本發(fā)明屬于分子檢測(cè)，具體是涉及一種用于急性髓系白血病診斷的trna修飾分子標(biāo)志物及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、急性髓系白血病(acute?myeloid?leukemia，aml)是一組以髓系起源，幼稚細(xì)胞在骨髓、外周血或其他組織中惡性增殖，并引起發(fā)熱、貧血、出血和腫瘤浸潤(rùn)等臨床表現(xiàn)的造血系統(tǒng)腫瘤?，F(xiàn)有micm評(píng)估分層體系主要依靠形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)對(duì)aml患者進(jìn)行診斷、治療和預(yù)后評(píng)估，雖可以有效的指導(dǎo)臨床診斷，但是缺乏表觀修飾類的分子生物學(xué)診斷標(biāo)志物，不能滿足臨床上對(duì)于精準(zhǔn)診斷的需求。此外，aml診斷需要進(jìn)行骨髓穿刺和活檢，有一定創(chuàng)傷；二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)dna或mrna層面的基因異常和染色體核型檢測(cè)細(xì)胞遺傳學(xué)異常需要的實(shí)驗(yàn)室輪轉(zhuǎn)時(shí)間較長(zhǎng)，檢驗(yàn)科檢驗(yàn)項(xiàng)目報(bào)告時(shí)限(tat)均為7-14天，實(shí)驗(yàn)步驟繁瑣且成本高。

2、隨著分子診斷技術(shù)在白血病領(lǐng)域的應(yīng)用，白血病的診斷已從過(guò)去以形態(tài)為主的診斷體系，正逐步向以精確分子診斷為核心的個(gè)體化診斷體系發(fā)展。近年來(lái)研究表明，表觀遺傳學(xué)影響白血病的發(fā)生、發(fā)展，因此，dna甲基化修飾、rna甲基化修飾、trna修飾等表觀修飾，有望作為新型分子標(biāo)志物輔助疾病的診斷，提高患者的生存概率。

3、trna是一種非編碼rna，一般長(zhǎng)度為76-90個(gè)核苷酸，是蛋白質(zhì)高效和準(zhǔn)確翻譯的關(guān)鍵。trna上的核苷酸存在廣泛修飾，這些修飾對(duì)于trna在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮功能起著重要作用。臨床上期待發(fā)現(xiàn)更多特異而敏感的trna修飾，作為aml精準(zhǔn)診斷的分子標(biāo)志物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于此，本發(fā)明的目的是一種用于急性髓系白血病診斷的特異性分子標(biāo)志物及其在急性髓系白血病檢測(cè)中的應(yīng)用，所述分子標(biāo)志物為總trna的n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷修飾，基于所述分子標(biāo)志物可簡(jiǎn)單、快速地實(shí)現(xiàn)急性髓系白血病的輔助診斷。

2、本發(fā)明的第一個(gè)方面，是提供總trna的n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷(n6-threonylcarbamoyladenosine，t6a)修飾作為分子標(biāo)志物在制備急性髓系白血病檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。

3、本發(fā)明的第二個(gè)方面，是提供檢測(cè)總trna的n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷修飾水平的試劑在制備急性髓系白血病檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

4、在其中一些實(shí)施例中，所述檢測(cè)試劑盒用于色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)。

5、在其中一些實(shí)施例中，所述試劑為n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷。n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷作為對(duì)照品使用。

6、在其中一些實(shí)施例中，所述試劑還包括流動(dòng)相，所述流動(dòng)相包括a相和b相，所述a相為0.05％～2.0％甲酸水溶液，優(yōu)選為0.1％～2.0％甲酸水溶液，更優(yōu)選為0.1％～1.0％甲酸水溶液；所述b相為0.05％～2.0％甲酸甲醇溶液，優(yōu)選為0.1％～2.0％甲酸甲醇溶液，更優(yōu)選為0.1％～1.0％甲酸甲醇溶液。

7、本發(fā)明的第三個(gè)方面，是提供一種非診斷目的的檢測(cè)急性髓系白血病的方法，包括以下步驟：獲取待測(cè)樣品的總trna，檢測(cè)所述總trna的n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷修飾水平。

8、在其中一些實(shí)施例中，使用色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)所述總trna的n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷修飾水平。

9、在其中一些實(shí)施例中，色譜檢測(cè)條件包括：流動(dòng)相：包括a相和b相，所述a相為0.05％～2.0％甲酸水溶液，優(yōu)選為0.1％～2.0％甲酸水溶液，更優(yōu)選為0.1％～1.0％甲酸水溶液；所述b相為0.05％～2.0％甲酸甲醇溶液，優(yōu)選為0.1％～2.0％甲酸甲醇溶液，更優(yōu)選為0.1％～1.0％甲酸甲醇溶液。

