一種海水中敵百蟲手性對(duì)映體的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種海水中敵百蟲手性對(duì)映體的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 敵百蟲[0, 0-二甲基-(2, 2, 2-三氯-1-羥基乙基）膦酸酯]屬于手性有機(jī)磷殺 蟲劑，對(duì)魚體內(nèi)外寄生的吸蟲、線蟲、棘頭蟲及危害魚苗、魚卵的枝角類、橈角類幼蟲和水蜈 蚣等均具有良好的殺滅作用。敵百蟲具有一個(gè)手性碳原子，一對(duì)手性對(duì)映體，其對(duì)映體結(jié)構(gòu) 式如圖1.1-1. 2所示。敵百蟲水解的后產(chǎn)物能與蟲體的膽堿酯酶相結(jié)合，使蟲體神經(jīng)肌肉 功能失常，先興奮，后麻痹，直至死亡，常作為抗寄生蟲藥用于海水養(yǎng)殖中殺滅魚虱等常見 魚體寄生蟲以提高漁業(yè)產(chǎn)量。敵百蟲在海水養(yǎng)殖中的推薦劑量為0. 1~lmg/L，然而在實(shí)際 養(yǎng)殖工程中，人們常常施用過量的敵百蟲，從而導(dǎo)致養(yǎng)殖水體中出現(xiàn)敵百蟲藥物殘留。敵百 蟲對(duì)非目標(biāo)生物也會(huì)產(chǎn)生毒性作用（抑制膽堿酯酶活性），帶有敵百蟲殘留的廢水排入河 流或海中，將直接或間接地危害環(huán)境及人類健康。
[0003] 目前，針對(duì)敵百蟲在土壤、環(huán)境、食品中的殘留檢測(cè)研究不少，但是尚沒有針對(duì)敵 百蟲對(duì)映體殘留進(jìn)行分析檢測(cè)，并且在以往的研究中，通常不區(qū)分海水養(yǎng)殖用藥的手性對(duì) 映體，那么水產(chǎn)品藥物殘留的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估所依據(jù)的數(shù)據(jù)則不完全真實(shí)。因此開展手性藥物對(duì) 映體拆分技術(shù)的研究，針對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖中常用的敵百蟲的選擇性殘留行為進(jìn)行系統(tǒng)研究，將 大大推進(jìn)水產(chǎn)養(yǎng)殖用手性藥物研究的進(jìn)展和應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種海水中敵百蟲手性對(duì)映體的檢測(cè)方法，采 用高效液相色譜法手性固定相法檢測(cè)海水中敵百蟲對(duì)映體的殘留量，可成功實(shí)現(xiàn)敵百蟲手 性對(duì)映體的拆分。
[0005] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種海水中敵百蟲手性對(duì)映體的 檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟：
[0006] 1)取養(yǎng)殖海水90~IlOmL于燒杯中，加入敵百蟲標(biāo)準(zhǔn)品5mg~IOmg,振蕩混勻后 加入1~2滴20wt%冰乙酸溶液，取10~50mL過HLB固相萃取小柱，然后用6~IOmL乙 酸乙酯洗脫，洗脫液收集于容量瓶中；
[0007] 2)將步驟1)中的洗脫液乙酸乙酯用氮?dú)獯抵两?，殘液用正己?異丙醇的流動(dòng) 相溶解定溶至lmL，并采用0. 22 μ m微孔濾膜進(jìn)行過濾后得到溶液A，它以正己烷與異丙醇 體積比為85~95:15~5做為流動(dòng)相對(duì)敵百蟲對(duì)映體進(jìn)行分離；
[0008] 3)采用高效液相色譜儀對(duì)上述溶液A進(jìn)行檢測(cè)；檢測(cè)時(shí)選用CHIRALCEL IC手性 柱，手性柱的柱溫為20°C~35°C，正己烷與異丙醇體積比為85~95:15~5做為流動(dòng)相， 檢測(cè)時(shí)的流速為〇· 7mL/min~1.0 mL/min，波長(zhǎng)為207nm。
