一種腫瘤標志物檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實用新型提供了一種腫瘤標志物檢測試劑盒，包括盒體(1)、盒蓋(2)、量子點熒光檢測試劑卡(3)；所述的試劑卡(3)的量子點結合物墊(32)含有量子點標記的抗癌抗原125單克隆抗體、量子點標記的抗癌抗原15?3單克隆抗體、量子點標記的抗鱗狀細胞癌抗原單克隆抗體、量子點標記的抗人附睪蛋白4單克隆抗體；所述的包被膜(33)沿背離結合物墊(32)的方向設有四道檢測線T和一道質控線(C)。本實用新型提供的腫瘤標志物檢測試劑盒適于同時檢測多種腫瘤標記物，提高了臨床中使用試劑盒進行腫瘤檢測的陽新復合率。
【專利說明】
一種腫瘤標志物檢測試劑盒
技術領域
[0001]本實用新型公開了一種檢測試劑盒，具體而言，涉及一種腫瘤標志物檢測試劑盒，屬于量子點熒光標記免疫檢測領域。
【背景技術】
[0002]臨床上，腫瘤標志物已經應用多年，盡管在腫瘤的診斷和療效觀察中提供了很好的依據，但單指標檢測存在特異性不強、陽性率低等不足。近年來，為提高診斷的準確性，降低漏檢率，臨床上常將幾項相關的腫瘤標志物組合對腫瘤進行檢測。肝癌、胰腺癌和肺癌發(fā)病率非常之高，若能早診斷、早治療，治愈率能得到顯著的提高。腫瘤標志物的聯(lián)合檢測為腫瘤診斷提供了一種很好的輔助手段，多腫瘤標志物的聯(lián)合檢測很大程度上克服了單指標測定靈敏度低，漏檢率高等缺點，越來越受到臨床的重視。
[0003]但目前的檢測技術存在以下問題:
[0004]1、放射免疫分析法:該技術所用試劑具有放射性，對人體有一定的危害，實驗人員應加強防護。同時實驗試劑存在半衰期，試劑須在半衰期內用完。
[0005]2、免疫放射分析法:該技術應用范圍小，僅限于肽類和蛋白質，很多小分子半抗原不能應用。該技術還可能出現“倒鉤現象”也就是待測抗原的濃度很高時，復合物反而會降低。
[0006]3、酶標記免疫分析技術:該技術由于各個標本的操作間隔小，容易互相污染。同時可能會出現“倒鉤現象”。
[0007]4、膠體金檢測法，該方法操作簡單，但是靈敏度低，特別是感染量少的話，可能會出現漏檢、誤檢的情況。
[0008]因此，本領域迫切需要提供一種在臨床中能夠實現較高陽性符合率的快速檢測裝置。
【實用新型內容】
[0009]有鑒于此，本實用新型提供了一種腫瘤標志物檢測試劑盒，包括盒體、盒蓋、量子點熒光檢測試劑卡;所述的試劑卡包括底基及置于底基上依次連接的樣品墊、量子點結合物墊、包被膜、吸水墊及產品名稱識別墊;所述的量子點結合物墊含有量子點標記的癌抗原125單克隆抗體、量子點標記的癌抗原15-3單克隆抗體、量子點標記的鱗狀細胞癌抗原單克隆抗體、量子點標記的人附睪蛋白4單克隆抗體;所述的包被膜沿背離量子點結合物墊的方向設有四道檢測線T和一道質控線C，其中，第一條檢測線T包被有固相化的抗癌抗原125單克隆抗體、第二條檢測線T包被有固相化的抗癌抗原15-3單克隆抗體、第三條檢測線T包被有固相化的抗鱗狀細胞癌抗原單克隆抗體、第四條檢測線T包被有固相化的抗人附睪蛋白4單克隆抗體，質控線C包被有固化的羊抗鼠多克隆抗體。
[0010]優(yōu)選地，所述的盒蓋上設有加樣孔、結果檢測窗口和產品名稱觀察窗口。
[0011]優(yōu)選地，所述的樣品墊右端具有搭接在所述的量子點結合物墊上的樣品搭接部，所述的量子點結合物墊右端具有搭接在所述包被膜上的結合物搭接部，所述的吸水墊左端具有搭接在包被膜上的吸水搭接部。
[0012]優(yōu)選地，所述的樣品搭接部在其延伸方向上與所述的結合物搭接部留有間距。
[0013]優(yōu)選地，所述的樣品墊是由玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙或無紡布制成的樣品墊。
