專利名稱：化合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用作分析拉莫三嗪及其藥物制劑參比標識物的化合物。
為使新的藥物產(chǎn)品能獲準安全上市，藥品制造商必須向有關(guān)管理機構(gòu)提供詳盡的證據(jù)以示該產(chǎn)品適合投放上市。有關(guān)管理機構(gòu)需認可該活性劑的給藥可為人體所接受，而且其特定的市售制劑在給藥時應(yīng)沒有雜質(zhì)并具有合適的擱置壽命。
因此，提交給管理機構(gòu)的證據(jù)中一般包括分析數(shù)據(jù)，以證實(a)藥物在生產(chǎn)期間不含有或僅含有可忽略不計水平的雜質(zhì)，和(b)可接受的藥物儲存穩(wěn)定性(即擱置壽命)。這些數(shù)據(jù)常常通過外標或參比標識物對藥物的檢測獲得，所述外標或參比標識物是可能性雜質(zhì)或可能性降解產(chǎn)物的適當純樣品。
在藥物活性劑以及含有它們的制劑中，可能的雜質(zhì)包括殘余量的活性劑合成前體、活性劑合成中產(chǎn)生的副產(chǎn)物、剩余溶劑、活性劑異構(gòu)體、合成活性劑或制備藥物制劑中存在于原料內(nèi)的雜質(zhì)以及未知的異物。儲存時可能出現(xiàn)的其他雜質(zhì)包括活性劑降解產(chǎn)物，例如氧化或水解的產(chǎn)物。
拉莫三嗪是如式(Ⅳ)所示的3,5-二氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪
它是一種適合治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)疾病，尤其是癲癇癥的已知化合物，這已公開在EP-A-0021121中。拉莫三嗪本身及其藥物制劑在生產(chǎn)中都較純。特別是，在其藥物制劑制備期間，拉莫三嗪能夠保持穩(wěn)定。
現(xiàn)已知道，有兩種化合物可以在分析拉莫三嗪或含拉莫三嗪的藥物劑型中用作參比標識物?；衔镏皇抢嚎赡艿慕到馕?，另一種是合成拉莫三嗪期間由副反應(yīng)產(chǎn)生的可能性雜質(zhì)。
因此，本發(fā)明提供一種用于檢測拉莫三嗪或其藥物制劑的樣品的純度或降解穩(wěn)定性的方法，該方法包括，檢測所述樣品中所存在的選自3-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-5-(4H)-酮和N-[5-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-3-基]-2,3-二氯苯甲酰胺的化合物。在本發(fā)明的方法中，上述化合物充當參比標識物。
3-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-5-(4H)-酮是式A所示化合物
式A化合物(化合物A)是拉莫三嗪可能的降解產(chǎn)物，是在藥物水解時生成的。所以，式A化合物通過拉莫三嗪在堿性條件下的水解產(chǎn)生。這種水解作用適合發(fā)生在拉莫三嗪和堿的水溶液加熱回流時。優(yōu)選的堿是強堿，例如堿金屬氫氧化物。尤其優(yōu)選氫氧化鈉。這樣的堿性水溶液可在回流條件下加熱1至48小時，例如10小時至36小時，優(yōu)選24小時。
用作參比標識物的另一化合物是新的化合物。因此，本發(fā)明提供了一種式B所示N-[5-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-3-基]-2,3-二氯苯甲酰胺的化合物
