一種測(cè)定水中阿維菌素殘留的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種測(cè)定水中阿維菌素殘留的方法，它是將樣品經(jīng)0.22μm的濾膜過(guò)濾后，用含有70μL三氯甲烷的1.0mL丙酮萃取，氮?dú)獯蹈桑儆?0.0μL甲醇溶解，取20μL進(jìn)行色譜分析，采用甲醇∶水（80∶20）作為流動(dòng)相，245 nm紫外檢測(cè)器檢測(cè)阿維菌素殘留。結(jié)果表明：在10~500μg/mL之間線性良好，相關(guān)系數(shù)=0.999。添加濃度為0.1，1.0，5.0μg/mL時(shí)，阿維菌素的平均回收率分別為92.51%、95.03%、82.84%，按信噪比10倍計(jì)算，檢出限為0.1μg/mL。說(shuō)明采用本發(fā)明的方法凈化水中阿維菌素快速、環(huán)保。
【專利說(shuō)明】
一種測(cè)定水中阿維菌素殘留的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于儀器檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及作為農(nóng)藥，獸藥的殺蟲劑殘留檢測(cè)的方法，更 具體的說(shuō)是一種阿維菌素水中殘留的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 阿維菌素(Abamectin，ABA)是由日本北里大學(xué)和美國(guó)默克公司首先開(kāi)發(fā)的一類十 六元大環(huán)內(nèi)酯類化合物，對(duì)螨類和昆蟲具有胃毒和觸殺作用，是一種高效、廣譜的抗生素類 殺蟲、殺螨劑，在農(nóng)作物和家畜中應(yīng)用廣泛。然而，阿維菌素的急性經(jīng)口毒性很高，對(duì)大鼠 的致死中量值為10.6~11.3 mg/ kg，對(duì)哺乳動(dòng)物的繁殖能力具有潛在的毒性。我國(guó)農(nóng)業(yè) 部規(guī)定：牛肉組織中阿維菌素的最高殘留限量(MRL)為50~100 yg/ kg，羊肉組織中阿維菌 素的MRL為25~50 yg/kg。阿維菌素作為農(nóng)藥使用時(shí)，可能會(huì)被雨水沖刷入水中；作為獸藥使 用時(shí)，動(dòng)物糞便中的藥物也可以被雨水沖刷入水中，造成水污染。水中阿維菌素會(huì)造成地下 水或者農(nóng)作物用水的污染。因此，監(jiān)測(cè)水中阿維菌素殘留對(duì)保障人類健康和保護(hù)環(huán)境至關(guān) 重要。
[0003] 近年來(lái)，對(duì)阿維菌素在農(nóng)作物及畜產(chǎn)品中殘留的分析方法研究眾多，但國(guó)內(nèi)關(guān)于 液相色譜微萃取提取、凈化水中阿維菌素的前處理方法未見(jiàn)報(bào)道。以往阿維菌素殘留的提 取及凈化方法有機(jī)試劑使用多，不僅對(duì)分析者身體健康有害，還易造成污染，試驗(yàn)將分散液 相微萃取凈化與高效液相色譜-紫(HPLC-UV)檢測(cè)方法相結(jié)合，建立了一種測(cè)定水中阿維菌 素殘留的方法。此方法有機(jī)試劑使用少，快速、環(huán)保。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明公開(kāi)了一種測(cè)定水中阿維菌素殘留的方法，其特征在于按如下的步驟進(jìn) 行： (1) 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制： 1) 儲(chǔ)備液:取阿維菌素100 mg，放入10 mL容量瓶，加甲醇定容，配成10 mg/mL的阿維菌 素溶液； 2) 工作液:用甲醇將阿維菌素儲(chǔ)備液稀釋，配制成10, 50，100, 200, 500 yg/mL濃度 的標(biāo)準(zhǔn)溶液； (2) 方法： 1) 色譜條件:Eclipse plus Ci8色譜柱3.5 _，4.6 mmX 100 mm，流動(dòng)相為甲醇：水的 