[0014]優(yōu)選地，所述的量子點結合物墊是由聚酯纖維素膜或玻璃纖維膜制成的量子點結合物墊。
[0015]優(yōu)選地，所述的包被膜是由硝酸纖維素膜制成的包被膜。
[0016]優(yōu)選地，腫瘤標志物檢測試劑盒進一步包括一種或多種選自下組的組成部分:用于固定所述的量子點熒光檢測試劑卡的固定底座、上蓋、干燥劑、滴管、說明書、顏色標簽、樣品收集管、和樣品稀釋液。
[0017]優(yōu)選地，所述的加樣孔設有與其相配套的封口鋁膜。
[0018]優(yōu)選地，所述的盒蓋與盒體由固定于盒體上的轉軸連接。
[0019]本實用新型提供的試劑盒采用了量子點作為熒光標記物，利用雙抗體夾心的免疫學方法檢測樣本中的待測物。不僅能夠對待測物進行定性的檢測，還可以使用熒光免疫分析儀對檢測線T區(qū)域的量子點發(fā)射熒光強度進行測定，待測物的濃度和相應檢測線T的發(fā)射熒光強度成正相關。通過建立校準品濃度與熒光強度曲線，可以擬合計算出待測樣本中癌抗原125、抗癌抗原15-3、鱗狀細胞癌抗原、抗人附睪蛋白4的含量。由此可以看出，與現有技術相比，實驗過程簡單、快速、安全，局限性小，適用范圍廣，靈敏度高，特別是能夠通過量子點標記腫瘤標志物的量子點熒光產率，檢測出待檢腫瘤標志物的含量。
【附圖說明】
[0020]圖1是本實用新型提供的試劑盒結構示意圖；
[0021 ]圖2是本實用新型提供的試紙條的結構示意圖；
[0022]圖3是本實用新型提供的試紙條判定結果為癌抗原125、抗癌抗原15-3、鱗狀細胞癌抗原、抗人附睪蛋白4四種腫瘤標志物均為陽性時示意圖；
[0023]圖4是本實用新型提供的試紙條判定結果為癌抗原125陽性和抗人附睪蛋白4兩種腫瘤標志物為陽性時示意圖；
[0024]圖5是本實用新型提供的試紙條判定結果為抗人附睪蛋白4一種腫瘤標志物為陽性時不意圖；
[0025]圖6是本實用新型提供的試紙條判定結果為無效時示意圖。
[0026]其中，盒體I，盒蓋2，量子點熒光檢測試劑卡3，樣品墊31，量子點結合物墊32，包被膜33，檢測線T，質控線C。
【具體實施方式】
[0027]下面結合具體實施例的方式對本實用新型的權利要求做進一步的詳細說明，但并不構成對本實用新型的任何限制，任何人在本實用新型權利要求范圍內所做的有限次的修改，仍在本實用新型的權利要求范圍之內。
[0028]參見圖1，本實用新型提供了一種腫瘤標志物檢測試劑盒，包括盒體1、盒蓋2、量子點熒光檢測試劑卡3;所述的試劑卡3包括底基36及置于底基36上依次連接的樣品墊31、量子點結合物墊32、包被膜33、吸水墊34及產品名稱識別墊35;所述的量子點結合物墊32含有量子點標記的癌抗原125單克隆抗體、量子點標記的癌抗原15-3單克隆抗體、量子點標記的鱗狀細胞癌抗原單克隆抗體、量子點標記的人附睪蛋白4單克隆抗體;所述的包被膜33沿背離量子點結合物墊32的方向設有四道檢測線T和一道質控線C，其中，第一條檢測線T包被有固相化的抗癌抗原125單克隆抗體、第二條檢測線T包被有固相化的抗癌抗原15-3單克隆抗體、第三條檢測線T包被有固相化的抗鱗狀細胞癌抗原單克隆抗體、第四條檢測線T包被有固相化的抗人附睪蛋白4單克隆抗體，質控線C包被有固化的羊抗鼠多克隆抗體。
[0029]上述，樣品加到樣品墊31上后，其中的物質通過層析作用，依次移動到量子點結合物墊32和包被膜33上。當樣品移動到量子點結合物墊32時，量子點復溶，其中的待檢測抗體，如人抗體，可與量子點結合物墊32上量子點包被的特異性抗體相結合，然后含有從量子點結合物墊32上結合或混合的物質的樣品繼續(xù)移動到包被膜33上，并與包被膜33上包被的特異性抗體相結合并且被截留，從而使得樣品中的被檢物質得以被檢測。應該理解的是特異性抗體經包被液包被于包被膜33上，即檢測線T;質控線C通常為包被液包被與包被膜33上的羊抗鼠多克隆抗體或羊抗兔多克隆抗體。檢測線T與質控線C之間應留有適當間距，而設置為相互平行的區(qū)域，更便于區(qū)分兩者，參見圖2。
