本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體涉及一種快速測(cè)定人血漿中選擇性5-ht1f激動(dòng)劑拉米地坦?jié)舛确治龇椒ā?/p>

背景技術(shù)：

1、拉米地坦是一種新型的選擇性5-ht1f激動(dòng)劑，并有中樞神經(jīng)系統(tǒng)滲透性。拉米地坦與5-ht1f受體具有高親和力，推測(cè)其通過(guò)激動(dòng)5-ht1f受體，從而抑制中樞和外周神經(jīng)元活性及cgrp的釋放，達(dá)到治療偏頭痛作用。拉米地坦片由美國(guó)禮來(lái)公司研發(fā)，于2019年10月11日成功獲得了美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(fda)的上市批準(zhǔn)，商品名：用于有或無(wú)先兆癥狀的成人偏頭痛患者的急性治療。值得注意的是，其作用機(jī)制不同于當(dāng)前廣泛使用的“曲坦”類(lèi)偏頭痛治療藥物，拉米地坦不存在血管收縮效應(yīng)，因此不會(huì)增加心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)于患有心血管疾病或處于心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)的偏頭痛患者更為安全，不僅是首個(gè)，也是迄今為止唯一一款被fda批準(zhǔn)用于成人偏頭痛急性期治療的地坦類(lèi)藥物。

2、為了推進(jìn)拉米地坦仿制藥物的研發(fā)，需要監(jiān)測(cè)其在人血漿中的濃度水平，以獲得藥代動(dòng)力學(xué)特征，進(jìn)而評(píng)價(jià)原研藥物和仿制藥物的生物等效性。但目前尚無(wú)任何文獻(xiàn)中報(bào)道的測(cè)定人血漿中拉米地坦的分析方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了填補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)中的空白，本發(fā)明的目的在于提供一種快速測(cè)定人血漿中拉米地坦?jié)舛确治龇椒ā?/p>

2、本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)：

3、一方面，本發(fā)明提供一種快速測(cè)定人血漿中拉米地坦?jié)舛确治龇椒?，其包括如下步驟：

4、向血漿樣本中加入內(nèi)標(biāo)溶液和乙腈進(jìn)行渦流，離心后收集上清液，上清液中加入乙腈-水混合物，渦流混勻得到預(yù)處理后的待測(cè)樣品；

5、采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜配備電噴霧電離源檢測(cè)，采用venusil?mp-c18(2)色譜柱等度洗脫，將待測(cè)樣品進(jìn)行液相色譜分離，然后進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，基于檢測(cè)峰面積比繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得回歸方程，最終計(jì)算獲得待測(cè)樣品中的拉米地坦?jié)舛取?/p>

6、上述的方法中，優(yōu)選地，所述內(nèi)標(biāo)溶液為拉貝洛爾。

7、上述的方法中，優(yōu)選地，所述預(yù)處理的具體方法包括：

8、向96孔板中加入50.0μl血漿樣本，接著加入50.0μl的內(nèi)標(biāo)溶液和300μl的乙腈，渦流混勻后離心收集上清液，取50.0μl的上清液到另一干凈96孔板中，接著加入150μl的乙腈-水混合物，渦流混勻，得到待測(cè)樣品。

9、上述的方法中，優(yōu)選地，所述離心的時(shí)間為10min，離心溫度為4℃，離心速度為3900rpm。

10、上述的方法中，優(yōu)選地，所述內(nèi)標(biāo)溶液的濃度為500ng/ml。

11、上述的方法中，優(yōu)選地，所述乙腈-水混合物的比例為體積比1:1。

12、上述的方法中，優(yōu)選地，進(jìn)行液相色譜分離所采用的色譜柱為：venusil?mp-c18(2)色譜柱，5.0μm，4.6×100mm；所采用的流動(dòng)相為：a相：含0.2％甲酸和5mm醋酸銨的水溶液，b相：乙腈。

13、上述的方法中，優(yōu)選地，進(jìn)行液相色譜分離洗脫條件為：

14、等度洗脫：a相：b相＝50％：50％

15、洗脫時(shí)間：2.70min；

16、流速：0.650ml/min；

17、進(jìn)樣量：1.00μl；

18、自動(dòng)進(jìn)樣器溫度：4℃；

19、柱溫：40℃。

20、上述的方法中，優(yōu)選地，進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)的質(zhì)譜條件為：

21、離子源：電噴霧離子源(esi)；

22、噴射電壓：5500v；

23、噴霧氣(gas1)：65psi；

24、輔助氣(gas2)：65psi；

25、檢測(cè)方式：正離子；

26、離子源溫度：500℃；

27、碰撞誘導(dǎo)解離(cad)：9；

28、氣簾氣(curtain?gas)：40psi；

29、駐留時(shí)間：200ms。

30、上述的方法中，優(yōu)選地，進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)采用定量分析離子對(duì)，所述定量分析離子對(duì)為：

