阿膠藥材及其水提取物的多展開(kāi)劑快速薄層鑒別方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種阿膠藥材及其水提取物的多展開(kāi)劑快速薄層鑒別方法。
【背景技術(shù)】
[0002]阿膠是由動(dòng)物驢的干燥皮或鮮皮經(jīng)煎煮、濃縮制成的固體膠，為中國(guó)藥典歷版所收載品種，具補(bǔ)血滋陰，潤(rùn)燥，止血的功效，用于治療血虛萎黃、眩暈心悸、肌萎無(wú)力、心煩不目民、虛風(fēng)內(nèi)動(dòng)、肺燥咳嗽、咯血吐血、尿血便血、崩漏、婦女月經(jīng)不調(diào)、妊娠胎漏等癥。主含骨原膠，水解后為多肽與多種氨基酸，具有滋陰補(bǔ)血功效，是一種臨床上的常用藥材。
[0003]從中國(guó)藥典2005年版開(kāi)始收入薄層鑒別，是以甘氨酸對(duì)照品為對(duì)照，苯酚-0.5%硼砂溶液(4: I)為展開(kāi)劑，茚三酮試液為顯色劑。其供試品溶液制備，是將阿膠，用鹽酸水解為氨基酸后，再進(jìn)行薄層鑒別，操作起來(lái)很不方便。曾有人因操作上的難度，以商榷的方式發(fā)表論文，談到薄層鑒別的3大缺陷，1.展開(kāi)劑配制困難，因?yàn)楸椒映使腆w狀態(tài)，加熱取用很不方便，加之硼砂不溶于苯酚中。2.薄層展開(kāi)時(shí)間與薄板晾干時(shí)間太長(zhǎng)，展開(kāi)要7.5-8小時(shí)，晾干要70-80分鐘。3.顯色時(shí)間也長(zhǎng)，要30-40分鐘。
[0004]或許是因?yàn)樯鲜鲈?，中?guó)藥典2015年版進(jìn)行了鑒別修訂，修訂為采用液質(zhì)聯(lián)用鑒別阿膠，樣品前處理仍然很麻煩，要加胰蛋白酶酶解阿膠后，以梯度洗脫方式，質(zhì)譜檢測(cè)器，電噴霧正離子模式，進(jìn)行多反應(yīng)檢測(cè)，選擇質(zhì)荷比(m/z)539.8(雙電荷)一612.4和m/z539.8(雙電荷)一 923.8作為檢測(cè)離子對(duì)。以規(guī)定的離子對(duì)在提取的供試品離子流色譜中，應(yīng)同時(shí)呈現(xiàn)與對(duì)照藥材色譜保留時(shí)間一致的色譜峰。
[0005]儀器昂貴，操作復(fù)雜，一臺(tái)液質(zhì)聯(lián)用儀少說(shuō)也要100多萬(wàn)元。試想，有多少阿膠生產(chǎn)企業(yè)會(huì)為了一項(xiàng)定性鑒別，購(gòu)置一臺(tái)液質(zhì)聯(lián)用議呢？方法又如何普及推廣應(yīng)用呢？只能批批委托有條件的單位代檢，方法的普及推廣應(yīng)用受到了很大程度的限制。
[0006]查閱文獻(xiàn)得知，目前都是檢測(cè)的水解之后的氨基酸，展開(kāi)劑多是正丁醇系列，不但有嚴(yán)重的刺激味。而且展開(kāi)時(shí)間太長(zhǎng)，溶劑不易揮干。還未發(fā)現(xiàn)阿膠簡(jiǎn)便、快捷、鑒別其原有成分的薄層鑒別方法報(bào)道。
[0007]為此，按有關(guān)薄層鑒別要盡量鑒別藥材或制劑原成分的原則，對(duì)阿膠及其水提取物的原有化學(xué)成分進(jìn)行了專題薄層鑒別研究。獲得以三種不同展開(kāi)劑，鑒別阿膠原有化學(xué)成分的快速薄層鑒別方法。因?yàn)檎归_(kāi)劑不同，溶解、分離化學(xué)成分的性能不一樣，得到的薄層圖譜也會(huì)不同。不同的薄層圖譜，提供了不同組方的阿膠制劑，為排除干擾成分，獲得阿膠原有成分檢測(cè)的快速鑒別方法，提供了可供選擇的圖譜、展開(kāi)劑與操作手段。
[0008]阿膠藥材水提取物或配方顆粒的制備方法取阿膠，適當(dāng)粉碎，稱取14000_15000g，分別加水8倍量，煎煮提取二次，每次1-2小時(shí)，濾過(guò)，濾液70°C減壓濃縮，濃縮液噴霧干燥或70°C減壓干燥，得水提取物干膏粉；或加糊精適量，混勻，制粒，分別制成1000g，分裝，得水提取物配方顆粒。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明就是針對(duì)阿膠目前薄層鑒別都是檢測(cè)水解后的氨基酸成分，且方法與展開(kāi)劑配制，都存在一定的不方便性。中國(guó)藥典2015年版新修訂的液質(zhì)聯(lián)用法，又涉及到儀器昂貴，在一般的制藥企業(yè)很難擁有，無(wú)法推廣應(yīng)用，且被檢測(cè)成分還是水解后的氨基酸，檢測(cè)指標(biāo)與臨床所用阿膠原有成分不一致，難以真實(shí)反映阿膠質(zhì)量。為此，經(jīng)過(guò)大量的試驗(yàn)探討研究，發(fā)明了樣品與對(duì)照藥材簡(jiǎn)便、快捷，只需70%甲醇超聲，濾液或上清液點(diǎn)樣，展開(kāi)，顯色，檢視阿膠原有成分的多展開(kāi)劑快速薄層鑒別方法。在三種展開(kāi)劑中，其紫外光燈365nm下的焚光斑點(diǎn)，即，圖1、3、5的焚光斑點(diǎn)，不是同一種成分，圖1的焚光斑點(diǎn)，遇10%硫酸乙醇溶液也呈現(xiàn)顏色，圖5的2個(gè)熒光斑點(diǎn)，遇10%硫酸乙醇溶液是不呈現(xiàn)顏色的。但透過(guò)燈光檢視的含量最高的棕褐色主斑點(diǎn)在三種展開(kāi)劑中都是同一成分，即，圖2、4、6的棕褐色斑點(diǎn)，是隨著展開(kāi)劑的極性大小，Rf值由小變大。三種展開(kāi)劑至少可以檢出5種原有成分。為不同組方的阿膠制劑，提供了選擇排除干擾，獲得阿膠原有成分檢測(cè)的快速鑒別方法。