通過在吡啶中用2,3-二氯苯甲酰氯處理拉莫三嗪可直接制得式B化合物(化合物B)。然而，由于它是由藥物合成中的副反應(yīng)所產(chǎn)生的可能性雜質(zhì)，所以它也可用作拉莫三嗪的參比標識物。實際上，通過薄層色譜，這種雜質(zhì)在拉莫三嗪粗品中的水平被控制在最高值為0.5％。進而重結(jié)晶這種品質(zhì)的藥物粗品，所得拉莫三嗪符合總雜質(zhì)不超過2％的商業(yè)化生產(chǎn)的純度水平。
參照例1描述了拉莫三嗪的合成。在合成中作為中間體1.4的2,3-二氯苯甲酰氰化物可以含有至多10％的2,3-二氯苯甲酸酐作為雜質(zhì)。當用氨基胍碳酸氫鹽在硫酸中的溶液處理2,3-二氯苯甲酰氰化物時(參照例1的步驟(d))，生成了加合物(Z)-2-(2,3-二氯苯基)-2-(胍基亞氨基)乙腈(中間體1.5)。隨后，酸酐類雜質(zhì)可以和后一種加合物反應(yīng)生成(Z)-2-(2,3-二氯苯基)-2-[N’-(2,3-二氯苯甲酰基)胍基亞氨基]乙腈，該產(chǎn)物是化合物B的直接前體。該前體在1-丙醇中經(jīng)回流環(huán)化成化合物B。
本發(fā)明還提供制備化合物B的方法，該方法包括(ⅰ)在低于35℃的溫度下，將2當量的2,3-二氯苯甲酰氯與1當量溶解在吡啶中的拉莫三嗪反應(yīng)；或(ⅱ)將化合物(Ⅰ)在1-丙醇中回流環(huán)化。
在步驟(ⅱ)中，式(Ⅰ)化合物的制備是通過式(Ⅱ)化合物與式(Ⅲ)化合物一起反應(yīng)
該反應(yīng)是在無機酸，例如硫酸的存在下進行的。
通過2,3-二氯苯甲酰基氰化物與氨基胍碳酸氫鹽的硫酸溶液間的反應(yīng)，可以制得式(Ⅱ)化合物。
在用作參比標識物時，化合物A和B必須是其適當?shù)募儍趔w。若需要，如上所得的化合物A和B可以被純化至所需的純度級別。所以，本發(fā)明上述制備化合物B的方法中包括附加的提純所得化合物的步驟。
提純是利用常見于有機合成的慣用方法來完成。例如，可將該化合物在有機溶劑例如C1-C6鏈烷醇中加熱，過濾并真空干燥化合物。通常，加熱是在溶劑的回流溫度下進行。優(yōu)選的C1-C6鏈烷醇是丙醇。而且，化合物也可以從熱的C1-C6鏈烷醇，優(yōu)選在熱丙醇中重結(jié)晶。
可取的是，最終回收的化合物A和B是基本上純凈的形式。兩種化合物最終的樣品純度一般至少為80％，例如至少85％，更優(yōu)選至少90％。純度水平高于90％是期望的，但不是必需的。所述純度可以是，例如至少92％、至少95％或至少98％。99％或99.5％的純度水平是更希望的。
人們要檢測出拉莫三嗪本身(也稱作藥用物質(zhì))或含有拉莫三嗪的藥物劑型(還稱作藥品)的純度或降解穩(wěn)定性。例如，需保證生產(chǎn)后的拉莫三嗪是純凈的。因此，一般要對藥用物質(zhì)進行降解產(chǎn)物(化合物A)和加工過程中的雜質(zhì)(化合物B)的檢測。還需要分析拉莫三嗪的藥物制劑，從而檢定出在藥品生產(chǎn)期間和儲存若干年后活性劑對降解所保持的穩(wěn)定性。所以，通常僅需檢測出包括常規(guī)口服片劑和可分散片劑在內(nèi)的藥物劑型中的化合物A。
可通過一種或多種常規(guī)分析技術(shù)來檢測藥用物質(zhì)或藥品的被測樣品。所述分析技術(shù)包括高效液相色譜法(HPLC)和薄層色譜(TLC)。所得結(jié)果與由化合物A或B基本純凈的參比樣品獲取的結(jié)果進行比較。進而測定出兩種化合物或各化合物在被測樣品中的含量。
一方面，本發(fā)明所述方法可以用來測定拉莫三嗪樣品的純度，包括步驟(ⅰ)將拉莫三嗪樣品溶于溶劑中以制得樣品溶液；(ⅱ)將3-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-5-(4H)-酮或N-[5-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-3-基]-2,3-二氯苯甲酰胺的樣品溶解在溶劑中，以制備參比標識物的標準溶液；(ⅲ)將所述樣品溶液和所述標準溶液上樣到薄層色譜上，得到各自的TLC色譜；和(ⅳ)估算出得自樣品溶液的色譜圖中相對于標準溶液色譜圖中的標準標識物點、相當于參比標識物Rf值的任何次要點的強度。
