一種吸光光度測(cè)定維生素c的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及分析化學(xué)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種吸光光度測(cè)定維生素C的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，設(shè)及維生素C測(cè)定方法的報(bào)道較多，如巧光法、2,6-二氯說酪滴定法、光度 分析法、化學(xué)發(fā)光法、電化學(xué)分析法及色譜法等，本發(fā)明采用光度分析法，其余關(guān)于維生素C 的測(cè)定方法與本發(fā)明不同。
[0003]用光度分析法測(cè)定維生素C的報(bào)道有2,4-二硝基苯阱法：樣品中還原型抗壞血酸 經(jīng)活性炭氧化為脫氨抗壞血酸，再與2,4-二硝基苯阱作用生成紅色腺，腺的含量與總抗壞 血酸含量成正比，進(jìn)行比色測(cè)定。
[0004]二甲苯一二氯說酪比色法：用定量的2,6-二氯說酪染料與試樣中的維生素C進(jìn)行氧化還原反應(yīng)，多余的染料在酸性環(huán)境中呈紅色，用二甲苯萃取后比色，在一定范圍內(nèi) 吸光度與染料濃度呈線性相關(guān)，用差減法計(jì)算維生素C含量。
[0005]磯鋼藍(lán)分光光度法測(cè)定維生素C;在一定的反應(yīng)條件下，維生素C可W定量地將磯 鋼酸錠還原成磯鋼藍(lán)，結(jié)合光度法測(cè)定維生素C。
[0006]金納米微粒分光光度法測(cè)定維生素C的方法（CN101109697A，2007. 08. 30);該法 的顯色體系由HAuCL溶液、巧樣酸S鋼溶液和維生素C溶液組成，測(cè)量波長(zhǎng)520皿，光度法 測(cè)定。
[0007] -種新的維生素C的測(cè)定方法.《廣西師范大學(xué)學(xué)報(bào)》.2003,第21卷(第1期)， 第350-35 ;該法的顯色體系由維生素C與BT苯并唾挫組成，測(cè)量波長(zhǎng)602皿，光度法測(cè)定。
[0008]上述設(shè)及光度分析法測(cè)定維生素C的報(bào)道與本發(fā)明的一種吸光光度測(cè)定維生素C的方法的顯色體系組成及化學(xué)反應(yīng)原理不同。
[0009]本發(fā)明的一種吸光光度測(cè)定維生素C的方法，與上述所有的方法皆不同，未見文 獻(xiàn)報(bào)道，具體公開了艦酸鐘溶液、維生素C溶液、淀粉溶液和硫酸溶液組成顯色體系，600nm 作測(cè)量波長(zhǎng)，用吸光光度法測(cè)定維生素C的含量。本發(fā)明法具有簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、微量、快速、使 用的藥品價(jià)廉易得無毒無公害和環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，測(cè)定生物、藥物等試樣中的維生素C。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的目的在于提供一種簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、微量、快速、價(jià)廉和環(huán)保測(cè)定維生素C的 方法，可用于測(cè)定生物、藥物等試樣中的維生素C。
[0011] 一種吸光光度測(cè)定維生素C的方法，包括如下步驟； (1)稱取0. 5000g維生素C(AR)，用2%草酸溶液溶解，轉(zhuǎn)入50血容量瓶，，用2%草酸 溶液定容，搖勻，得10.Omg/血維生素C溶液，移取該溶液1.OOmL于50mL容量瓶中，用蒸饋 水定容，搖勻，得200yg/血維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液； (2 )室溫下，移取一定體積200yg/mL維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液于25mL容量瓶中，取維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積范圍在2. 00~10.OOmL; (3) 向容量瓶中加入4. 00血0. 5%的淀粉溶液； (4) 向容量瓶中加入0.20血0.200mg/mL艦酸鐘溶液； (5) 向容量瓶中加入0. 10血0. 15mol/L硫酸溶液，搖勻，放置20min; (6) 用蒸饋水快速定容，搖勻；用試劑作空白，測(cè)量波長(zhǎng)為600nm，即刻測(cè)定吸光度4 (7) 依照（2)~(6)方法，用200yg/mL維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液制備濃度在16. 0~80. 0yg/ 1111^一系列有濃度梯度的顯色體系，用600皿波長(zhǎng)測(cè)定吸光度乂用維生素(7濃度曰與如勺 對(duì)應(yīng)關(guān)系，建立校準(zhǔn)曲線，獲得線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)； (8) 按上述（2)~（6)方法，測(cè)定某未知含維生素C溶液的顯色體系的方，依據(jù)（7)的 線性回歸方程計(jì)算出被測(cè)體系中維生素C的濃度。