[0010]本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的方案為:
[0011](I)以體積比5: 3: 5: I的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液為展開(kāi)劑
[0012]取阿膠對(duì)照藥材及其水提取物各0.5g，分別加70%甲醇2ml與5ml，提取物超聲處理10分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；藥材超聲處理20分鐘，取上清液作為對(duì)照藥材溶液；吸取供試品溶液與對(duì)照藥材溶液各3?5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比5:3:5:1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈365nm下檢測(cè)，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色熒光主斑點(diǎn)；噴以10%硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，透過(guò)燈光檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色主斑點(diǎn)；
[0013](2)以體積比1: 2: 5:1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液為展開(kāi)劑
[0014]吸取鑒別⑴項(xiàng)下供試品溶液與對(duì)照品溶液各3?5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比1: 2: 5:1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈365nm下檢測(cè)，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色熒光主斑點(diǎn)；噴以10%硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，透過(guò)燈光檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色主斑點(diǎn)；
[0015](3)以體積比5: 8: 2: 0.2的乙酸乙酯-甲醇-水-濃氨為展開(kāi)劑
[0016]吸取鑒別⑴項(xiàng)下供試品溶液與對(duì)照品溶液各3?5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以體積比5: 8: 2: 0.2的乙酸乙酯-甲醇-水-濃氨為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈365nm下檢測(cè)，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色熒光主斑點(diǎn)；噴以10%硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，透過(guò)燈光檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色主斑點(diǎn)。
[0017]本發(fā)明的原理如下:
[0018]依據(jù)阿膠中一定存在不需要水解的各種原有化學(xué)成分，根據(jù)這些化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)，按照相似相容的提取原則，采用適宜的提取溶劑，簡(jiǎn)便、快捷地得到供試品與對(duì)照藥材溶液。再采用不同組合、比例、極性的展開(kāi)劑，進(jìn)行展開(kāi)，各種化學(xué)成分就會(huì)隨著不同的展開(kāi)劑，依據(jù)吸附、解吸附、再吸附、解吸附的能力不同，而在各自的展開(kāi)劑中呈現(xiàn)出Rf值不同的各種信息斑點(diǎn)，得以鑒別確認(rèn)。
[0019]本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)及有益效果如下:
[0020]1.阿膠藥材與其水提取物，不經(jīng)酸水解，直接鑒別其原有成分的鑒別方法為首次報(bào)道。結(jié)束了阿膠薄層鑒別一直是鑒別水解后的氨基酸產(chǎn)物的歷史，使檢測(cè)指標(biāo)與臨床所服用的阿膠固有成分一致，利于薄層鑒別成分與功效掛鉤，真實(shí)地反映阿膠質(zhì)量。且方法簡(jiǎn)便、快捷，樣品與對(duì)照藥材只需70%甲醇超聲，濾液或上清液點(diǎn)樣，展開(kāi)，顯色，檢視，即可。前處理時(shí)間只需20分鐘，前處理溶劑僅7ml，展開(kāi)時(shí)間0.5小時(shí)，即在I小時(shí)之內(nèi)完成鑒別，其效率之高、成本之低、易于推廣應(yīng)用的普及性，是目前已報(bào)道方法都無(wú)法實(shí)現(xiàn)的。
[0021]2.在三種展開(kāi)劑中，用紫外光燈365nm配合10%硫酸乙醇溶液顯色后透過(guò)燈光檢視的檢視條件，至少檢視了 5種不同的化學(xué)成分，雖然提取物的含量遠(yuǎn)低于對(duì)照藥材，但被檢出的斑點(diǎn)數(shù)目和圖譜一致，進(jìn)一步佐證了提取過(guò)程的化學(xué)成分流失以及本薄層鑒別對(duì)制備工藝