本發(fā)明所述方法另一方面是，檢測含有拉莫三嗪的藥物劑型對降解的穩(wěn)定性，包括步驟(ⅰ)將劑型樣品溶于溶劑中以制得樣品溶液；(ⅱ)將3-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-5-(4H)-酮的樣品溶解在溶劑中，以制備參比標識物的標準溶液；(ⅲ)將所述樣品溶液和所述標準溶液上樣到薄層色譜上，得到各自的TLC色譜；和(ⅳ)估算出得自樣品溶液的色譜圖中相對于標準溶液色譜圖中的標準標識物點、相當于參比標識物Rf值的任何次要點的強度。
本發(fā)明所述方法的又一個方面是，檢測含有拉莫三嗪的藥物劑型對降解的穩(wěn)定性，包括步驟(ⅰ)將劑型的樣品溶解在溶劑中以生成一種或多種樣品溶液；(ⅱ)將拉莫三嗪參比標準物樣品溶解在溶劑中以生成標準溶液；(ⅲ)將樣品溶液和標準溶液注射到HPLC柱內(nèi)，和(ⅳ)測出各溶液的主峰的面積，并由此計算出參比標識物3-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-5-(4H)-酮在各樣品溶液中的含量。
此時，可能需要在步驟(ⅲ)之前用系統(tǒng)適應(yīng)性溶液(system suitability solution)通過HPLC柱，目的在于測出藥物劑型中拉莫三嗪與任意制劑賦形劑間的分辨率。這種情況下，所述方法包括附加步驟(ⅱa)將拉莫三嗪和制劑賦形劑的參比標準物溶解在溶劑中，以生成HPLC系統(tǒng)適應(yīng)性溶液，并將該系統(tǒng)適應(yīng)性溶液注射到HPLC柱上，以便測定拉莫三嗪和制劑賦形劑之間的分辨率。所述制劑賦形劑可以是例如糖精鈉。
本發(fā)明還提供了化合物在分析拉莫三嗪或含拉模三嗪的藥物劑型的純度或?qū)到獾姆€(wěn)定性中作為參比標識物的用途，所述化合物選自3-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-5-(4H)-酮和N-[5-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-3-基]-2,3-二氯苯甲酰胺。
實際上，拉莫三嗪較純并且儲存時也相當穩(wěn)定。因此，對藥用物質(zhì)本身或含有拉莫三嗪的藥物制劑進行分析試驗主要是為了證實化合物A和/或B并不存在，或僅以低于所用分析技術(shù)檢測限的水平(TLC為約0.3％w/w,HPLC為0.06％w/w)存在。
作為每次都分別測試參比標識物樣品的替代方法，人們希望使用從藥用物質(zhì)或藥品的分析中獲得確定的數(shù)據(jù)，即用一種稱作響應(yīng)因子(R)的參數(shù)來代替。響應(yīng)因子是一個預先測定的比值，該比值是化合物A或B樣品通過用已知分析技術(shù)測定的數(shù)值結(jié)果對于等濃度純拉莫三嗪試驗數(shù)據(jù)結(jié)果的比值。所測數(shù)值結(jié)果可以是例如HPLC峰面積響應(yīng)值。因此，已知純凈的拉莫三嗪和拉莫三嗪藥物制劑被測樣品的合適分析結(jié)果后，可以用化合物A或B的響應(yīng)因子計算出被測樣品中具體參比標識物的含量。
對于HPLC分析的結(jié)果，可根據(jù)下式計算被測樣品中化合物A或B相對于拉莫三嗪的％w/w=Ar×WsAs×R]]>其中Ar=HPLC試驗溶液中化合物主峰的面積As=HPLC標準溶液中單獨的拉莫三嗪主峰面積R=化合物的響應(yīng)因子WS=標準物的重量(mg)本發(fā)明化合物A的HPLC響應(yīng)因子是0.79。