[0030]可以理解的是，量子點結合物墊32可同時含有量子點標記的癌抗原125單克隆抗體、量子點標記的癌抗原15-3單克隆抗體、量子點標記的鱗狀細胞癌抗原單克隆抗體、量子點標記的人附睪蛋白4單克隆抗體。當然，所述的量子點結合物墊32還可以包含其他的量子點標記的其他腫瘤標記物，這些腫瘤標記物應具備以下特點:
[0031 ] (I)敏感性高，腫瘤標志物在正常人體細胞內無法表達，血清中不含有腫瘤標志物成分，一旦檢出腫瘤標志物，即可判斷待檢樣品為陽性，病人可能為腫瘤患者，能早期在檢測出腫瘤，不漏診。
[0032](2)特異性強，不同腫瘤只能表達相關的特異性抗原，能方便鑒別出腫瘤非腫瘤。
[0033](3)存在于人體血清當中，易于臨床采樣和處理，便于檢測。
[0034](4)血清中腫瘤標志物含量與腫瘤體積大小、臨床分期相關，用以判斷預測疾病的可能病程和預后。
[0035](5)半衰期短，可以實時反映腫瘤的動態(tài)變化，監(jiān)測治療效果，判斷術后是否復發(fā)和轉移。
[0036](6)測定方法精密度、準確性高，操作方便。
[0037]本實用新型實施例中，所述的盒蓋2上設有加樣孔21、結果檢測窗口22和產品名稱觀察窗口 23。
[0038]上述，樣品由加樣口21加樣，由結果檢測窗口 22觀察量子點的焚光發(fā)光情況，應當理解的是，實施方式中，通過開設在盒蓋2上的產品名稱觀察窗口23能夠觀察到位于吸水墊34上的產品名稱識別墊35，從而獲得了對檢測裝置的檢測項目依據名稱進行準確分類、快速記錄檢測結果的效果。
[0039]本實用新型實施例中，所述的樣品墊31右端具有搭接在所述的量子點結合物墊32上的樣品搭接部，所述的量子點結合物墊32右端具有搭接在所述包被膜33上的結合物搭接部，所述的吸水墊34左端具有搭接在包被膜33上的吸水搭接部。
[0040]上述，“搭接”是指，相鄰的兩個組件的首尾部分重疊，并且在重疊處形成可以允許液體樣品移動的連接結構。例如，可以在相鄰的兩個組件的首尾部分通過按壓操作形成較為緊密的重疊結構，使得樣品能夠從上游組件的尾部通過該重疊結構移動至下游組件上。上游組件可以重疊在下游組件的上方，也可以重疊在下方。在檢測時，可以將液體狀態(tài)的樣品(如血液，血漿以及其他體液稀釋液等)加樣到樣品墊31上，該液態(tài)狀態(tài)的樣品可以通過吸水作用，沿著樣品墊31向與之搭接的量子點結合物墊32移動，接觸到量子點結合物墊32后再沿著量子墊結合物墊32向與之搭接的包被膜33移動，接觸到包被膜33之后再沿著包被膜33向與之搭接的吸水墊34移動。
[0041]本實用新型實施例中所述的樣品搭接部在其延伸方向上與所述的結合物搭接部留有間距。
[0042]上述，樣品由樣品墊31向吸水墊34的移動通常稱為層析作用，由此可知，進一步的，所述的樣品搭接部在其延伸方向上與所述的結合物搭接部留有間距，可以使得量子點結合物墊32上量子標記后特異性抗體能夠與樣品中的待測抗原留有充分的結合時間，如待測樣品中存在所要檢測的特異性抗原，則可以在含有量子點標記后特異性抗體的結合物墊處形成抗原一抗體一量子點復合物;所述的結合物搭接部在其延伸方向上與所述的吸水搭接部留有間距，預留充分的結合時間以便上述抗原一抗體一量子點復合物于包被膜33上形成抗體一抗原一抗體一量子點復合物，即發(fā)生雙抗夾心的特異性結合。
[0043]本實用新型實施例中，所述樣品墊31是由玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙或無紡布制成的樣品墊31。
