用于檢測毛癬菌屬與相關疾病的方法
【專利說明】用于檢測毛癬菌屬與相關疾病的方法
[0001] 本發(fā)明涉及毛癬菌屬真菌（champignons du genre 在人或動物體 內、在皮膚及其附件上的存在的檢測。
[0002] 本發(fā)明特別涉及檢測毛癬菌屬（Trichophytons)的方法，包括在皮膚或皮膚附件 的樣品中確定選自五種特定蛋白酶的至少一種蛋白酶的存在的步驟。本發(fā)明還具體涉及針 對這些蛋白酶的單克隆抗體以及含有它們的診斷試劑盒。
[0003] 毛癬菌屬是在皮膚、頭皮或指甲上生長并在人或動物體內引起皮膚癬菌病的寄生 性真菌。例如在人體內，毛癬菌屬可能導致在皮膚上的圓癬、在頭皮上的頭癬、在胡須區(qū)域 上的膿癬或須癬以及在指甲上的甲癬。
[0004] 這些疾病非常棘手，并可能導致其它嚴重的病理并發(fā)癥。它們的難看且有時致殘 的外觀還可能對受影響的人產(chǎn)生顯著的負面心理影響。
[0005]目前存在治療毛癬菌屬在人或動物體內造成的疾病的治療手段，但是這些治療與 進行的診斷的可靠性密切相關。
[0006] 現(xiàn)在，皮膚或其附件的真菌疾病可能是由于除毛癬菌屬之外的真菌，如酵母、霉菌 或其它皮膚癬菌，在這種情況下將需要不同的治療。此外，它們可能與皮膚或其附件的其 它疾病或傷病混淆。例如，指甲的營養(yǎng)不良的臨床癥狀如牛皮癬、外傷、指甲腫瘤（ungual tumor )、扁平苔癬和類似甲真菌疾病的細菌感染，并可能是混亂的來源。
[0007] 因此至關重要的是能夠做出準確的診斷，因為不準確的結果導致啟動無效的治療 方案。
[0008] 現(xiàn)在有多種診斷工具，但是都不能令人滿意。特別是對于甲癬，已知六種不同的 工具（Rothmund等人，2012)，其中兩種是常用的：直接觀察，其不確定性不可避免地導致 診斷錯誤，以及培養(yǎng)病原體，這是長期和相當不切實際的過程，不能向每個人開放。還有 NISSH0 CORPORATION公司制造的免疫試劑盒，其優(yōu)點在于使用快速容易，但是缺乏靈敏性 并尤其缺乏特異性。事實上，通過使用檢測存在于毛癬菌屬細胞壁上的多糖的抗體來檢測 皮膚癬菌，但是也存在于許多其它皮膚癬菌上。
[0009] 因此仍然需要快速、容易和特定地檢測皮膚或其附件上、特別是在指甲上毛癬菌 屬的存在的解決方案，該解決方案克服了現(xiàn)有診斷工具的缺點。
[0010] 這是本發(fā)明的目的，為了滿足這種需要，本發(fā)明提出了使用選自二肽基肽酶 V (dipeptidyl-peptidase V)、枯草桿菌樣蛋白酶 6 (subtilisin-like protease 6)、 枯草桿菌樣蛋白酶7 (subtilisin-like protease 7)、亮氨酸氨基肽酶1 (leucine aminopeptidase 1)和亮氨酸氨基肽酶2 (leucine aminopeptidase 2)的至少一種蛋白 酶。
[0011] 本發(fā)明因此涉及選自二肽基肽酶V、枯草桿菌樣蛋白酶6、枯草桿菌樣蛋白酶7、亮 氨酸氨基肽酶1和亮氨酸氨基肽酶2的至少一種蛋白酶用于檢測在人類或動物皮膚或皮膚 附件的樣品中至少一種毛癬菌屬的存在的用途。
[0012] 特別地，本發(fā)明涉及檢測至少一種毛癬菌屬的存在的方法，包括確定在獲自可能 被毛癬菌屬感染的人類或動物的皮膚或皮膚附件樣品中存在選自二肽基肽酶V、枯草桿菌 樣蛋白酶6、枯草桿菌樣蛋白酶7、亮氨酸氨基肽酶1和亮氨酸氨基肽酶2的至少一種蛋白 酶的步驟。
[0013] 受試和檢測的毛癬菌屬涉及皮膚和/或皮膚附件的疾病。
[0014] "附件"在本發(fā)明的含義中指的是含有高百分比角蛋白的任何保護性表皮附件、附 器或覆蓋物，例如體毛、頭發(fā)和指甲。
[0015] 有利地，在皮膚或其附件層次上存在這些蛋白酶的至少一種僅特定于毛癬菌屬的 存在。作為易于使用、特定于毛癬菌屬的快速診斷工具的對象的該測定可以通過各種手段 進行，由此能夠非常快速地啟動有效的、針對性的治療。兩種手段特別適合：通過質譜法和 免疫檢測的測定。
[0016] 為了實施第二種手段，根據(jù)特定目的，本發(fā)明還涉及針對二肽基肽酶V、枯草桿菌 樣蛋白酶6或亮氨酸氨基肽酶2的單克隆抗體或能夠分別結合到二肽基肽酶V、枯草桿菌樣 蛋白酶6或亮氨酸氨基肽酶2上的該抗體的片段，以及包含此類抗體的試劑盒。
[0017] 圖1描述了二肽基肽酶V的定量限定。
[0018] 現(xiàn)在將詳細描述本發(fā)明。
[0019]本發(fā)明因此涉及選自二肽基肽酶V、枯草桿菌樣蛋白酶6、枯草桿菌樣蛋白酶7、亮 氨酸氨基肽酶1和亮氨酸氨基肽酶2的至少一種蛋白酶用于檢測涉及皮膚和/或皮膚附件 霉菌病的人類或動物皮膚或皮膚附件樣品中至少一種毛癬菌屬的存在的用途。