本發(fā)明將在下列實施例中作進一步的描述。
參考例1拉莫三嗪的制備
步驟a制備化合物1.2攪拌化合物1.1(1mol)、叔丁醇、水和氫氧化鈉(2mol)的溶液，并在50至60℃下在3小時內(nèi)加入過氧化氫溶液(35％w/w,4mol)。在55至60℃下攪拌30分鐘后，蒸除叔丁醇，用甲苯洗滌該水溶液。水溶液的pH被酸化至1-2，過濾產(chǎn)物，用水洗滌。濕固體或者直接用于下步反應(yīng)，或者在80至90℃下干燥以75％的收率得到白色固體。步驟(b)和(c)制備化合物1.4攪拌化合物1.2(1mol)的甲苯溶液并蒸干。隨后冷卻，加入吡啶(0.005mol)，進而緩慢加入亞硫酰氯(1.1mol)。該溶液加熱回流1小時，再真空濃縮，得到化合物1.3粗品。依次加入碘化鉀(1.2mol)、氰化亞銅(1.2mol)，并且將所有殘余溶劑蒸餾除去，直至內(nèi)溫達到140至144℃為止。在該溫度下保持18至24小時，隨后冷卻反應(yīng)混合物，用甲苯稀釋，濾出無機鹽。在60至70℃下真空蒸干該溶液，殘余的油狀物從石油醚中重結(jié)晶，得到化合物1.4的黃色固體，收率77％。步驟d制備化合物1.5將氨基胍碳酸氫鹽(1.75mol)溶解在9.3至10.0M的硫酸溶液中。加入2,3-二氯苯甲酰基氰化物(1mol)的乙腈溶液，在20至30℃下攪拌該懸浮液42至48小時。濾出粗產(chǎn)物，用水洗滌。將該固體加入到35℃以下的氫氧化鈉溶液中，進而過濾產(chǎn)物，用水洗滌，在80至90℃下干燥，得到化合物1.5的黃色固體，收率66％。步驟(e)拉莫三嗪粗品的制備化合物1.5的1-丙醇溶液在攪拌下回流90至120分鐘，冷卻至15至25℃，過濾拉莫三嗪的粗產(chǎn)物，得到淺棕色固體，收率90％(基于干重)。通過在1-丙醇中重結(jié)晶來純化拉莫三嗪，用活性炭處理并將溶液冷卻至15至25℃。過濾固體，用1-丙醇洗滌，在80至90℃下干燥，得到純的拉莫三嗪。實施例1:3-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-5(4H)-酮(化合物A)的制備將拉莫三嗪(614.4g,2.4mol)和固體氫氧化鈉(242.4g)混合與水(601)混合，攪拌下回流24小時。所得溶液冷卻至15至20℃，用鹽酸將pH調(diào)至5.5至6.0。過濾所得固體，再依次以40℃,50℃并且最終70℃的溫度干燥24小時。通過HPLC測出的產(chǎn)物純度為82％。HPLC條件如下色譜柱Spherisorb 50 DS洗脫劑水(600)∶乙腈(400)∶0.5M硫酸(15)流速2.0ml/min樣品100ml中含50mg
進樣5或10μl檢測270nm純度82％的產(chǎn)物樣品(583g)和丙醇(15L)混合并回流0.5小時。提取和干燥后，得到化合物A，其通過HPLC測定的純度為96.2％，所用HPLC的條件同上。
將純度96.2％的產(chǎn)物樣品在丙醇(5L)中攪拌回流1小時，以便進一步的純化。過濾固體，在40℃下真空干燥，得到標題化合物(460.7g，收率74.7％)。終產(chǎn)物通過HPLC測定的純度為99.1％。
產(chǎn)物的物理特性如下分子式C9H6Cl2N4O 分子量257.08元素分析C H N理論值42.06％2.35％21.80％計算值42.02％2.25％21.23％TLC(硅膠，氯仿∶甲醇∶冰醋酸∶1-丁醇=80∶10∶10∶5)-主要點，Rf=0.38-痕量點，Rf=0.82紅外(KBr):υmax(cm-1):3301,3127,16551556,1484,1413,1290,1200,1056812,785,748737,7191Hnmr:δ/ppm，溶劑d6-DMSO(22mg/ml-1)/300MHz12.43(1H,bs)；7.71,7.68(1H,m)；7.40(2H,m)；6.99(2H,bs)；3.3(bs(水))；2.5(q(DMSO-d5))；0(s,TMS)質(zhì)譜m/z:256(M+),258和260(締合的同位素離子)，221,186,171,85(如下所示的離子碎片)