體積比為80:20,流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為245 nm，柱溫為35 °C，進(jìn)樣量為20此，定 量方法采用外標(biāo)法； 2) 線性試驗(yàn):分別取10，50，100，200，500 yg/mL濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液20此，進(jìn)行HPLC分 析，每個(gè)濃度進(jìn)樣3次，以阿維菌素工作液濃度為橫坐標(biāo)，各濃度對(duì)應(yīng)的色譜峰面積的平均 值為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性相關(guān)性統(tǒng)計(jì)分析。
[0005] 3)水樣品前處理： 水樣經(jīng)0.22 ym的濾膜過(guò)濾，取5.0 mL過(guò)濾水樣置于15 mL帶塞的錐形離心管中，將含 有70.0此三氯甲烷的1.0 mL丙酮通過(guò)微量進(jìn)樣器快速注入離心試管中，然后渦旋10 s，混 合液從水相被萃取到氯仿溶液中，靜置10 min，分散在水相中的萃取溶劑氯仿沉積到試管 底部，用微量進(jìn)樣器吸取萃取溶劑至10 mL離心管中，再向過(guò)濾水樣中加入含有70此三氯 甲烷的1 mL丙酮，渦旋10 s，靜置10 min，取下層萃取溶劑，合并萃取溶液，氮?dú)獯蹈桑儆?50此甲醇溶解，渦旋30 s，取20此進(jìn)行色譜分析； 取6個(gè)空白水樣，前處理后進(jìn)行HPLC測(cè)定，按10倍信噪比（S/ N =10)進(jìn)行計(jì)算，本方 法對(duì)阿維菌素在水中的檢測(cè)限為0.1 yg/mL。
[0006] 本發(fā)明所述測(cè)定水中阿維菌素殘留的方法，其中的水樣品包括河水、自來(lái)水、井 水、湖水。
[0007] 本發(fā)明更加詳細(xì)的步驟如下： 1材料 1.1儀器 高效液相色譜儀，配手動(dòng)進(jìn)樣器和紫外檢測(cè)器(型號(hào)為Agilent-1260)，由安捷倫科技 有限公司生產(chǎn);Eclipse plus Cis色譜柱(3.5 wn，4.6 mmXlOO mm)，由安捷倫科技有限公 司生產(chǎn);微型旋渦混合儀(型號(hào)為WH-2)，由上海滬西分析儀器廠生產(chǎn)；超純水制作系統(tǒng)（型 號(hào)為UL UPURE)，由四川優(yōu)普超純科技有限公司生產(chǎn)。 1.2試劑 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品，由美國(guó)Sigma-Alorich公司生產(chǎn)；甲醇(色譜純），由天津康巢生物醫(yī) 藥有限公司生產(chǎn);丙酮(分析純）、三氯甲烷(分析純），由利安隆博華醫(yī)藥化學(xué)有限公司（天 津)生產(chǎn) 河水，取自天津市海河;湖水，取自天津市水上公園；自來(lái)水，取自天津農(nóng)學(xué)院獸醫(yī)學(xué)實(shí) 驗(yàn)室;井水，取自天津市寶坻區(qū)郝各莊鎮(zhèn)。所有水樣在分析前先過(guò)0.22 ym濾膜，除去顆粒 物。
[0008] 1.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 儲(chǔ)備液:取阿維菌素100 mg，放入10 mL容量瓶，加甲醇定容，配成10 mg/mL的阿維菌素 溶液。
[0009] 工作液：用甲醇將阿維菌素儲(chǔ)備液稀釋，配制成10, 50, 100, 200, 500 iig/mL濃 度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
[0010] 2 方法 2.1色譜條件 Eclipse plus Cis色譜柱(3.5 ym，4.6 mmXlOO mm)，流動(dòng)相為甲醇:水(80:20)，流速 為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為245 nm，柱溫為35 °C，進(jìn)樣量為20此，定量方法采用外標(biāo)法。