[0009] 作為改進(jìn)，步驟2和3)的流動(dòng)相還含有乙醇，它以正己烷、異丙醇與乙醇體積比為 90:8~9. 5:2~0. 5做為流動(dòng)相對(duì)敵百蟲對(duì)映體和水樣中的雜質(zhì)進(jìn)行分離。
[0010] 再改進(jìn)，所述步驟2和3)的正己烷、異丙醇與乙醇的體積比為90:8. 5:1. 5。
[0011] 優(yōu)選，所述步驟3)的檢測(cè)時(shí)的流速為1.0 mL/min。
[0012] 優(yōu)選，所述步驟3)的柱溫為25°C。
[0013] 優(yōu)選，所述步驟3)的CHIRALCEL IC手性柱的填料為5 μ m硅膠表面涂布纖維 素-三[3, 5-二氯苯基氨基甲酸酯]。
[0014] 最后，所述步驟1)的HLB固相萃取小柱是經(jīng)甲醇+水活化。
[0015] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：采用高效液相色譜法手性固定相法檢測(cè)海 水中敵百蟲對(duì)映體的殘留量，成功實(shí)現(xiàn)了敵百蟲手性對(duì)映體的拆分，從而可對(duì)海水中敵百 蟲對(duì)映體的殘留量進(jìn)行檢測(cè)，為海水中手性藥物殘留檢測(cè)提供理論依據(jù)。其中，對(duì)映體及在 0. 5mg/L~10mg/L濃度范圍內(nèi)與其響應(yīng)值呈良好的線性關(guān)系，回歸方程及相關(guān)系數(shù)分別為 y = 20. 795x - L 7766、R2 = 0· 9993 及 y = 19. 730χ+2· 9066、R2 = 0· 9992,樣品平均回收 率分別為89. 07%和82. 93%，日間精密度分別為6. 77%和6. 29%，定量限分別為0. 05mg/ L 和 0· 04mg/L。
【附圖說明】
[0016] 圖I. 1~1. 2是本發(fā)明提供的敵百蟲對(duì)映體結(jié)構(gòu)式；
[0017] 圖2是本發(fā)明實(shí)施例中敵百蟲的色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 以下結(jié)合附圖實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0019] -種海水中敵百蟲手性對(duì)映體的檢測(cè)方法，包括以下步驟：
[0020] (1)取養(yǎng)殖海水IOOmL于燒杯中，加入敵百蟲標(biāo)準(zhǔn)品5mg~IOmg,振蕩混勻后加入 1~2滴20wt%冰乙酸（分析純）溶液，取10~50mL過HLB固相萃取小柱（經(jīng)5mL甲醇 +5mL水活化，然后用6~IOmL乙酸乙酯洗脫，洗脫液收集于IOmL容量瓶中；
[0021] (2)將步驟⑴中的洗脫液乙酸乙酯用氮?dú)獯抵两?，殘液用正己烷：異丙醇：?醇按照90:8. 5:1. 5 (V: V: V)溶解定溶至lmL，并采用0. 22 μ m微孔濾膜進(jìn)行過濾后得到溶液 A ；
[0022] (3)采用高效液相色譜儀對(duì)上述溶液A進(jìn)行檢測(cè)；檢測(cè)時(shí)選用CHIRALCEL IC手性 柱，該手性柱的填料為5 μ m硅膠表面涂布纖維素-三[3, 5-二氯苯基氨基甲酸酯];正己 烷：異丙醇：乙醇按照90:8. 5:1. 5(V:V:V)作為流動(dòng)相，所述手性柱的柱溫為20°C~35°C; 檢測(cè)時(shí)的流速為〇· 7mL/min~1.0 mL/min，波長(zhǎng)為207nm。