實施例2:N-[5-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-3-基]-2,3-二氯苯甲酰胺(化合物B)的制備將拉莫三嗪(512.00g,2.00mol)溶解在吡啶(31)中，在低于35℃和無水的條件下，攪拌的同時加入2,3-二氯苯甲酰氯(873.00g，純度96％，相當于838.10g,4.00mol)。所述酰氯分成兩等份加入。第二份酰氯是在反應(yīng)開始后30分鐘時加料，并且在35℃以下進一步攪拌30分鐘。
所得混合物被濃縮至近干，攪拌下用氯仿(1300ml)研制10分鐘。過濾所得固體，氯仿(3×50ml)洗滌，室溫干燥至重量為308g,36％(基于化合物B)。攪拌中的粗產(chǎn)物樣品(50.0g)與甲醇(500ml)一起在回流溫度下加熱1小時，熱過濾所得的混合物，得到極純的化合物B(37.0g)。
該產(chǎn)物具有下列物理特性分子式C16H9Cl4N5O分子量429.09紅外(KCl):υmax(cm-1):3468,3300,3202,3385,3277,1687,1625,1559,1414,1387,1538,1459,1253,1157,1136,1116,790,775,741,7241Hnmr:δ/ppm，溶劑d6-DMSO(39mg/ml)/300MHz10.85(1H,bs)；7.8(1H,bs)；7.1(1H,bs)；7.77(1H,d,J=7Hz)；7.73(1H,d,J=7Hz)；7.5(4H,m)；4.80(bs)；3.32(bs，水)；3.18(s)；2.50(五重峰，DMSO-d5)；2.31(s，磺酸甲酯)；0.00(s,TMS)質(zhì)譜化學電離(CI):m/z:428(M+1+)；430,432和434(相關(guān)的同位素離子)。電子碰撞(ET):m/z:428(M+1)+；392,199,185,173,145(如下所示的離子碎片)
實施例3通過HPLC分析藥品(可分散片劑)中的拉莫三嗪和化合物A制備標準物和系統(tǒng)適應(yīng)性溶液標準溶液的制備是通過將拉莫三嗪參比標準物(接近100mg，精確稱重)轉(zhuǎn)移到500ml容量瓶中，加入甲醇(200ml)以溶解固體，進而加入鹽酸(100ml,0.5M)并混合；所得溶液冷卻至室溫，用水稀釋到刻度體積。
系統(tǒng)適應(yīng)性溶液的制備通過將拉莫三嗪參比標準物(100mg)和糖精鈉參比標準物(20mg)轉(zhuǎn)移到500ml容量瓶內(nèi)并用水稀釋至刻度體積。樣品溶液的制備溶液S1按照表1的配方，溶液S1的制備是通過將特定數(shù)量的片劑轉(zhuǎn)移到特定的容量瓶內(nèi)。加入一定體積的鹽酸(0.5M)，旋轉(zhuǎn)溶液直至片劑崩解和泡騰停止。
加入特定體積的甲醇，將這種溶液在超聲浴中放置10分鐘。隨后使溶液平衡至室溫，用水稀釋至刻度體積。
表1