31、拉米地坦m/z?378.4→360.2，碰撞能量(ce)33ev，去簇電壓(dp)80v；

32、拉貝洛爾m/z?329.1→161.9，碰撞能量(ce)26ev，去簇電壓(dp)80v。

33、上述的方法中，優(yōu)選地，標(biāo)準(zhǔn)曲線具體制作為：

34、以待測(cè)樣品理論濃度為橫坐標(biāo)，待測(cè)樣品與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸分析計(jì)算獲得直線回歸方程。

35、另一方面，本發(fā)明還提供上述的方法在分析血漿樣本中拉米地坦?jié)舛戎械膽?yīng)用；所述拉米地坦用于有或無(wú)先兆癥狀的成人偏頭痛患者的急性治療。

36、本發(fā)明的有益效果：

37、(1)目前尚未有文獻(xiàn)或?qū)＠麍?bào)道測(cè)定人血漿中拉米地坦的方法，因此本發(fā)明建立的lc-ms/ms法屬于首次，該方法滿(mǎn)足方法學(xué)驗(yàn)證的各項(xiàng)指標(biāo)。

38、(2)本發(fā)明具有預(yù)處理操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，僅需要一步提取及一步稀釋即可進(jìn)行分析，提取后樣本易于保存，分析速度較快，分析時(shí)間僅為2.7min，因此本發(fā)明滿(mǎn)足高通量大批量生物樣品的檢測(cè)。

39、(3)本發(fā)明靈敏度較高、拉米地坦定量下限為2.00ng/ml，本發(fā)明方法準(zhǔn)確度好，精密度高，重現(xiàn)性好，能夠更準(zhǔn)確地分析藥物的濃度。

40、(4)采用本發(fā)明建立的lc-ms/ms方法測(cè)定人血漿中拉米地坦?jié)舛?，可更快推進(jìn)該仿制藥生物等效性評(píng)價(jià)的進(jìn)程。

41、上述說(shuō)明僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術(shù)手段，并可依照說(shuō)明書(shū)的內(nèi)容予以實(shí)施，以下以本發(fā)明的較佳實(shí)施例并配合附圖詳細(xì)說(shuō)明如后。

技術(shù)特征：

1.一種快速測(cè)定人血漿中拉米地坦?jié)舛确治龇椒ǎ浒ㄈ缦虏襟E：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)溶液為拉貝洛爾。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述預(yù)處理的具體方法包括：

4.根據(jù)權(quán)利要求1～3所述的方法，其中，所述內(nèi)標(biāo)溶液的濃度為500ng/ml，所述乙腈-水混合物的比例為體積比1:1。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，進(jìn)行液相色譜分離所采用的色譜柱為：venusilmp-c18(2)色譜柱，5.0μm，4.6×100mm；所采用的流動(dòng)相為：a相：含0.2％甲酸和5mm醋酸銨的水溶液，b相：乙腈。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，進(jìn)行液相色譜分離洗脫條件為：

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)的質(zhì)譜條件為：

8.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的方法，其中，進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)采用定量分析離子對(duì)，所述定量分析離子對(duì)為：

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，標(biāo)準(zhǔn)曲線具體制作為：

10.權(quán)利要求1～9任一項(xiàng)所述的方法在分析血漿樣本中拉米地坦?jié)舛戎械膽?yīng)用；所述拉米地坦用于有或無(wú)先兆癥狀的成人偏頭痛患者的急性治療。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種快速測(cè)定人血漿中拉米地坦?jié)舛确治龇椒?。其包括：向血漿樣本中加入內(nèi)標(biāo)拉貝洛爾溶液和乙腈進(jìn)行渦流，離心后收集上清液，上清液中加入乙腈?水混合物，渦流混勻得到預(yù)處理后的待測(cè)樣品；采用液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜配備電噴霧電離源檢測(cè)，采用Venusil?MP?C18(2)色譜柱等度洗脫，將待測(cè)樣品進(jìn)行液相色譜分離，然后進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，基于檢測(cè)峰面積比繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得回歸方程，最終計(jì)算獲得待測(cè)樣品中的拉米地坦?jié)舛?。本發(fā)明具有預(yù)處理操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，血漿用量少，分析時(shí)間短，適用于血漿中拉米地坦的檢測(cè)及臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究。

技術(shù)研發(fā)人員：鐘勘,陳醒,張嘉懿,蘇玉雯,陳海燕,楊勝
受保護(hù)的技術(shù)使用者：蘇州?？漆t(yī)藥技術(shù)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30