表9所述。
[0171] 表9
[0172]
[0173]
[0174] 效果實施例1
[0175] 檢出限的測定
[0176] 將實施例1中濃度為4yg/Kg混合標準工作溶液搖勻，進樣10化，按實施例1中LC- MS/MS條件進行分析。信噪比S/N=3時，測得阿莫西林、青霉素 G和青霉素 V的檢出限，W及信 噪比S/N=10時，測得阿莫西林、青霉素 G和青霉素 V的定量限如表10所示。
[0177] 表10
[017 引
[0179] 本發(fā)明阿莫西林、青霉素 G和青霉素 V的檢測方法，其定量限和國家獸藥最低殘余 量(農(nóng)業(yè)部第235公告)相比，可W滿足國家獸藥最高限量定量的要求。
[0180] 效果實施例2
[0181] 精密度的測定
[0182] 取6份實施例1中制備的30yg/Kg的混合標準工作溶液，作為樣品液，每次進樣10μ L，重復進樣8次，按實施例1中LC-MS/MS的條件進行分析。具體測量結(jié)果如表11所示。測定阿 莫西林峰面積A，RSD為6.85 % (6份樣品），表明精密度良好。
[0183] RSD為相對標準偏差(relative standard deviation),指標準偏差與計算結(jié)果算 術(shù)平均值的比值。
[0184] 表11
[0185]
[0186]
[0187]效果實施例3
[018引穩(wěn)定性的測定
[0189] 將實施例1中制備的濃度為l(K)yg/Kg的混合標準工作溶液，連續(xù)進樣8次，測定阿 莫西林的峰面積，外標法定量，計算其濃度，其結(jié)果如表12所示，RSD值為3.99%，表明檢測 方法穩(wěn)定性良好。
[0190] RSD為相對標準偏差(relative standard deviation),指標準偏差與計算結(jié)果算 術(shù)平均值的比值。
[0191] 表12
[0192]
[0193]
[0194] 效果實施例4
[01%]本效果實施例用于證明本發(fā)明預處理方法的準確性(測定其回收率），其結(jié)果如表 13所述。
[0196] 取Ξ組同樣的普通原料牛乳，編號為1、2、3。其中，編號1為空白樣品，不做任何處 理;編號2中的牛奶分別加入40yg/Kg的阿莫西林標準溶液lmL、4化g/Kg的青霉素 G標準溶液 ImL和40yg/Kg的青霉素 V標準溶液ΙιΛ;編號3中的牛奶分別加入20化g/Kg的阿莫西林標準 溶液lmL、2(K)yg/Kg的青霉素 G標準溶液ImL和2(K)yg/Kg的青霉素 V標準溶液ImL。將上述3組 分別進行如實施例2中的預處理，按照實施例1中LC-MS/MS條件進行分析，上述3組分別重復 進樣5次，取平均值。計算其回收率，得到結(jié)果如表13所示。
[0197] 表13加標回收率實驗結(jié)果
[019 引
[0199] 注明:N表示未檢出。
【主權(quán)項】
1. 一種預處理方法，其特征在于，其包括以下步驟： (1) 將待測樣品和乙腈的混合物，離心，收集上清液;所述的待測樣品為不含固體顆粒 的乳制品； (2) 將所述上清液上樣至已經(jīng)活化的Oasis PRiME HLB固相萃取小柱，收集流出液，即 得預處理后的待測樣品。2. 如權(quán)利要求1所述的預處理方法，其特征在于，所述的待測樣品為原料乳和/或液態(tài) 乳制品； 所述的液態(tài)乳制品較佳地為高鈣牛奶、高鐵牛奶、低乳糖牛奶和低脂牛奶中的一種或 多種； 所述的原料乳較佳地為牛乳。3. 如權(quán)利要求1所述的預處理方法，其特征在于，步驟（1)中，所述的待測樣品中，阿莫 西林的含量為4~1000yg/Kg，較佳地為10~500yg/Kg，更佳地為10~50yg/Kg;所述的待測 樣品中，青霉素 G的含量為4~1000yg/Kg，較佳地為10~500yg/Kg，更佳地為10~50yg/Kg; 所述的待測樣品中，青霉素 V的含量為5~1000yg/Kg，較佳地為10~500yg/Kg，更佳地為10 ~50yg/Kg; 步驟（1)中，所述乙腈的添加量為3~40mL/l~4g待測樣品，較佳地為4~10mL/lg待測 樣品； 步驟（1)中，在所述離心的操作之前，先將所述混合物進行漩渦震蕩；所述的旋渦震蕩 的時間較佳地為1~1 Omin; 步驟（1)中，所述混合物中還包含酸;所述酸較佳地為甲酸和/或乙酸;所述酸的添加量 為0.1~2%，較佳地為0.8~1.2%;上述百分比為所述酸占所述乙腈的體積百分比；較佳地 使用所述乙腈和酸進行兩次離心操作； 步驟（1)中，所述的離心的轉(zhuǎn)速為5000~15000rpm;所述的離心的時間為5~30min。4. 如權(quán)利要求1所述的預處理方法，其特征在于，步驟(1)中，將所述上清液先進行定容 后再進行步驟(2)的操作;所述定容的操作過程中，較佳地使用水或乙腈進行定容;所述定 容的終點較佳地為1 〇~2 5mL/g所述待測樣品； 步驟(2)中，活化采用的溶劑種類為乙腈水溶液或甲醇水溶液;所述乙腈水溶液中，乙 腈占水的體積百分比較佳地為10~80%;所述甲醇水溶液中，甲醇占水的體積百分比較佳 地為10~80% ;所述乙腈水溶液或所述甲醇水溶液的用量較佳地為3~8mL; 步驟(2)中，所述上清液在所述固相萃取小柱中的流速為0.025~0.30mL/s。