[0011] 2.2線性試驗(yàn) 分別取10,50，100,200,500邱/11^濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液20此，進(jìn)行冊(cè)^：分析。每個(gè)濃度 進(jìn)樣3次。以阿維菌素工作液濃度為橫坐標(biāo)，各濃度對(duì)應(yīng)的色譜峰面積的平均值為縱坐標(biāo) 作標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性相關(guān)性統(tǒng)計(jì)分析。
[0012] 2.3樣品前處理 水樣經(jīng)0.22 ym的濾膜過(guò)濾，取5.0 mL過(guò)濾水樣置于15 mL帶塞的錐形離心管中，將含 有70.0 iiL三氯甲烷的1.0 mL丙酮通過(guò)微量進(jìn)樣器快速注入離心試管中，然后渦旋10 s，混 合液從水相被萃取到氯仿溶液中，靜置10 min，分散在水相中的萃取溶劑氯仿沉積到試管 底部，用微量進(jìn)樣器吸取萃取溶劑至10 mL離心管中，再向過(guò)濾水樣中加入含有70此三氯 甲烷的1 mL丙酮，渦旋10 s，靜置10 min，取下層萃取溶劑，合并萃取溶液。氮?dú)獯蹈?，再?50此甲醇溶解，渦旋30 s，取20此進(jìn)行色譜分析。
[0013] 2.4添加回收率試驗(yàn) 樣品處理同2.3所述，水中阿維菌素的添加濃度分別為0.1，1.0,5.0邱/!^，同一天內(nèi) 重復(fù)測(cè)定5次，計(jì)算日內(nèi)變異系數(shù);連續(xù)測(cè)定3 d，計(jì)算日間變異系數(shù)。
[0014] 3結(jié)果與分析 3.1線性試驗(yàn) 在10~500 yg/mL濃度范圍內(nèi)線性良好，線性方程為7= 1 667.0;r+ 127.0,線性回歸 系數(shù)（?2) =0.999。標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1。
[0015] 3.2液相微萃取條件的分析 采用分散液相微萃取法對(duì)水中阿維菌素進(jìn)行前處理凈化，分別采用四氯化碳、三氯甲 烷、二氯甲烷作為萃取劑發(fā)現(xiàn)，只有采用三氯甲烷作為萃取試劑回收率最高。
[0016] 以三氯甲烷作為萃取劑，分別采用丙酮、甲醇、乙醇、乙腈作為分散劑發(fā)現(xiàn)，三氯甲 烷和甲醇、乙醇不能形成乳濁液，丙酮和乙腈作為分散劑時(shí)相比較，丙酮的萃取效果最好， 回收率最高。
[0017] 確定丙酮與三氯甲烷作為萃取劑和分散劑后，對(duì)丙酮和三氯甲烷的比例進(jìn)行了多 次試驗(yàn)，首先確定1 mL丙酮的萃取效果最好，分別采用含有50 yL、70 yL、100 yL、200 yL三 氯甲烷的1 mL丙酮作為萃取劑對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行萃取，試驗(yàn)結(jié)果表明：含有50此三氯甲烷的 1 mL丙酮對(duì)阿維菌素的萃取效果不好，回收率低;含有70 yL、100 yL、200 yL三氯甲烷的1 mL丙酮對(duì)阿維菌素的萃取效果良好，而且更高含量三氯甲烷的丙酮溶液進(jìn)行萃取，效果也 不增加，因此確定采用含有70 yL三氯甲烷的1 mL丙酮作為萃取劑，效果良好，經(jīng)濟(jì)環(huán)保。
[0018] 分別米用3 000 r/min離心5 min、3 000 r/min離心 10 min，靜置5 min、10 min、 15 min以促進(jìn)萃取過(guò)程，結(jié)果表明，靜置5 min萃取效率低，3 000 r/min離心5 min、3 000 r/min離心10 min，靜置10 min、15 min的萃取效率相同，本方法采用靜置10 min。
