一種新生兒血型鑒定卡的制作方法
【專利說明】一種新生兒血型鑒定卡
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域
[0002]本發(fā)明涉及輸血醫(yī)學領(lǐng)域，尤其涉及一種新生兒血型鑒定卡。
[0003]
【背景技術(shù)】
[0004]新生兒溶血病(HDN)是指由于母子血型不合，母親體內(nèi)產(chǎn)生與胎兒血型抗原不配的血型抗體，這種抗體通過胎盤進入到胎兒體內(nèi)引起同族免疫性溶血，常見于ABO血型系統(tǒng)和Rh血型系統(tǒng)的血型不合，因此新生兒的血型鑒定對于新生兒溶血病的診斷有著重要意義。
[0005]新生兒由于自然發(fā)生的抗體量較少，大部分要到出生后幾個月才會形成血型抗體，且通常亦會存在來源于母體的抗體，因此新生兒的ABO血型檢測以及定型為主，無需進行反定型。
[0006]微柱凝膠免疫檢測技術(shù)是20世紀90年代產(chǎn)生的一種免疫檢測技術(shù)，其基本原理是利用分子篩技術(shù)、離心技術(shù)和特異性免疫反應技術(shù)原理，把血型血清學技術(shù)與凝膠分子篩技術(shù)有機結(jié)合起來，可靈敏地檢測出可能存在的微弱血型抗原抗體反應，被認為是血型血清學檢驗的里程碑。
[0007]目前國內(nèi)外已有一些廠家生產(chǎn)新生兒血型鑒定卡，但是存在以下一些不足:一是采用單一型號的葡聚糖凝膠或聚丙烯葡聚糖凝膠，使得靈敏度與特異性無法兼顧;二是采用生理鹽水或抗體緩沖液溶脹凝膠，使得凝膠無法充分完全溶脹，以及破壞反應體系的離子強度;三是對添加不同抗體的凝膠，凝膠洗滌緩沖液完全一致，無法有效保護抗體穩(wěn)定性；四是仍需要做反定型試驗，增加了操作人員的工作負擔。
[0008]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明就是要克服以上不足，提供一種靈敏度高、特異型好，穩(wěn)定性強、保質(zhì)期長的新生兒血型鑒定卡。
[0010]為達到上述目的，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案進行解決:
一種新生兒血型鑒定卡，包括含有六個微柱的檢測卡，所述六個微柱中分別裝有等量的抗A凝膠、抗B凝膠、抗AB凝膠、抗D凝膠、抗人球凝膠和空白凝膠，其通過以下方法制備而成:
(1)葡聚糖凝膠的溶脹:選用至少兩種交聯(lián)葡聚糖凝膠進行混合，然后加入純化水中進行充分懸浮溶脹，再用純化水洗滌去除破碎顆粒，得到大小均勻、呈完整球形的葡聚糖凝膠顆粒；
(2)制備各抗體稀釋液:
抗A稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)10-15g/L、牛血清白蛋白20-25g/L、蔗糖15-20g/L;抗A稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗B稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽15-20g/L、牛血清白蛋白15-20g/L、蔗糖25-30g/L，抗B稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗AB稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽15-20g/L、牛血清白蛋白 10-158/1、蔗糖18-268/1，稀釋液的?!1值為6.6-6.8；
抗D稀釋液:以磷酸鹽緩沖液(PBS)為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽10-15g/L、牛血清白蛋白35-40g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
空白凝膠洗滌緩沖液:以純化水為溶劑，緩沖液中含有氯化鈉I.75g-2.07g/L、磷酸氫二鈉0.185-0.2198/1、磷酸二氫鈉0.203-0.248/1、甘氨酸18-218/1;并調(diào)節(jié) pH值為6.6-6.8；
(3)制備各抗體工作液:
取抗A單克隆抗體濃縮液與抗A稀釋液進行混合，使得到的抗A單克隆抗體工作液的效價 M28;
取抗B單克隆抗體濃縮液與抗B稀釋液進行混合，使得到的抗B單克隆抗體工作液的效價 M28;
取抗AB單克隆抗體濃縮液與抗AB稀釋液進行混合，使得到的抗AB單克隆抗體工作液的效價2 128;
取抗D單克隆抗體濃縮液與抗D稀釋液進行混合，使得到的抗D單克隆抗體工作液的效價 2 64;
選取對抗D免疫球蛋白(IgG)致敏的紅細胞效價2 32的廣譜抗人球蛋白試劑；
(4)制備凝膠:
取六份等量的葡聚糖凝膠顆粒分別用等量的抗A稀釋液、抗B稀釋液、抗AB稀釋液、抗D稀釋液、空白凝膠洗滌緩沖液和空白凝膠洗滌緩沖液進行洗滌至少三次，再加入相對應的抗A單克隆抗體工作液、抗B單克隆抗體工作液、抗AB單克隆抗體工作液、抗D單克隆抗體工作液、廣譜抗人球蛋白試劑和空白凝膠洗滌緩沖液進行混合，得到抗A凝膠、抗B凝膠、抗AB凝膠、抗D凝膠、抗人球凝膠和空白凝膠；
(5)分裝:
按照每管24-32微升的量，將抗A凝膠、抗B凝膠、抗AB凝膠、抗D凝膠、抗人球凝膠和空白凝膠分別灌注到六個微柱中，形成新生兒血型鑒定卡。