溶液S2a)5mg片劑按上述方法制備的溶液S1用Whatman No.1濾紙過濾。棄去最先的10ml濾液。以澄清濾液作為樣品溶液。b)25mg,50mg,100mg和200mg片劑用Whatman No.1濾紙過濾溶液S1。將最初的10ml濾液棄去。將濾液(10.0ml)轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶內(nèi)，用鹽酸(0.5M)∶水∶甲醇(20∶20∶40v/v)的混合液稀釋至刻度體積。色譜方法所用條件如下色譜柱 125×4.6mm(內(nèi)徑)，不銹鋼，裝有Spherisorb 5μmODS1或有效等同物。流動相 水/甲醇/乙腈/冰醋酸/正辛胺(700/100/100/20/0.5v.v)溫度常溫流速2.0ml/min波長275nm進樣體積20μl注意(a)色譜柱在使用前以低流速泵入30分鐘甲醇來進行調(diào)整(b)色譜特性受到水對甲醇∶乙腈的配比的影響。(c)減少流動相中的甲醇∶乙腈含量可提高拉莫三嗪和糖精鈉的分辨率；所有組分的保留時間也增加。(d)酸濃縮物甲醇對于乙腈的比例和乙酰胺濃度的較小變化不會對色譜特性造成顯著影響(e)色譜柱使用后應(yīng)依次用甲醇∶水(1∶9)和甲醇洗脫。進樣過程當基線穩(wěn)定后，取系統(tǒng)適應(yīng)性溶液進樣，計算出拉莫三嗪和糖精鈉間的分辨率。利用歐洲藥典計算系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)的通用方法算出拉莫三嗪的對稱因素和理論塔板數(shù)。
數(shù)值如下分辨率10對稱因素1.2理論塔板數(shù)1400隨后，取標準溶液和樣品溶液S2進樣。計算從標準溶液主峰的面積，按照下式計算拉莫三嗪的響應(yīng)因子(R)R=Ws×PAs×100]]>其中WS=所取拉莫三嗪標準物的重量(mg)P=拉莫三嗪參比標準物的純度百分比As=進樣標準溶液中的拉莫三嗪峰面積。
用平均響應(yīng)因子(MR)根據(jù)下式計算出樣品的拉莫三嗪含量，
其中Au=進樣樣品溶液S2中拉莫三嗪的峰面積N=被測片劑的數(shù)量DFs=標準溶液的稀釋因子(500)DFu=樣品溶液的稀釋因子(5mg片劑的是250,25mg片劑的是1000,50mg片劑的是1250,100mg片劑的是2500,200mg片劑的是5000)L=標簽上含量根據(jù)下式計算出在化合物A的保留時間洗脫出的次要分相對于拉莫三嗪標準物的含量化合物A相對于拉莫三嗪的含量(w/w)=Ai×WsAs×0.79]]>其中Ai=進樣的樣品溶液S2中的化合物A峰面積WS=所取拉莫三嗪參比標準物的重量(mg)As=進樣標準溶液中的拉莫三嗪峰面積0.79-對化合物A的相對響應(yīng)因子同樣，與拉莫三嗪的有關(guān)其它第二組分的含量以％w/w的基值來計算，并假設(shè)該基值的相對響應(yīng)因子為1.0。所得結(jié)果如表2所列表2
實施例4通過HPLC測定藥用物質(zhì)(拉莫三嗪，粒度為125μm)中的化合物A和B試驗1-化合物B在甲醇和2-甲氧基乙醇的等體積混合物中制備下列標準溶液和被測溶液。
溶液1:5.0％w/v的樣品溶液溶液2:5.0％w/v的拉莫三嗪參比樣品的溶液溶液3:0.02％w/v的化合物B溶液溶液4溶液2從1.0ml稀釋至250ml溶液5用10.0ml溶液3稀釋10.0ml溶液4溶液6溶液5從7.5ml稀釋至10.0ml溶液7溶液5從5.0ml稀釋至10.0ml
溶液8溶液5從2.5ml稀釋至10.0mlTLC的操作條件是平板20×20cm,0.25mm厚的硅膠60F254涂層的平板，流動相乙酸乙酯/冰醋酸/甲醇(85∶10∶5v/v)載樣點每種溶液10μl展開長度10cm所述TLC平板風干后在254nm的紫外光下觀測。只有當溶液5的色譜圖出現(xiàn)兩個明顯分開的點，并且溶液8的色譜圖也相應(yīng)測出兩個點時，試驗才算有效。
估計出溶液1色譜圖中Rf值相當于化合物B的次要點相對于溶液5、6、7和8色譜圖中相當于化合物B(分別等于0.2、0.15、0.1和0.05％)的點的強度。
估計出溶液1色譜圖中的次要點相對于溶液5、6、7和8色譜圖中相當于拉莫三嗪(分別等于0.2、0.15、0.1和0.05％)的點的強度。