[0019] 3.3方法的靈敏度 取6個(gè)空白水樣，經(jīng)2.3處理后進(jìn)行HPLC測(cè)定，按10倍信噪比（S/ N =10)進(jìn)行計(jì)算， 本方法對(duì)阿維菌素在水中的檢測(cè)限為0.1 yg/mL，空白樣品色譜見(jiàn)圖2,0.1 yg/mL阿維菌素 類藥物添加樣品色譜見(jiàn)圖3。在阿維菌素的保留時(shí)間位置均無(wú)雜峰干擾。
[0020] 3.4方法的檢出限、回收率和精密度 阿維菌素從低到高3個(gè)濃度的樣品添加回收率和日內(nèi)變異系數(shù)見(jiàn)表1。平均回收率范圍 為82.84%~95.03%，日內(nèi)變異系數(shù)范圍為3.78%~7.04%，日間變異系數(shù)范圍為3.29%~4.29%， 回收率較高，重復(fù)性較好。
[0021] 3.5方法的可行性 為驗(yàn)證方法的可行性，將本方法應(yīng)用于4種不同水樣，即河水、自來(lái)水、井水、湖水中對(duì) 目標(biāo)待測(cè)物進(jìn)行測(cè)定，均未測(cè)出阿維菌素的殘留，結(jié)果見(jiàn)表1。
[0022]表1添加回收率及精密度測(cè)定

【附圖說(shuō)明】： 圖1為阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)曲線； 圖2為空白樣品色譜結(jié)果； 圖3為純水中添加0.1 yg/mL阿維菌素的色譜結(jié)果。
[0023]
【具體實(shí)施方式】
[0024] 下面通過(guò)具體的實(shí)施方案敘述本發(fā)明。除非特別說(shuō)明，本發(fā)明中所用的技術(shù)手段 均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法。另外，實(shí)施方案應(yīng)理解為說(shuō)明性的，而非限制本發(fā)明的 范圍，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍僅由權(quán)利要求書所限定。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背離本 發(fā)明實(shí)質(zhì)和范圍的前提下，對(duì)這些實(shí)施方案中的物料成分和用量進(jìn)行的各種改變或改動(dòng)也 屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0025] 實(shí)施例1 (1) 自來(lái)水樣品前處理： 水樣經(jīng)0.22 ym的濾膜過(guò)濾，取5.0 mL過(guò)濾水樣置于15 mL帶塞的錐形離心管中，將含 有70.0此三氯甲烷的1.0 mL丙酮通過(guò)微量進(jìn)樣器快速注入離心試管中，然后渦旋10 s，混 合液從水相被萃取到氯仿溶液中，靜置10 min，分散在水相中的萃取溶劑氯仿沉積到試管 底部，用微量進(jìn)樣器吸取萃取溶劑至10 mL離心管中，再向過(guò)濾水樣中加入含有70此三氯 甲烷的1 mL丙酮，渦旋10 s，靜置10 min，取下層萃取溶劑，合并萃取溶液，氮?dú)獯蹈?，再?50此甲醇溶解，渦旋30 s，取20此進(jìn)行色譜分析； (2) 色譜方法： 色譜條件:Eclipse plus Ci8色譜柱3.5 wii，4.6 mmX 100 mm，流動(dòng)相為甲醇:水的體 積比為80:20,流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為245 nm，柱溫為35 °C，進(jìn)樣量為20此，定量 方法米用外標(biāo)法； 實(shí)施例2 (1) 農(nóng)作物用水樣品前處理： 水樣經(jīng)0.22 ym的濾膜過(guò)濾，取5.0 mL過(guò)濾水樣置于15 mL帶塞的錐形離心管中，將含 有70.0此三氯甲烷的1.0 mL丙酮通過(guò)微量進(jìn)樣器快速注入離心試管中，然后渦旋10 s，混 合液從水相被萃取到氯仿溶液中，靜置10 min，分散在水相中的萃取溶劑氯仿沉積到試管 底部，用微量進(jìn)樣器吸取萃取溶劑至10 mL離心管中，再向過(guò)濾水樣中加入含有70此三氯 甲烷的1 mL丙酮，渦旋10 s，靜置10 min，取下層萃取溶劑，合并萃取溶液，氮?dú)獯蹈?