5. -種待測成分的檢測方法，所述待測成分為阿莫西林、青霉素 G和青霉素 V中的一種 或多種，其特征在在于，其包括以下步驟： (1) 將如權(quán)利要求1~4任一項所述預處理后的待測樣品去除溶劑，再用溶劑A溶解，過 濾，得進料樣品;所述溶劑A為甲醇水溶液、乙腈水溶液或水； (2) 將步驟(1)中所述進料樣品再進行高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)二級質(zhì)譜檢測所述待 測成分，即可。6. 如權(quán)利要求5所述的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，所述去除溶劑的方法用20~ 50 °C氮氣吹干； 步驟（1)中，所述乙腈水溶液中，乙腈占水的體積百分比為1~20%;所述甲醇水溶液 中，甲醇占水的體積百分比為1~20%; 步驟(1)中，所述溶劑A的用量為1~2mL/g所述待測樣品； 步驟(1)中，所述的過濾采用孔徑為〇. 22μπι或0.45μπι的有機微孔濾膜進行過濾。7. 如權(quán)利要求5所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)所述的高效液相色譜-電噴霧串 聯(lián)二級質(zhì)譜檢測中，高效液相色譜法檢測的色譜柱為十八硅烷鍵合硅膠色譜柱;所述的十 八硅烷鍵合硅膠色譜柱的規(guī)格較佳地為4.6_ X 250mm或4.6_ X 150mm。8. 如權(quán)利要求5所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)所述的高效液相色譜-電噴霧串 聯(lián)二級質(zhì)譜檢測中，高效液相色譜法使用梯度洗脫的方法，流動相A為乙腈和甲酸的混合 液，流動相B為水和甲酸的混合液;所述流動相A中，所述甲酸的用量較佳地為流動相A總體 積的0.05~0.1 % ;述流動相B中，所述甲酸的用量較佳地為流動相B總體積的0.05~0.1 % ; 其中，較佳地，所述流動相A和所述流動相B的梯度洗脫條件如表2所示： 表2其中，百分比為各組分分別占流動相A和流動相B總體積的體積百分比。9. 如權(quán)利要求5所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)所述的高效液相色譜-電噴霧串 聯(lián)二級質(zhì)譜檢測中，高效液相色譜法檢測的柱溫為25~35°C ; 步驟(2)所述的高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)二級質(zhì)譜檢測中，所述的高效液相色譜法檢 測的所述待測樣品的流速為〇. 6~1.5mL/m i η; 步驟(2)所述的高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)二級質(zhì)譜檢測中，所述阿莫西林的高效液相 色譜法檢測的檢測波長為228nm;所述青霉素 G的高效液相色譜法檢測的檢測波長為225nm; 所述青霉素 V的高效液相色譜法檢測的檢測波長為268nm; 步驟(2)所述的高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)二級質(zhì)譜檢測中，高效液相色譜法檢測的進 樣體積為15~2 5yL。10. 如權(quán)利要求5所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)所述的高效液相色譜-電噴霧 串聯(lián)二級質(zhì)譜檢測中，質(zhì)譜檢測的條件為： 定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量和去簇電壓如表3所示： 表3離子源：電噴霧離子源； 掃描模式:正尚子模式； 毛細管電壓:3500伏； 離子源溫度120 °C; 去溶劑溫度:550 °C; 檢測方式:多反應監(jiān)測。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種預處理方法及阿莫西林、青霉素G和青霉素V的檢測方法。預處理方法包括以下步驟：①將待測樣品和乙腈的混合物，離心，收集上清液；待測樣品為不含固體顆粒的乳制品；②將上清液上樣至已經(jīng)活化的Oasis？PRiME？HLB固相萃取小柱，收集流出液即得。本發(fā)明的預處理方法快速、簡單、經(jīng)濟、可靠，能夠有效地提取出待測組分，去除復雜基質(zhì)影響，有益于待測樣品的快速檢測。在保持較高提取率的同時，節(jié)約了有機溶劑的使用、排放和損失，有利于保護環(huán)境，節(jié)約了預處理步驟、時間和能耗，檢測方法快速，簡單，精密度高，準確性高，具有較強的應用價值。
【IPC分類】G01N30/02, G01N30/06
【公開號】CN105628808
【申請?zhí)枴緾N201510995920
【發(fā)明人】王淵龍, 游春蘋, 劉振民
【申請人】光明乳業(yè)股份有限公司
【公開日】2016年6月1日
【申請日】2015年12月25日