所得Rf值是拉莫三嗪0.20化合物B:0.60試驗2-化合物A在甲醇和2-甲氧基乙醇的等體積混合物中制備下列被測溶液和標準溶液。
溶液1試驗1中的溶液1溶液20.05％w/v的化合物A溶液TLC的操作條件是平板20×20cm,0.25mm厚的硅膠60F254涂層的平板，流動相氯仿/甲醇/冰醋酸/1-丁醇(80∶10∶10∶5v/v)載樣點溶液1為10μl，溶液2為1μl和2μl展開長度15cm所述平板風干后在254nm的紫外光下觀測。估計出溶液1色譜圖中Rf值相當?shù)拇我c對于溶液2色譜圖中相當于化合物A(分別等于0.1和0.2％w/w)的點的強度。
所得Rf值是拉莫三嗪0.25化合物B:0.37實施例5通過TLC測定藥品(100mg拉莫三嗪片劑)中的化合物A標準溶液和樣品溶液的制備標準溶液的制備是通過在100ml容量瓶內(nèi)精確稱重約10mg的化合物A，用甲醇溶解該化合物并稀釋至刻度體積。
樣品溶液的制備是通過將一定量的粉化片劑(等于500mg拉莫三嗪)置于50ml容量瓶中。將粉末分散在15ml鹽酸(0.1M)中，并加入甲醇∶2-甲氧基乙醇(15/15v/v,30ml)的混合物。將溶液置于超聲浴中10分鐘。該溶液隨后被冷卻至常溫，用甲醇∶2-甲氧基乙醇溶劑混合物稀釋至刻度體積。充分混合該溶液，經(jīng)濾紙(WhatmanNo.1)過濾。澄清的濾液作為被測溶液。試驗方法TLC的操作條件是平板20×20cm,0.25mm厚的硅膠60F254涂層的平板，流動相氯仿/甲醇/冰醋酸/1-丁醇(80∶10∶10∶5v/v)載樣點被測溶液為10μl，標準溶液為3μl和5μl展開長度15cm所述平板經(jīng)風干后在254nm的紫外光下觀測。
估計出樣品溶液色譜圖中除主要點以外其它所有點對于3μl標準溶液色譜圖中(雜質(zhì)率等于0.3％w/w)的點的強度。全部次要點的強度和不高于5μl上樣的標準溶液(雜質(zhì)率等于0.3％w/w)。
所得Rf值是拉莫三嗪0.20化合物B:0.34通過本說明書和所附的權(quán)利要求書，人們可以理解，詞語“含有”和“包括”以及它們的變形(例如“它含有”、“含有著”、“它包括”“包括著”)是包含的解釋，除非文中另有定義。也就是說，這些詞語的使用可以暗示包括了沒有特別引述的一種或多種成員。
本發(fā)明只是通過實施例進行說明，人們可以意識到，它們的改變形式同樣屬于本權(quán)利要求書的范圍和實質(zhì)中和本發(fā)明的范圍內(nèi)，對于所屬領(lǐng)域?qū)I(yè)人員來說基于上述公開的變化是顯而易見的。
權(quán)利要求
1．一種檢測拉莫三嗪或含有拉莫三嗪的藥物劑型樣品的純度或降解穩(wěn)定性的方法，該方法包括檢測所述樣品中所存在的選自3-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-5-(4H)-酮和N-[5-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-3-基]-2,3-二氯苯甲酰胺的化合物。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的檢測拉莫三嗪樣品純度的方法，其中包括步驟(ⅰ)將拉莫三嗪樣品溶于溶劑中以制得樣品溶液；(ⅱ)將3-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-5-(4H)-酮或N-[5-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-3-基]-2,3-二氯苯甲酰胺的樣品溶解在溶劑中，以制備參比標識物的標準溶液；(ⅲ)將所述樣品溶液和所述標準溶液進行薄層色譜，得到各自的TLC色譜；和(ⅳ)估算出得自樣品溶液的色譜圖中相對于標準溶液色譜圖中的參比標識物點、相當于參比標識物Rf值的任何次要點的強度。
