滅害蟲天敵，造成生態(tài)環(huán)境的破壞。為避免化學防治林木害蟲對環(huán)境造成的污染，同時有效保護森林資源，利用生物技術研制真菌防治林區(qū)主要害蟲具有重要現實意義。
[0003]發(fā)明專利內容
[0004]本發(fā)明專利要解決的技術問題是提供一種利用生物技術防治東北林區(qū)主要害蟲的方法。
[0005]本發(fā)明解決其技術問題采用的方案是:害僵蟲收集處理一真菌培養(yǎng)篩選一真菌純化鑒別一優(yōu)良真菌菌株篩選復壯一蟲生真菌粉劑生產試驗一真菌粉劑防治主要林木害蟲試驗一確定蟲生真菌防治害蟲真菌菌株
【具體實施方式】
[0006]1、僵蟲的收集和處理
[0007]先后從松花湖實驗林場、吉林市林科院實驗林場、吉林市林科院四合實驗苗圃、永吉縣西陽林場紅石村和搜登溝村等地的林下收集到長翅蝗蟲、竹節(jié)蟲、舞毒蛾、松毛蟲、稠李巢蛾、天牛等6個蟲種的僵蟲91頭。收集到的僵蟲在無菌室風干后，封存于4°C?5 °C冰箱中。
[0008]2、僵蟲的培養(yǎng)及早期篩選
[0009]采用濕室培養(yǎng)法培養(yǎng)僵蟲。從中篩選出真菌生長比較旺盛，僵蟲體表真菌的白色菌落明顯，無明顯雜菌菌落，便于分離純化的僵蟲保留，作為分離純化材料；否則，直接淘汰。
[0010]經過多年濕室培養(yǎng)，早期篩選出41頭可進行分離純化的僵蟲材料，淘汰50頭僵蟲，僵蟲的早期篩選平均淘汰率為55.0%。
[0011]3、僵蟲的分離純化與蟲生真菌鑒別
[0012]將經過濕室培養(yǎng)，早期篩選出的僵蟲采用直接分離純化法進行分離純化，即直接挑取菌絲或孢子進行分離純化。以PDA作為分離純化培養(yǎng)基；置于相對低溫18°C條件下控溫培養(yǎng)；經5次以內轉接，并經過1d以上培養(yǎng)，每日觀察，菌管中無雜菌出現，并用600倍顯微鏡抽檢，無雜菌者即為分離純化成功。
[0013]通過鏡檢，根據主要蟲生真菌布氏白僵菌、球孢白僵菌、綠僵菌的孢子大小和形態(tài)特征、孢子著生狀態(tài)、培養(yǎng)基顏色等進行鑒別。
[0014]通過多年比較鑒別，從41頭僵蟲中共分離純化出29個真菌菌株，分離純化成功率達 70.7%o
[0015]4、優(yōu)良真菌菌株的初步篩選和編號
[0016]以11個布氏白僵菌菌株和7個綠僵菌菌株的菌落平均擴展速度、24h孢子發(fā)芽率、二級菌產孢量的平均值作為量化指標，同時結合菌落特征、菌苔厚度、二級菌充滿培養(yǎng)料時間等作為定性指標制定了篩選強度適宜的優(yōu)良真菌菌株篩選標準。4年中，依據優(yōu)良真菌菌株的篩選標準，共從分離純化出的29個真菌菌株中初步篩選出了 12個優(yōu)良真菌菌株，編號從 JF001 ?JF012。
[0017]5、菌種的復壯試驗
[0018]對保存2年以上，并經過多次轉管培養(yǎng)，出現明顯退化現象的2個典型真菌菌株JF002和JF010開展了紫外燈照射復壯、培養(yǎng)基復壯、蟲尸復壯、聯合復壯(紫外燈照射復壯+培養(yǎng)基復壯)試驗。
[0019]綜合比較與分析菌種的各種復壯試驗結果來看，各種復壯方法均可以使菌種的外部形態(tài)特征得到有效的改善，使一級斜面菌種表面平坦，呈平絨狀；但是，從菌落的平均擴展速度、24h孢子發(fā)芽率、產孢量等項指標恢復效果來看，紫外燈照射復壯方法對菌落的平均擴展速度和24h孢子發(fā)芽率2指標恢復效果顯著，對產孢量恢復效果不顯著，而培養(yǎng)基復壯法則對菌落的平均擴展速度和產孢量2指標恢復效果顯著，對24h孢子發(fā)芽率恢復效果不顯著；蟲尸復壯法雖能使菌落平均擴展速度有明顯提高，但對菌株的24h孢子發(fā)芽率和產孢量提高不明顯，而且蟲尸復壯法受制于害蟲的發(fā)生，需時較長，操作相對不便。