[0020] 該用途優(yōu)選包括實施用于檢測涉及皮膚和/或皮膚附件霉菌病的至少一種毛癬 菌屬的存在的方法，該方法包括測定獲自可能被毛癬菌屬感染的人或動物的皮膚或皮膚附 件樣品中選自二肽基肽酶V、枯草桿菌樣蛋白酶6、枯草桿菌樣蛋白酶7、亮氨酸氨基肽酶1 和亮氨酸氨基肽酶2的至少一種蛋白酶的存在的步驟。
[0021] 測定該蛋白酶的至少一種的存在由皮膚或其附件樣品開始在體外（in vitro)進 行，但是反映了這種蛋白酶在采取該樣品的人或動物的皮膚或其附件層次上的體內（in vivo)存在。
[0022] 用于實施本發(fā)明的樣品通過任何合適的手段獲得。當樣品是指甲樣品時，其優(yōu)選 通過刮削甲床或通過用微型鉆機穿刺指甲來獲得。后面提及的取樣方法尤其描述在專利US 7, 848, 799中。當樣品來自皮膚的霉菌病變時，其優(yōu)選通過用刮匙刮削來獲得。
[0023] 根據(jù)本發(fā)明，樣品中選自二肽基肽酶V、枯草桿菌樣蛋白酶6、枯草桿菌樣蛋白酶 7、亮氨酸氨基肽酶1和亮氨酸氨基肽酶2的至少一種蛋白酶的存在與感染至少一種毛癬菌 屬同義。事實上，它們是由毛癬菌屬特異性分泌的蛋白酶，在角蛋白的消化中起作用，并且 其根據(jù)本發(fā)明處于被至少一種毛癬菌屬感染的皮膚及其附件的層次上。
[0024]根據(jù)本發(fā)明的用途適于檢測涉及人和動物的皮膚和/或皮膚附件霉菌病的毛 癬菌屬，特別是 Trichophyton bullosum、Trichophyton circumvolutum、同心性毛癬 菌(Trichophyton c one en trie urn)^Trichophyton eboreum、馬發(fā)癬菌(Trichophyton equinum)nTrichophyton eriotrephon、費希爾氏發(fā)癬菌（7>_/<^?〇/?及片〇刀/YscAeriV、格 威里毛癬菌ton goyrKiiiVi?、趾間毛癬菌(Trichophyton interdigitale)、 Trichophyton kanei、Trichophyton krajdenii、Trichophyton longifusum、麥格尼氏 發(fā)'餐魯（Trichophyton megninii)、徵瘡稿魯（Trichophyton mentagrophytes)、豆H毛 '截魯（Trichophyton phaseoli forme)、昆兔努發(fā)稿魯（Trichophyton quinckeanum)、 Trichophyton raubitschekii、紅色發(fā)癬菌{Trichophytonrubrum)、許蘭氏毛 菌(Trichophytonschoenleinii)、蘇丹奈斯1 發(fā)癬菌sowdanense)、 Trichophyton sp. CZ-2011、 Trichophyton sp. FSU 10097、 Trichophyton sp. IFM 41172、Trichophyton sp. LM 10725、土 發(fā)癬菌(Trichophytonterrestre)、 Trichophyton thuringiense、斷發(fā)發(fā)癬菌范布魯西米氏發(fā)癬 售[(Trichophytonvanbreuseghemii)、、夜^、歇發(fā)菌篇(Trichophytonverrucosum)、隻色發(fā)餐 菌KioJacei/聲)和楊德氏發(fā)癬菌jaoraofei人而不考慮是否 存在菌株（souche)。
[0025] 根據(jù)本發(fā)明的用途特別適于檢測趾間毛癬菌和/或紅色發(fā)癬菌，甚至更優(yōu)選紅色 發(fā)癬菌，無論是否存在菌株。
[0026] 根據(jù)本發(fā)明通過測定選自二肽基肽酶V、枯草桿菌樣蛋白酶6、枯草桿菌樣蛋白酶 7、亮氨酸氨基肽酶1和亮氨酸氨基肽酶2的至少一種蛋白酶來檢測毛癬菌屬的存在尤其 可用于篩查、治療隨訪和/或診斷人或動物的疾病，特別是與毛癬菌屬感染相關的霉菌病 (mycose)。
[0027] 本發(fā)明還涉及選自二肽基肽酶V、枯草桿菌樣蛋白酶6、枯草桿菌樣蛋白酶7、亮氨 酸氨基肽酶1和亮氨酸氨基肽酶2的至少一種蛋白酶，其用于與至少一種毛癬菌屬的感染 相關的疾病的篩查、治療隨訪和/或診斷的方法。
[0028] 對人類而言，其例如可能是圓癬（tinea circinata)、頭癬（tinea capitis)、膿癬 (kerion)、須癬（trichophytic sycosis)或甲癬（onychomycosis)的問題。本發(fā)明尤其特 別涉及甲癬的篩查、治療隨訪和/或診斷。