[0023] 在本實(shí)施例中，步驟（2和3)中分別使用正己烷與異丙醇體積比為95:5、90:10和 85:15的流動(dòng)相對(duì)敵百蟲進(jìn)行手性拆分，拆分結(jié)果如表1所示，可以看出，隨著流動(dòng)相中異 丙醇比例的增大，流動(dòng)相極性增強(qiáng)，分離度減小因此，所使用流動(dòng)相的最佳組成為正己烷與 異丙醇的體積分?jǐn)?shù)分別為90與10,在該流動(dòng)相配比條件下對(duì)映體分離效果良好。
[0024] 表 1
[0025]
[0026] 由于檢測(cè)時(shí)流速不同拆分效果可能不同，本實(shí)施例在選用體積分?jǐn)?shù)分別為90與 10的正己燒與異丙醇作為流動(dòng)相的前提下，分別檢測(cè)了流速為0. 7mL/min、0. 8mL/min、 0. 9mL/min、l. OmL/min時(shí)對(duì)映體之間的拆分情況，拆分結(jié)果如表2所示，當(dāng)流速為lmL/min 時(shí)分離所需時(shí)間最短。因此本實(shí)施例檢測(cè)時(shí)的流速優(yōu)選為lmL/min。
[0029] 保持其它的色譜條件不變，本實(shí)施例還考察了柱溫對(duì)敵百蟲對(duì)映體手性分離的影 響。表3為不同柱溫下敵百蟲的拆分結(jié)果，可以看出，隨著柱溫升高，分離度有下降趨勢(shì)，但 在下列溫度下敵百蟲對(duì)映體均可達(dá)到基線分離，由于柱溫過高會(huì)使色譜柱的壽命縮短，因 此，本實(shí)施例優(yōu)選接近室溫的25°C作為最佳柱溫。
[0032] 在進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí)，由于右敵百蟲色譜峰與水樣中雜質(zhì)的色譜峰不能實(shí)現(xiàn)基線分 離，故在流動(dòng)相中添加一定比例的乙醇，使其可以實(shí)現(xiàn)基線分離，結(jié)果如表4所示。當(dāng)正己 烷：異丙醇：乙醇比例90:8. 5:1. 5時(shí)右敵百蟲可與水樣中分離，同時(shí)也可以保證實(shí)驗(yàn)在較 短的時(shí)間內(nèi)完成。
[0035] 取養(yǎng)殖海水90~IlOmL于燒杯中，加入敵百蟲標(biāo)準(zhǔn)品5mg~IOmg,振蕩混勻后加 入1~2滴20wt %冰乙酸溶液，取10~50mL，之后過HLB小柱，乙酸乙酯8mL洗脫，洗脫液 氮吹至近干后用流動(dòng)相定容至ImL過0. 22 μ m有機(jī)濾膜上機(jī)檢測(cè)。敵百蟲濃度在0. 5mg/ L~10mg/L范圍內(nèi)與其響應(yīng)值呈良好的線性關(guān)系，以X表示濃度，Y表示左敵百蟲峰面積。 回歸方程及相關(guān)系數(shù)為y = 20. 795x - 1. 7766、R2 = 0. 9993。右敵百蟲濃度在0. 5mg/L~ 10mg/L范圍內(nèi)與其響應(yīng)值呈良好的線性關(guān)系，以Y表示濃度，X表示右敵百蟲峰面積。回歸 方程及相關(guān)系數(shù)為及相關(guān)系數(shù)為y = 19. 730x+2. 9066、R2 = 0. 9992。在海水空白樣品中添 加0. 7mg/L、2mg/L和8mg/L這3個(gè)濃度的敵百蟲標(biāo)準(zhǔn)溶液，按本法進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)。每個(gè) 添加濃度平行操作3次，計(jì)算回收率和精密度，S-(+)-trichlorfon及R-(-)-trichlorfon 的樣品平均回收率分別為89. 07%和82. 93%，日間精密度分別為6. 77%和6. 29%，定量限 分別為 〇· 〇5mg/L 和 0· 04mg/L。