[0011]進一步方案，所述步驟(I)中交聯(lián)葡聚糖凝膠為交聯(lián)葡聚糖凝膠G-25、交聯(lián)葡聚糖凝膠6-50、交聯(lián)葡聚糖凝膠6-75或交聯(lián)葡聚糖凝膠6-100。
[0012]進一步方案，所述步驟(I)中在交聯(lián)葡聚糖凝膠混合物中加入純化水中進行充分懸浮溶脹，其中交聯(lián)葡聚糖凝膠混合物和純化水的質(zhì)量體積比為1:2-1: 3。
[0013]進一步方案，所述步驟(I)中懸浮溶脹的時間為48-72小時。
[00? 4]進一步方案，所述步驟(4 )中抗A單克隆抗體工作液、抗B單克隆抗體工作液、抗AB單克隆抗體工作液、抗D單克隆抗體工作液、廣譜抗人球蛋白試劑、空白凝膠洗滌緩沖液分別與洗滌后葡聚糖凝膠顆粒按體積比為I: 2-1:3進行混合。
[0015]本發(fā)明選擇六等份由至少兩種交聯(lián)葡聚糖凝膠用純化水中進行溶脹所得的葡聚糖凝膠顆粒，再分別用抗A稀釋液、抗B稀釋液、抗AB稀釋液、抗D稀釋液、空白凝膠洗滌緩沖液和空白凝膠洗滌緩沖液分別對其進行洗滌至少三次，再加入相對應的抗A單克隆抗體工作液、抗B單克隆抗體工作液、抗AB單克隆抗體工作液、抗D單克隆抗體工作、廣譜抗人球蛋白試劑和空白凝膠洗滌緩沖液進行混合，得到抗A凝膠、抗B凝膠、抗AB凝膠、抗D凝膠、抗人球凝膠和空白凝膠。再將它們依次裝入檢測卡中的六個微柱中，形成新生兒血型鑒定卡。該檢測卡用來檢測新生兒的血型鑒定，從而實現(xiàn)對于新生兒溶血病進行診斷、預防和治療具有重要的臨床意義。
[0016]所以本發(fā)明的優(yōu)點是:
1、本發(fā)明采用不同大小、不同篩分范圍的交聯(lián)葡聚糖凝膠進行混合，有效避免了單一交聯(lián)葡聚糖凝膠的特異性與靈敏度不能兼顧的特點，可實現(xiàn)在保證特異性的同時，仍擁有很高的靈敏度；
2、本發(fā)明采用純化水作為交聯(lián)葡聚糖凝膠的溶脹溶液，可以使凝膠顆粒完全充分溶脹；
3、本發(fā)明用各抗體稀釋液洗滌葡聚糖凝膠顆粒，從而不會破壞抗體的保護液成分，能更有效的保證抗體的穩(wěn)定性;并保證了緩沖液體系的純粹性，不受其他離子的影響，有效保證了體系的離子強度。
[0017]4、本發(fā)明無需進行新生兒ABO反定型試驗，可減輕醫(yī)護人員操作負擔，并排除來源于母體的抗體對于試驗的干擾。
[0018]
具體實施辦法實施例一:
一種新生兒血型鑒定卡包括含有六個微柱的檢測卡，所述六個微柱中分別裝有等量的抗A凝膠、抗B凝膠、抗AB凝膠、抗D凝膠、抗人球凝膠和空白凝膠，其通過以下方法制備而成:
(1)葡聚糖凝膠的溶脹:
選用交聯(lián)葡聚糖凝膠G-25、交聯(lián)葡聚糖凝膠G-50和交聯(lián)葡聚糖凝膠G-75按照質(zhì)量比1:2:1進行混合得葡聚糖凝膠混合物，然后按照葡聚糖凝膠混合物和純化水的質(zhì)量體積比為1:3加入純化水，進行懸浮溶脹48小時后;再用純化水對其洗滌三次，去除破碎顆粒，得到大小均勻、呈完整球形的凝葡聚糖膠顆粒；
(2)抗體稀釋液的配制:
抗A稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)10g/L、牛血清白蛋白20g/L、蔗糖20g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗B稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)15g/L、牛血清白蛋白15g/L、蔗糖30g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗AB稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)16g/L、牛血清白蛋白12g/L、蔗糖20g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗D稀釋液:以磷酸鹽緩沖液(PBS)為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)15g/L、牛血清白蛋白40g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
空白凝膠洗滌緩沖液:以純化水為溶劑，緩沖液中含有氯化鈉1.75gg/L、磷酸氫二鈉
0.185g/L、磷酸二氫鈉0.203g/L、甘氨酸18g/L;并調(diào)節(jié)pH值為6.6-6.8；
(3)制備各抗體工作液: 取抗A單克隆抗體濃縮液與步驟(2)制備的抗A稀釋液進行混合得抗A單克隆抗體工作液，其抗A單克隆抗體工作液效價2 128;
取抗B單克隆抗體濃縮液與步驟(2)制備的抗B稀釋液混合得抗B單克隆抗體工作液，其抗B單克隆抗體工作液效價2 128;
取抗AB單克隆抗體濃縮液與步驟(2 )制備的抗AB稀釋液混合得抗AB單克隆抗體工作液，其抗AB單克隆抗體工作液效價2 128;
取抗D單克隆抗體濃縮液與步驟(2)制備的抗D稀釋液混合得抗D單克隆抗體工作液，其抗D單克隆抗體工作液效價I 64;
選取對抗D免疫球蛋白(IgG)致敏的紅細胞效價2 32的廣譜抗人球蛋白試劑；
(4)制備凝膠:
將步驟(I)中溶脹的葡聚糖凝膠顆粒均分為六等份，其中一份用等量的抗A稀釋液洗滌三次，再用抗A單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比1:2進行混合均勻，得到抗A凝膠；