，再?50此甲醇溶解，渦旋30 s，取20此進(jìn)行色譜分析； (2) 色譜方法： 色譜條件:￡(：]^86口1118&8色譜柱3.5 11111，4.6 1]1111\10〇1111]1，流動(dòng)相為甲醇:水的體 積比為80:20,流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為245 nm，柱溫為35 °C，進(jìn)樣量為20此，定量 方法米用外標(biāo)法； 實(shí)施例3 比較試驗(yàn) 結(jié)論：
(1)有機(jī)試劑用量小，環(huán)境友好;最大的特點(diǎn)就是有機(jī)試劑用量少，而且方法和方法不 同。
[0026] (2)前處理操作簡(jiǎn)單。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種測(cè)定水中阿維菌素殘留的方法，其特征在于按如下的步驟進(jìn)行： (1) 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制： 1) 儲(chǔ)備液:取阿維菌素100 mg，放入10 mL容量瓶，加甲醇定容，配成10 mg/mL的阿維菌 素溶液； 2) 工作液：用甲醇將阿維菌素儲(chǔ)備液稀釋，配制成10, 50，100, 200, 500 yg/mL濃度 的標(biāo)準(zhǔn)溶液； (2) 方法： 1) 色譜條件:Eclipse plus Cis色譜柱3.5 μηι，4.6 mmX 100 mm，流動(dòng)相為甲醇:水的體 積比為80:20,流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為245 nm，柱溫為35 °C，進(jìn)樣量為20 yL，定量 方法米用外標(biāo)法； 2) 線性試驗(yàn)：分別取10，50，100，200，500 yg/mL濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液20 yL，進(jìn)行HPLC分 析，每個(gè)濃度進(jìn)樣3次，以阿維菌素工作液濃度為橫坐標(biāo)，各濃度對(duì)應(yīng)的色譜峰面積的平均 值為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性相關(guān)性統(tǒng)計(jì)分析； 3) 水樣品前處理： 水樣經(jīng)0.22 μπι的濾膜過(guò)濾，取5.0 mL過(guò)濾水樣置于15 mL帶塞的錐形離心管中，將含 有70.0 yL三氯甲烷的1.0 mL丙酮通過(guò)微量進(jìn)樣器快速注入離心試管中，然后渦旋10 s，混 合液從水相被萃取到氯仿溶液中，靜置10 min，分散在水相中的萃取溶劑氯仿沉積到試管 底部，用微量進(jìn)樣器吸取萃取溶劑至10 mL離心管中，再向過(guò)濾水樣中加入含有70 yL三氯 甲烷的I mL丙酮，渦旋10 s，靜置10 min，取下層萃取溶劑，合并萃取溶液，氮?dú)獯蹈?，再?50此甲醇溶解，渦旋30 s，取20 yL進(jìn)行色譜分析； 取6個(gè)空白水樣，前處理后進(jìn)行HPLC測(cè)定，按10倍信噪比，S/ N =10進(jìn)行計(jì)算，其中對(duì) 阿維菌素在水中的檢測(cè)限為0.1 yg/mL。2. 權(quán)利要求1所述測(cè)定水中阿維菌素殘留的方法，其中的水樣品包括河水、自來(lái)水、井 水、農(nóng)作物水、湖水。
【文檔編號(hào)】G01N30/06GK105911184SQ201610246880
【公開(kāi)日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年4月20日
【發(fā)明人】張偉, 張?chǎng)? 張欣達(dá), 張超, 金天明
【申請(qǐng)人】天津農(nóng)學(xué)院