[0012] 顯色體系在400~700皿作吸收曲線；確定測(cè)量波長(zhǎng)為600皿（圖1)。
[0013] 一種吸光光度測(cè)定維生素C的方法，其特征是用艦酸鐘溶液、維生素C溶液、淀粉 溶液和硫酸溶液組成顯色體系，形成速差動(dòng)力學(xué)體系（圖2)。
[0014] 一種吸光光度測(cè)定維生素C的方法，其特征是該體系艦酸鐘與微量的維生素C反 應(yīng)后有余量，艦酸鐘再與r作用生成12后仍然有余量，余量的艦酸鐘抑制了體系中12的歧 化；體系的動(dòng)力學(xué)表征為圖2,圖2表明在1200~1800s間，吸光值達(dá)到最大值，該時(shí)間段 吸光值的波動(dòng)率為0. 335%，1800s后吸光值W0. 122 (%)/min速率下降。步驟（5)規(guī)定顯色 時(shí)間20min和用蒸饋水快速定容即刻測(cè)定吸光值，可使誤差小于1%，滿足分析操作和測(cè)定 條件。
[0015] 一種吸光光度測(cè)定維生素C的方法，該體系過量的艦酸鐘與微量的維生素C反應(yīng) 后定量生成r，艦酸鐘將r氧化定量產(chǎn)生12,12與淀粉作用定量生成12-淀粉配合物，12-淀 粉配合物與維生素C建立定量關(guān)系。
[0016] 一種吸光光度測(cè)定維生素C的方法，步驟（6)要求快速定容和即刻測(cè)吸光值，盡量 做到不拖延，可降低12-淀粉配合物的緩慢解體帶來的誤差。
[0017] 一種吸光光度測(cè)定維生素C的方法，其特征是體系的中維生素C初始濃度控制在 16.0~80.0yg/mL范圍內(nèi)，校準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)r> 0.9999 (圖3)，線性關(guān)系良好，遵循朗 伯-比爾定律；線性范圍上限吸光值雖然達(dá)到1. 5Asb，但并未發(fā)生線性偏離，保持了較寬的 線性范圍。
[0018] 維生素C的水溶液暴露在空氣中，易被氧化，不宜用蒸饋水配制維生素C的標(biāo)準(zhǔn)溶 液，按步驟（1)的方法配制的200yg/mL維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液，暴露在空氣中，2小時(shí)內(nèi)能穩(wěn) 定，作校準(zhǔn)曲線不受影響，本體系中所含草酸根離子不干擾測(cè)定。
[0019] 本發(fā)明的一種吸光光度測(cè)定維生素C的方法，其顯色體系為非平衡體系，一般情 況下難W實(shí)現(xiàn)光度分析，但在本發(fā)明的顯色體系的各項(xiàng)物質(zhì)組成和參數(shù)配置下，顯色時(shí)間 在20~30min之間，吸光值變化呈"弧頂"，該時(shí)間段吸光值的波動(dòng)最小，抓住該一時(shí)間段進(jìn) 行測(cè)定誤差較小，滿足了測(cè)定條件。
[0020] 本發(fā)明的一種吸光光度測(cè)定維生素C的方法，顯色體系中如有其他還原性物質(zhì)共 存，可能將會(huì)干擾測(cè)定，具體影響情況有待進(jìn)一步研究。
[0021] 本發(fā)明的一種吸光光度測(cè)定維生素C的方法，原理清晰，不使用昂貴儀器，各種試 劑使用量少，無毒無害，分析成本低，價(jià)廉和環(huán)保；一般分析人員在普通實(shí)驗(yàn)室即可快速完 成，操作簡(jiǎn)便；重現(xiàn)性好，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性好，分析結(jié)果準(zhǔn)確度高；本發(fā)明具有簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、微 量、快速、價(jià)廉和環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，用于生物、藥物等試樣中的維生素c的測(cè)定。
【附圖說明】
[0022] 圖1顯色體系的吸收曲線。
[0023] 圖2顯色體系動(dòng)力學(xué)示意圖。
[0024] 圖3校準(zhǔn)曲線。
【具體實(shí)施方式】
[00巧]下面的實(shí)施方式描述了本發(fā)明的一種吸光光度測(cè)定維生素C的方法，本發(fā)明的方 法不限于W下實(shí)施例。
[0026] 實(shí)施例儀器與試材；紫外可見分光光度計(jì)（A390型，朝藝儀器有限公司），電子天 平（ESJ210-4B，沈陽龍騰電子有限公司），超聲儀（），石英亞沸點(diǎn)高純水蒸饋器（1018-C，常 州國(guó)華電器有限公司），組織搗碎機(jī)（JJ-2,常州恒峰儀器有限公司），移液槍（100-1000yL， Thermo)，精密數(shù)值溫度溫差儀（SWC-IID，南京桑力電子設(shè)備廠）；艦酸鐘（AR，成都科龍化學(xué) 試劑廠)，草酸（AR，西晚化工股份有限公司），可溶性淀粉（AR，科龍化工試劑廠）山-抗壞血 酸(維生素C，AR，純度&