本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)，具體涉及一種用于定量檢測(cè)雌二醇測(cè)定試劑盒。

背景技術(shù)：

1、17β-雌二醇(e2)是最具生物學(xué)活性的雌激素之一，分子量為272.3da。在女性中，e2主要由卵巢合成，而在男性中，主要由腎上腺皮質(zhì)和睪丸產(chǎn)生。e2是一種脂溶性分子，分泌到血液中的e2大部分特異性地與性激素結(jié)合球蛋白結(jié)合以及非特異性地與人血清白蛋白結(jié)合，只有一小部分處于游離狀態(tài)。結(jié)合態(tài)的e2沒(méi)有生物活性，游離狀態(tài)下的少量e2可進(jìn)入靶細(xì)胞并與相應(yīng)受體結(jié)合發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。在臨床工作中，e2水平的評(píng)估在評(píng)估卵巢功能、卵巢過(guò)度刺激綜合征以及性早熟的輔助診斷和治療中具有重要作用，還可在體外受精(ivf)框架內(nèi)監(jiān)測(cè)生育治療和確定排卵時(shí)間。

2、臨床診斷時(shí)是測(cè)定e2的總量，而非游離狀態(tài)的e2，所以需要將與性激素結(jié)合球蛋白和白蛋白結(jié)合的e2釋放出來(lái)，但現(xiàn)有技術(shù)存在解離不完全的問(wèn)題，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。同時(shí)樣本中存在與雌二醇結(jié)構(gòu)類(lèi)似的干擾物質(zhì)會(huì)影響雌二醇的測(cè)定，從而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種用于定量檢測(cè)雌二醇測(cè)定試劑盒，以解決現(xiàn)有技術(shù)存在解離不完全、樣本中存在與雌二醇結(jié)構(gòu)類(lèi)似的干擾物質(zhì)會(huì)影響雌二醇的測(cè)定導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確的問(wèn)題。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種用于定量檢測(cè)雌二醇測(cè)定試劑盒，包括羧基磁珠、吖啶酯標(biāo)記的抗e2抗體、生物素標(biāo)記的e2衍生物、解離劑和阻斷劑；

3、所述解離劑包含甲氫睪酮、達(dá)那唑、8-苯胺-1-萘磺酸和曲拉通中的至少一種；

4、所述阻斷劑包含抗e1抗體。

5、進(jìn)一步的，所述羧基磁珠為包被了鏈霉親和素的磁珠與緩沖液的混合液；緩沖液為含有牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、tr?i?s鹽緩沖液和嗎啉乙磺酸緩沖液中的一種。

6、進(jìn)一步的，包被了鏈霉親和素的磁珠在緩沖液中的濃度為0.25mg/ml。

7、進(jìn)一步的，所述解離劑采用甲氫睪酮、達(dá)那唑、8-苯胺-1-萘磺酸和曲拉通，所述甲氫睪酮的濃度為0.1μg/ml，達(dá)那唑的濃度為0.1μg/ml，8-苯胺-1-萘磺酸的濃度為0.1μg/ml，曲拉通的含量為0.5％(v/v)。

8、進(jìn)一步的，所述抗e1抗體的濃度為0.2μg/ml。

9、進(jìn)一步的，所述吖啶酯標(biāo)記的抗e2抗體為吖啶酯-抗e2抗體復(fù)合物與緩沖液的混合液，所述吖啶酯-抗e2抗體復(fù)合物在緩沖液的濃度為0.5±0.2μg/ml。

10、進(jìn)一步的，所述生物素標(biāo)記的e2衍生物為生物素-e2-bsa-bio復(fù)合物與緩沖液的混合液，所述生物素-e2-bsa-bio復(fù)合物在緩沖液的濃度為0.5±0.2μg/ml。

11、進(jìn)一步的，所述吖啶酯標(biāo)記的e2抗體制備包括以下步驟：

12、取離心管加待標(biāo)記抗e2抗體，將吖啶酯溶液加至管壁，量取標(biāo)記緩沖液沖下，吹打振蕩密封，37℃反應(yīng)60分鐘，離心后加終止緩沖液，同樣操作再反應(yīng)30分鐘,將產(chǎn)物轉(zhuǎn)入透析袋，4℃透析換液至發(fā)光值達(dá)標(biāo)，回收后測(cè)蛋白濃度，加蛋白保護(hù)液和丙三醇混勻。