10、在其中一些實(shí)施例中，色譜檢測(cè)條件包括：色譜柱：waters?acquity?beh?c18；柱溫：35℃～55℃；進(jìn)樣量：1μl～40μl；采用梯度洗脫。

11、在其中一些實(shí)施例中，所述待測(cè)樣品包括組織樣本、含白細(xì)胞的體液樣本；優(yōu)選地，所述體液樣本為血液。

12、本發(fā)明經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)總trna的n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷修飾可作為急性髓系白血病檢測(cè)的特異性分子標(biāo)志物。與健康人相比，急性髓系白血病患者生物樣本中總trna的n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷修飾水平顯著提升；進(jìn)一步的診斷效能分析結(jié)果顯示其在用于急性髓系白血病檢測(cè)檢測(cè)時(shí)，當(dāng)閾值為0.0555，auc為0.955，靈敏度為96.77％，特異性為85.29％，具有較高的診斷準(zhǔn)確性和價(jià)值。因此，總trna的n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷修飾可作為急性髓系白血病檢測(cè)的特異性分子標(biāo)志物，輔助急性髓系白血病的精準(zhǔn)診斷。

13、此外，基于總trna的n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷修飾檢測(cè)可采用待測(cè)者的血液等作為檢測(cè)樣品，取樣方便無(wú)創(chuàng)，操作相對(duì)簡(jiǎn)單、成本低，速度快，tat為2-4天。

技術(shù)特征：

1.總trna的n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷修飾作為分子標(biāo)志物在制備急性髓系白血病檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。

2.檢測(cè)總trna的n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷修飾水平的試劑在制備急性髓系白血病檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測(cè)試劑盒用于色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)。

4.如權(quán)利要求2～3任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述試劑為n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷。

5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述試劑還包括流動(dòng)相，所述流動(dòng)相包括a相和b相，所述a相為0.05％～2.0％甲酸水溶液，所述b相為0.05％～2.0％甲酸甲醇溶液。

6.一種非診斷目的的檢測(cè)急性髓系白血病的方法，其特征在于，包括以下步驟：獲取待測(cè)樣品的總trna，檢測(cè)所述總trna的n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷修飾水平。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，使用色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)所述總trna的n6-蘇氨酰氨基甲酰腺苷修飾水平。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，色譜檢測(cè)條件包括：流動(dòng)相：包括a相和b相，所述a相為0.05％～2.0％甲酸水溶液，所述b相為0.05％～2.0％甲酸甲醇溶液。

9.如權(quán)利要求7或8所述的方法，其特征在于，色譜檢測(cè)條件包括：色譜柱：watersacquity?beh?c18；柱溫：35℃～55℃；進(jìn)樣量：1μl～40μl；采用梯度洗脫。

10.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述待測(cè)樣品包括組織樣本、含白細(xì)胞的體液樣本；優(yōu)選地，所述體液樣本為血液。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種用于急性髓系白血病診斷的tRNA修飾分子標(biāo)志物及應(yīng)用，所述分子標(biāo)志物為總tRNA的N6?蘇氨酰氨基甲酰腺苷修飾。本發(fā)明經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)與健康人相比，急性髓系白血病患者生物樣本中總tRNA的N6?蘇氨酰氨基甲酰腺苷修飾水平顯著提升；進(jìn)一步的診斷效能分析結(jié)果顯示其在用于急性髓系白血病檢測(cè)檢測(cè)時(shí)具有較高的診斷準(zhǔn)確性和價(jià)值。因此，總tRNA的N6?蘇氨酰氨基甲酰腺苷修飾可作為急性髓系白血病檢測(cè)的特異性分子標(biāo)志物，輔助急性髓系白血病的精準(zhǔn)診斷。此外，基于總tRNA的N6?蘇氨酰氨基甲酰腺苷修飾檢測(cè)可采用待測(cè)者的血液等作為檢測(cè)樣品，取樣方便無(wú)創(chuàng)，操作相對(duì)簡(jiǎn)單、成本低，速度快，TAT為2?4天。

技術(shù)研發(fā)人員：程雅婷,陳濤,繆夏萍,陶宣燃,董衡,蒙裕歡,范喜杰,孫如美
受保護(hù)的技術(shù)使用者：廣州市金域轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究院有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/28