本發(fā)明屬于生物檢測(cè)，涉及一種動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的組織勻漿液制備方法。

背景技術(shù)：

1、現(xiàn)有的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊maldi樣本勻漿液的制備方法各有不同。目前較為常用制備maldi樣本勻漿液的方法是采用研磨珠輔助的生物樣本均質(zhì)器。但是儀器程序中參數(shù)設(shè)定不同也會(huì)對(duì)勻漿效果產(chǎn)生影響。研磨參數(shù)設(shè)置過(guò)快會(huì)使ep管在振蕩過(guò)程中破損，進(jìn)而造成生物樣本的浪費(fèi)。研磨參數(shù)設(shè)置過(guò)慢會(huì)使研磨不充分，降低研磨效率。同時(shí)在充分研磨后所得到的勻漿液如何有效地提取上清液對(duì)代謝組學(xué)的質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)以及結(jié)果分析尤為重要，因此，設(shè)計(jì)一種動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的組織勻漿液制備方法來(lái)解決上述問(wèn)題很有必要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)上述問(wèn)題，為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提出了一種動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的組織勻漿液制備方法，本發(fā)明的目的在于：提高上清液中小分子物質(zhì)的數(shù)量，從而提高漿液的質(zhì)量。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：本發(fā)明包括以下步驟：

3、s1、通過(guò)頸動(dòng)脈內(nèi)膜剝脫術(shù)(cea)取得人斑塊生物樣本，用氯化鈉溶液沖洗斑塊表面的血跡和雜質(zhì)；

4、s2、清洗后，剪取部分生物樣本；

5、s3、將該樣本繼續(xù)剪碎為塊；

6、s4、稱(chēng)量樣本；

7、s5、移入2mlep管；

8、s6、按比例加入生理鹽水，樣本重量：生理鹽水＝1：3；

9、s7、加入研磨珠2個(gè)；

10、s8、把ep管放置于均質(zhì)器進(jìn)行研磨；

11、s9、把ep管放置離心機(jī)上進(jìn)行兩次離心，在第一次離心后加入乙腈溶劑配平，兩次離心后取上清液于新的ep管中備用，得到樣本勻漿液。

12、優(yōu)選的，所述氯化鈉溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9％。

13、優(yōu)選的，所述兩次離心分別為低速離心和高速離心，所述低速離心在前，高速離心在后。

14、優(yōu)選的，所述高速離心轉(zhuǎn)速為13000轉(zhuǎn)。

15、優(yōu)選的，所述低速離心轉(zhuǎn)速為3000轉(zhuǎn)。

16、優(yōu)選的，所述低速離心轉(zhuǎn)速為8000轉(zhuǎn)。

17、優(yōu)選的，兩個(gè)所述研磨珠的尺寸分別為1mm和3mm。

18、優(yōu)選的，所述樣本重量為500mg。

19、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

20、1、本發(fā)明通過(guò)對(duì)均質(zhì)器參數(shù)的調(diào)整和設(shè)定，能夠很好的保證在研磨過(guò)程中不會(huì)導(dǎo)致ep管的破損，進(jìn)而避免造成樣本的浪費(fèi)。

21、2、本發(fā)明通過(guò)設(shè)置兩種不同的離心速度來(lái)篩選代謝物，通過(guò)低速離心和高速離心結(jié)合的操作方式，能夠保證小分子物質(zhì)充分保留在上清液中。

22、3、本發(fā)明在第一次離心后，加入乙腈溶劑可以有效的沉淀蛋白質(zhì)，保證小分子物質(zhì)充分保留在溶液中，提高質(zhì)譜儀器的檢測(cè)效率。

技術(shù)特征：

1.一種動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的組織勻漿液制備方法，其特征在于，該制備方法包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的組織勻漿液制備方法，其特征在于：所述氯化鈉溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9％。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的組織勻漿液制備方法，其特征在于：兩次所述離心分別為低速離心和高速離心，所述低速離心在前，高速離心在后。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的組織勻漿液制備方法，其特征在于：所述高速離心轉(zhuǎn)速為13000轉(zhuǎn)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的組織勻漿液制備方法，其特征在于：所述低速離心轉(zhuǎn)速為3000轉(zhuǎn)。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的組織勻漿液制備方法，其特征在于：所述低速離心轉(zhuǎn)速為8000轉(zhuǎn)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的組織勻漿液制備方法，其特征在于：兩個(gè)所述研磨珠的尺寸分別為1mm和3mm。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的組織勻漿液制備方法，其特征在于：所述樣本重量為500mg。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的組織勻漿液制備方法，包括以下步驟：S1、通過(guò)頸動(dòng)脈內(nèi)膜剝脫術(shù)取得人斑塊生物樣本，用氯化鈉溶液沖洗斑塊表面的血跡和雜質(zhì)；S2、清洗后，剪取部分生物樣本；S3、將該樣本繼續(xù)剪碎為塊；S4、稱(chēng)量樣本；S5、移入2mlEP管；S6、按比例加入生理鹽水，樣本重量：生理鹽水＝1：3；S7、加入研磨珠2個(gè)；S8、把EP管放置于均質(zhì)器進(jìn)行研磨；S9、把EP管放置離心機(jī)上進(jìn)行兩次離心，在第一次離心后加入乙腈溶劑配平，兩次離心后取上清液于新的EP管中備用，得到樣本勻漿液，低速離心和高速離心結(jié)合的操作方式，能夠保證小分子物質(zhì)充分保留在上清液中提高質(zhì)譜儀器的檢測(cè)效率。

技術(shù)研發(fā)人員：李菁,管生,萬(wàn)佳鑫
受保護(hù)的技術(shù)使用者：鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30