[0044]上述，樣品墊31可以是由聚酯膜、纖維素濾紙或無紡布制成的樣品墊，優(yōu)選玻璃纖維樣品墊;玻璃纖維相對于其他材料脫水性好、不黏連樣品。
[0045]本實用新型實施例中，所述的量子點結合物墊32是由聚酯纖維素膜或玻璃纖維膜制成的量子點結合物墊32。
[0046]上述，量子點結合物墊3可由玻璃纖維膜制成，優(yōu)選地由聚酯纖維素膜制成，聚酯纖維素膜與膠體金的親和力優(yōu)于其他材料制成的結合物墊，防止膠體金發(fā)生聚集或形成沉淀。
[0047]本實用新型實施例中，所述的包被膜33是由硝酸纖維素膜制成的包被膜33。
[0048]上述，包被膜33優(yōu)選硝酸纖維素膜制成的包被膜33，硝酸纖維素膜的蛋白固定能力優(yōu)于其他材料制成的包被膜33，能夠更好的固化包被在其上的蛋白質。
[0049]本實用新型實施例中，腫瘤標志物檢測試劑盒進一步包括一種或多種選自下組的組成部分:用于固定所述的量子點熒光檢測試劑卡3的固定底座、上蓋、干燥劑、滴管、說明書、顏色標簽、樣品收集管、和樣品稀釋液。
[0050]上述，以上組成部分均為腫瘤標志物檢測試劑盒使用時或保存時的常用物品，便于操作，可與檢測試劑盒組合成便于臨床操作的檢測套裝。
[0051]本實用新型實施例中，所述的加樣孔21設有與其相配套的封口鋁膜。
[0052]上述，盒蓋2還包括與加樣孔21相配套的封口鋁膜，用于使用前保護量子點熒光檢測試劑卡3不被污染，封口鋁膜可以存在多種形式。
[0053]本實用新型實施例中，所述的盒蓋2與盒體I由固定于盒體I上的轉軸連接。
[0054]上述，盒蓋2可以通過固定于盒體I上的豎直轉軸與盒體I相連接，盒蓋2能夠相對于盒體I水平滑動，打開和閉合盒體I，相應的，盒蓋2還可以通過固定于盒體I上的水平轉軸與盒體I相連接，盒蓋2能夠相對于盒體I向上翻開，打開和閉合盒體I。
[0055]本實用新型還提供了上述的腫瘤標志物檢測試劑盒中所述的量子點結合物墊
(32)制備工藝程序如下:
[0056](I)稱量碳二亞胺1mg加純化水至lmL，作為EDC溶液備用;稱量甘氨酸75mg加純化水至ImL，混勾備用。
[0057](2)在微量離心管中加入1mL羧基水溶性量子點(8ymol/mL)，然后加入上述7.5yLEDC溶液，400ul 0.0lM PBS溶液，室溫下振蕩反應20min，成為量子點工作液。將需要活化的抗體量Img,加入100yL量子點工作液的微量咼心管中，室溫振蕩反應2小時。將反應完畢后的微量離心管中加入過量的甘氨酸溶液，置于低溫高速離心機中4°C，12000r/min離心2011^11。各沉淀分別加適量的0.0謂PBS緩沖液，使其溶解。溶解后置4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0058](3)準備點膜機用0.0lM PBS沖洗管道，排空沖洗管道、調整點膜機噴液膜式設備參數使栗頭噴液范圍為30yL/cm± 3%。取上述溶解后的量子點標記的癌抗原125單克隆抗體、量子點標記的癌抗原15-3單克隆抗體、量子點標記的鱗狀細胞癌抗原單克隆抗體、量子點標記的人附睪蛋白4單克隆抗體加入一支試管內，添加0.0lMPBS溶液定容至噴液所需要用莖，混勾后加入點I旲機針1?內，備用。
[0059](4)設置栗頭位置，用點膜機在量子點結合物墊上連續(xù)均勻噴液，實時監(jiān)控各玻璃纖維噴液情況，標記不均勻區(qū)段。將噴液完畢的量子點結合物墊置干燥間37°C干燥2小時。自封袋中室溫保存?zhèn)溆谩?br>[0060]本實用新型提供的腫瘤標志物檢測試劑盒中量子點熒光檢測試劑卡的具體使用方法:
[0061]使用時除去外包裝，取出腫瘤標志物檢測試劑盒，由加樣孔，垂直地滴入約100微升樣品，15分鐘后觀察檢測結果，參見3至圖6，圖3中四條檢測線T和質控線C在紫外燈的照射下均觀察到熒光發(fā)光現象，則樣品中含有上述四種腫瘤標志物。圖4中第一條檢測線T和第四條檢測線T及質控線C在紫外燈的照射下均觀察到熒光發(fā)光現象，則樣品中含有癌抗原125和人附睪蛋白4這兩種腫瘤標記物。圖5中第四條檢測線T和質控線C在紫外燈的照射下均觀察到熒光發(fā)光現象，則樣品中僅含有腫瘤標記物人附睪蛋白4。圖6中，四條檢測線T和質控線C均未觀察到熒光發(fā)光現象，因此檢測結果無效。
[0062]進一步的將檢測線T觀察到熒光發(fā)光現象的將量子點熒光檢測試劑卡置于干式熒光免疫分析儀下測讀結果，則可進行定量分析。
【主權項】
1.一種腫瘤標志物檢測試劑盒，其特征在于:所述的試劑盒包括盒體(I)、盒蓋(2)、量子點熒光檢測試劑卡(3);所述的試劑卡(3)包括底基(36)及置于底基(36)上依次連接的樣品墊(31)、量子點結合物墊(32)、包被膜(33)、吸水墊(34)及產品名稱識別墊(35);所述的量子點結合物墊(32)含有量子點標記的癌抗原125單克隆抗體、量子點標記的癌抗原15-3單克隆抗體、量子點標記的鱗狀細胞癌抗原單克隆抗體、量子點標記的人附睪蛋白4單克隆抗體;所述的包被膜(33)沿背離量子點結合物墊(32)的方向設有四道檢測線T和一道質控線(C)，其中，第一條檢測線(T)包被有固相化的抗癌抗原125單克隆抗體、第二條檢測線(T)包被有固相化的抗癌抗原15-3單克隆抗體、第三條檢測線(T)包被有固相化的抗鱗狀細胞癌抗原單克隆抗體、第四條檢測線(T)包被有固相化的抗人附睪蛋白4單克隆抗體，質控線(C)包被有固化的羊抗鼠多克隆抗體。2.如權利要求1所述的腫瘤標志物檢測試劑盒，其特征在于:所述的盒蓋(2)上設有加樣孔(21)、結果檢測窗口(22)和產品名稱觀察窗口(23)。3.如權利要求1所述的腫瘤標志物檢測試劑盒，其特征在于:所述的樣品墊(31)右端具有搭接在所述的量子點結合物墊(32)上的樣品搭接部，所述的量子點結合物墊(32)右端具有搭接在所述包被膜(33)上的結合物搭接部，所述的吸水墊(34)左端具有搭接在包被膜(33)上的吸水搭接部。4.如權利要求3所述的腫瘤標志物檢測試劑盒，其特征在于:所述的樣品搭接部在其延伸方向上與所述的結合物搭接部留有間距。5.如權利要求1所述的腫瘤標志物檢測試劑盒，其特征在于:所述樣品墊(31)是由玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙或無紡布制成的樣品墊(31)。6.如權利要求1所述的腫瘤標志物檢測試劑盒，其特征在于:所述的量子點結合物墊(32)是由聚酯纖維素膜或玻璃纖維膜制成的量子點結合物墊(32)。7.如權利要求1所述的腫瘤標志物檢測試劑盒，其特征在于:所述的包被膜(33)是由硝酸纖維素膜制成的包被膜(33)。8.如權利要求1所述的腫瘤標志物檢測試劑盒，其特征是進一步包括一種或多種選自下組的組成部分:用于固定所述的量子點熒光檢測試劑卡(3)的固定底座、上蓋、干燥劑、滴管、說明書、顏色標簽、樣品收集管、和樣品稀釋液。9.如權利要求2所述的腫瘤標志物檢測試劑盒，其特征在于:所述的加樣孔(21)設有與其相配套的封口鋁膜。10.如權利要求1所述的腫瘤標志物檢測試劑盒，其特征在于:所述的盒蓋(2)與盒體(I)由固定于盒體(I)上的轉軸連接。
【文檔編號】G01N33/58GK205484371SQ201620274282
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年3月31日
【發(fā)明人】張兆鴻
【申請人】珠海華澳生物科技有限公司