[0036] 由圖1可知，本方法能成功實(shí)現(xiàn)敵百蟲手性對(duì)映體的拆分，兩個(gè)敵百蟲對(duì)映體的 分離度為7.29。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種海水中敵百蟲手性對(duì)映體的檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟： 1)取養(yǎng)殖海水90~llOmL于燒杯中，加入敵百蟲標(biāo)準(zhǔn)品5mg~10mg，振蕩混勻后加入 1~2滴20wt%冰乙酸溶液，取10~50mL過HLB固相萃取小柱，然后用6~10mL乙酸乙 酯洗脫，洗脫液收集于容量瓶中； 2) 將步驟1)中的洗脫液乙酸乙酯用氮?dú)獯抵两?，殘液用正己?異丙醇的混合液作 為流動(dòng)相溶解定溶至lmL，并采用0. 22μm微孔濾膜進(jìn)行過濾后得到溶液A，它以正己烷與 異丙醇體積比為85~95:15~5做為流動(dòng)相對(duì)敵百蟲對(duì)映體進(jìn)行分離； 3) 采用高效液相色譜儀對(duì)上述溶液A進(jìn)行檢測(cè)；檢測(cè)時(shí)選用CHIRALCEL1C手性柱，手 性柱的柱溫為20°C~35°C，正己烷與異丙醇體積比為85~95:15~5做為流動(dòng)相，檢測(cè)時(shí) 的流速為 〇· 7mL/min~1.OmL/min，波長(zhǎng)為 207nm。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟2和3)的流動(dòng)相還含有乙 醇，它以正己烷、異丙醇與乙醇體積比為90:8~9. 5:2~0. 5做為流動(dòng)相對(duì)敵百蟲對(duì)映體 和水樣中的雜質(zhì)進(jìn)行分離。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟2和3)的正己烷、異丙醇 與乙醇的體積比為90:8. 5:1. 5。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟3)的檢測(cè)時(shí)的流速為 1.OmL/min〇5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟3)的柱溫為25°C。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟3)的CHIRALCEL1C手性 柱的填料為5μm硅膠表面涂布纖維素-三[3, 5-二氯苯基氨基甲酸酯]。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟1)的HLB固相萃取小柱是 經(jīng)甲醇+水活化。
【專利摘要】一種海水中敵百蟲手性對(duì)映體的檢測(cè)方法，其特征在于步驟：取養(yǎng)殖海水90～110mL于燒杯中，加入敵百蟲標(biāo)準(zhǔn)品5mg～10mg，振蕩混勻后加入1～2滴冰乙酸溶液，取10～50mL過HLB固相萃取小柱，用6～10mL乙酸乙酯洗脫，將洗脫液用氮?dú)獯抵两?，殘液流?dòng)相溶解定溶至1mL，并采用微孔濾膜進(jìn)行過濾后得到溶液A，以正己烷與異丙醇體積比為85～95:15～5做為流動(dòng)相對(duì)敵百蟲對(duì)映體進(jìn)行分離；用高效液相色譜儀對(duì)上述溶液A進(jìn)行檢測(cè)，選用CHIRALCEL？IC手性柱，柱溫為20℃～35℃，流速為0.7mL/min～1.0mL/min，波長(zhǎng)為207nm。本發(fā)明能成功實(shí)現(xiàn)敵百蟲手性對(duì)映體的拆分，從而檢測(cè)海水中敵百蟲對(duì)映體的殘留量，為海水中手性藥物殘留檢測(cè)提供理論依據(jù)。
【IPC分類】G01N30/02
【公開號(hào)】CN105319293
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410380141
【發(fā)明人】聶晶, 歐陽小琨, 高小峰, 楊立業(yè), 王陽光, 吳偉建, 郁迪, 徐紅萍
【申請(qǐng)人】浙江海洋學(xué)院
【公開日】2016年2月10日
【申請(qǐng)日】2014年8月4日