[0020]聯合復壯方法能夠集2種復壯方法之所長，使菌種的各項指標均能恢復到較理想的分離純化時的狀態(tài)，且能夠在菌劑的生產過程中直接使用，不受時間限制，操作簡便、快捷，比單獨使用紫外燈照射復壯、培養(yǎng)基復壯和蟲尸復壯方法效果好，比蟲尸復壯方法更快捷、方便，可操作性更強。
[0021]另外，通過培養(yǎng)基復壯試驗，探索出培養(yǎng)基復壯新鮮鯽魚的最適用量。
[0022]6、蟲生真菌粉劑生產技術改進試驗
[0023]通過試驗，在不降低二級菌產孢量的情況下，以麥麩:稻糠=7: 3比例最好，更適合批量生產菌劑的操作；在蟲生真菌二級菌培養(yǎng)過程中發(fā)現，以藍色光培養(yǎng)為佳，可使二級菌的培養(yǎng)周期縮短20%左右。
[0024]7、真菌粉劑防治主要林木害蟲試驗
[0025]3年中，采用初步篩選出的優(yōu)良真菌菌株的粉劑開展了稠李巢蛾、丁香尺蛾、天幕毛蟲等主要林木害蟲的室內寄生試驗和野外防治試驗，最終篩選出對3種主要林木害蟲校正防治效果均在70%以上的優(yōu)良真菌菌株。
[0026]結論:防治稠李巢蛾、丁香尺蛾、天幕毛蟲林木害蟲高效殺蟲真菌菌株篩選技術是稠李巢蛾、丁香尺蛾、天幕毛蟲僵蟲的收集和處理一利用稠李巢蛾、丁香尺蛾、天幕毛蟲僵蟲培養(yǎng)及早期篩選真菌菌株一利用稠李巢蛾、丁香尺蛾、天幕毛蟲僵蟲培養(yǎng)的真菌菌株分離純化及真菌鑒別一優(yōu)良真菌菌株的初步篩選和編號一菌種的復壯試驗一蟲生真菌粉劑生產技術改進試驗一真菌粉劑防治主要林木害蟲試驗一確定蟲生真菌防治害蟲真菌菌株。
【主權項】
1.防治稠李巢蛾、丁香尺蛾、天幕毛蟲林木害蟲高效殺蟲真菌菌株篩選技術是稠李巢蛾、丁香尺蛾、天幕毛蟲僵蟲的收集和處理一利用稠李巢蛾、丁香尺蛾、天幕毛蟲僵蟲培養(yǎng)及早期篩選真菌菌株一利用稠李巢蛾、丁香尺蛾、天幕毛蟲僵蟲培養(yǎng)的真菌菌株分離純化及真菌鑒別一優(yōu)良真菌菌株的初步篩選和編號一菌種的復壯試驗一蟲生真菌粉劑生產技術改進試驗一真菌粉劑防治主要林木害蟲試驗一確定蟲生真菌防治害蟲真菌菌株。
【專利摘要】發(fā)明專利名稱：防治稠李巢蛾、丁香尺蛾、天幕毛蟲林木害蟲高效殺蟲真菌菌株篩選技術所屬技術領域：本發(fā)明屬于生物技術，是以害蟲僵蟲為材料培養(yǎng)、篩選、復狀優(yōu)良真菌菌株，利用害蟲生真菌粉劑防治主要林木害蟲技術。近年來，東北林區(qū)天幕毛蟲、巢蛾類、尺蛾類等林木害蟲的發(fā)生呈上升趨勢。以往林木害蟲的防治，較多采用化學防治方法，不但使害蟲產生抗藥性，而且亦殺滅害蟲天敵，造成生態(tài)環(huán)境的破壞。為避免化學防治林木害蟲對環(huán)境造成的污染，同時有效保護森林資源，利用生物技術研制真菌防治林區(qū)主要害蟲具有重要現實意義。本發(fā)明解決其技術問題采用的方案是：害僵蟲收集處理→真菌培養(yǎng)篩選→真菌純化鑒別→優(yōu)良真菌菌株篩選復壯→蟲生真菌粉劑生產試驗→真菌粉劑防治主要林木害蟲試驗→確定蟲生真菌防治害蟲真菌菌株。
【IPC分類】A01N63/04, C12Q1/04, C12N1/14, A01P7/04
【公開號】CN105176834
【申請?zhí)枴?br>【發(fā)明人】趙彥龍
【申請人】趙彥龍
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年8月24日