3．根據(jù)權(quán)利要求1的檢測含有拉莫三嗪的藥物劑型降解穩(wěn)定性的方法，該方法包括步驟(ⅰ)將劑型樣品溶于溶劑中以制得樣品溶液；(ⅱ)將3-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-5-(4H)-酮的樣品溶解在溶劑中，以制備參比標識物的標準溶液；(ⅲ)將所述樣品溶液和所述標準溶液進行薄層色譜，得到各自的TLC色譜；和(ⅳ)估算出得自樣品溶液的色譜圖中相對于標準溶液色譜圖中的參比標識物點相當于參比標識物Rf值的任何次要點的強度。
4．根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測含有拉莫三嗪的藥物劑型降解穩(wěn)定性的方法，該方法包括步驟(ⅰ)將劑型的樣品溶解在溶劑中以生成一種或多種樣品溶液；(ⅱ)將拉莫三嗪參比標準物樣品溶解在溶劑中以生成標準溶液；(ⅲ)將樣品溶液和標準溶液注射到HPLC柱內(nèi)，和(ⅳ)測出各溶液的主峰的面積，并由此計算出參比標識物3-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-5-(4H)-酮在各樣品溶液中的含量。
5．一種化合物，它是式(B)所示的N-[5-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-3-基]-2,3-二氯苯甲酰胺
6．權(quán)利要求6所述化合物的樣品，該樣品基本上純凈。
7．根據(jù)權(quán)利要求6所述的樣品，該樣品的純度等于或高于90％。
8．一種制備權(quán)利要求5所述化合物的方法，該方法包括(ⅰ)將使2當量的2,3-二氯苯甲酰氯與1當量溶于吡啶的拉莫三嗪在低于35℃的溫度下反應(yīng)；或(ⅱ)將式(Ⅰ)化合物在1-丙醇中回流環(huán)化。
9．根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種方法，其中，步驟(ⅱ)中，化合物(Ⅰ)是通過將式(Ⅱ)和(Ⅲ)的化合物在無機酸的存在下進行反應(yīng)而制成。
10．根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中式(Ⅱ)化合物是通過用氨基胍碳酸氫鹽的硫酸溶液處理2,3-二氯苯甲?；杌锒频?。
11．選自3-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪5-(4H)-酮和N-[5-氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-3-基]-2,3-二氯苯甲酰胺的化合物在檢測拉莫三嗪或含有拉莫三嗪的藥物劑型樣品的純度或降解穩(wěn)定性中作為參比標識物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測拉莫三嗪或含有拉莫三嗪的藥物劑型樣品的純度或降解穩(wěn)定性的方法，該方法包括分析所述樣品中所存在的選自3－氨基－6－(2，3－二氯苯基)－1，2，4－三嗪－5－(4H)－酮(化合物A)和N－[5－氨基－6－(2，3－二氯苯基)－1，2，4－三嗪－3－基]－2，3－二氯苯甲酰胺(化合物B)的化合物。本發(fā)明還公開了一種制備新化合物B的方法。
文檔編號G01N30/00GK1238454SQ9910344
公開日1999年12月15日 申請日期1999年3月10日 優(yōu)先權(quán)日1998年6月10日
發(fā)明者L·M·埃德梅德斯, N·A·格里菲斯－斯金納, D·A·希爾, G·T·希爾, T·W·帕克哈姆 申請人:惠爾康基金會集團公司