13、進(jìn)一步的，所述生物素標(biāo)記的e2衍生物制備包括以下步驟：

14、取離心管加e2衍生物，加生物素溶液于管壁，再用標(biāo)記緩沖液沖下，吹打振蕩后密封，37.0℃反應(yīng)30分鐘，結(jié)束后離心加終止緩沖液，同樣操作再反應(yīng)30分鐘，將產(chǎn)物轉(zhuǎn)入透析袋，4℃透析并換液5次；回收后測(cè)蛋白濃度，加蛋白保護(hù)液和丙三醇混勻。

15、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

16、該用于定量檢測(cè)雌二醇測(cè)定試劑盒，通過(guò)解離劑能夠很好地將e2從與蛋白結(jié)合的狀態(tài)中解離出來(lái)，通過(guò)阻斷劑，與樣本中的干擾物質(zhì)結(jié)合，能夠很好地消除與e2結(jié)構(gòu)類(lèi)似的物質(zhì)對(duì)檢測(cè)產(chǎn)生的干擾，從而提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度。

技術(shù)特征：

1.一種用于定量檢測(cè)雌二醇測(cè)定試劑盒，其特征在于：包括羧基磁珠、吖啶酯標(biāo)記的抗e2抗體、生物素標(biāo)記的e2衍生物、解離劑和阻斷劑；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于定量檢測(cè)雌二醇測(cè)定試劑盒，其特征在于：所述羧基磁珠為包被了鏈霉親和素的磁珠與緩沖液的混合液；緩沖液為含有牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、tris鹽緩沖液和嗎啉乙磺酸緩沖液中的一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于定量檢測(cè)雌二醇測(cè)定試劑盒，其特征在于：包被了鏈霉親和素的磁珠在緩沖液中的濃度為0.25mg/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于定量檢測(cè)雌二醇測(cè)定試劑盒，其特征在于：所述解離劑采用甲氫睪酮、達(dá)那唑、8-苯胺-1-萘磺酸和曲拉通，所述甲氫睪酮的濃度為0.1μg/ml，達(dá)那唑的濃度為0.1μg/ml，8-苯胺-1-萘磺酸的濃度為0.1μg/ml，曲拉通的含量為0.5％(v/v)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于定量檢測(cè)雌二醇測(cè)定試劑盒，其特征在于：所述抗e1抗體的濃度為0.2μg/ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于定量檢測(cè)雌二醇測(cè)定試劑盒，其特征在于：所述吖啶酯標(biāo)記的抗e2抗體為吖啶酯-抗e2抗體復(fù)合物與緩沖液的混合液，所述吖啶酯-抗e2抗體復(fù)合物在緩沖液的濃度為0.5±0.2μg/ml。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于定量檢測(cè)雌二醇測(cè)定試劑盒，其特征在于：所述生物素標(biāo)記的e2衍生物為生物素-e2-bsa-bio復(fù)合物與緩沖液的混合液，所述生物素-e2-bsa-bio復(fù)合物在緩沖液的濃度為0.5±0.2μg/ml。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于定量檢測(cè)雌二醇測(cè)定試劑盒，其特征在于：所述吖啶酯標(biāo)記的e2抗體制備包括以下步驟：

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于定量檢測(cè)雌二醇測(cè)定試劑盒，其特征在于：所述生物素標(biāo)記的e2衍生物制備包括以下步驟：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種用于定量檢測(cè)雌二醇測(cè)定試劑盒，屬于生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，包括羧基磁珠、吖啶酯標(biāo)記的抗E2抗體、生物素標(biāo)記的E2衍生物、解離劑和阻斷劑；所述解離劑包含甲氫睪酮、達(dá)那唑、8?苯胺?1?萘磺酸和曲拉通中的至少一種；所述阻斷劑包含抗E1抗體，所述解離劑采用甲氫睪酮、達(dá)那唑、8?苯胺?1?萘磺酸和曲拉通，所述甲氫睪酮的濃度為0.1μg/mL，達(dá)那唑的濃度為0.1μg/mL，8?苯胺?1?萘磺酸的濃度為0.1μg/mL，曲拉通的含量為0.5％(v/v)；通過(guò)解離劑能夠很好地將E2從與蛋白結(jié)合的狀態(tài)中解離出來(lái)，通過(guò)阻斷劑，與樣本中的干擾物質(zhì)結(jié)合，能夠很好地消除與E2結(jié)構(gòu)類(lèi)似的物質(zhì)對(duì)檢測(cè)產(chǎn)生的干擾，從而提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度。

技術(shù)研發(fā)人員：劉俊,鄭美玲,陳恒博
受保護(hù)的技術(shù)使用者：南京頤蘭貝生物科技有限責(zé)任公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9