本發(fā)明涉及醫(yī)療診斷領(lǐng)域；更具體地，本發(fā)明涉及一種cd8+原始t細(xì)胞新亞群，及其在檢測(cè)人體cd8+?t細(xì)胞免疫功效方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、cd8+?t細(xì)胞是適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵組成部分，在抵御病毒、細(xì)菌和腫瘤細(xì)胞感染中發(fā)揮重要作用。當(dāng)cd8+?t細(xì)胞被抗原激活后，增殖、分化為細(xì)胞毒性效應(yīng)細(xì)胞。通過(guò)釋放細(xì)胞毒性顆粒、誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡等機(jī)制殺傷目標(biāo)細(xì)胞，發(fā)揮抗病毒和抗腫瘤作用。其中，cd8+原始t細(xì)胞是從胸腺發(fā)育而來(lái)的未經(jīng)抗原刺激的t細(xì)胞亞群，它們大多表達(dá)αβ型t細(xì)胞受體(tcr)，在接受抗原刺激而活化后會(huì)分化為細(xì)胞毒性效應(yīng)cd8+?t細(xì)胞，根據(jù)分泌細(xì)胞因子的類(lèi)型可進(jìn)一步細(xì)分。如分泌大量ifn-γ、tnf-α等的tc1細(xì)胞發(fā)揮抗病毒和抗腫瘤的作用，分泌il-4、il-5等的tc2細(xì)胞參與對(duì)寄生蟲(chóng)感染的免疫防御，tc17細(xì)胞則分泌il-17等細(xì)胞因子，在抗細(xì)菌和真菌感染中發(fā)揮作用。因此，細(xì)胞活化、增殖、分化及分泌效應(yīng)因子的能力是評(píng)價(jià)cd8+?t細(xì)胞功能的重要指標(biāo)。

2、tcr在t細(xì)胞激活和免疫應(yīng)答中發(fā)揮關(guān)鍵作用，通過(guò)識(shí)別mhc分子上呈遞的抗原肽從而激活t細(xì)胞，啟動(dòng)一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路以誘導(dǎo)t細(xì)胞活化、增殖、分化及后續(xù)發(fā)揮效應(yīng)。而tcr的多樣性是適應(yīng)性免疫應(yīng)答的基礎(chǔ)，cd8+原始t細(xì)胞具有廣泛的tcr多樣性，它們?cè)谕庵苎h(huán)，等待被抗原激活。在人體衰老過(guò)程中，由于造血和胸腺的退化，外周血cd8+原始t細(xì)胞減少而記憶細(xì)胞比例上升，以及出現(xiàn)t細(xì)胞受體多態(tài)性的減少，導(dǎo)致cd8+?t細(xì)胞功能的下降，具體表現(xiàn)為識(shí)別抗原、活化增殖和分泌細(xì)胞因子的能力下降。這些變化都會(huì)降低機(jī)體對(duì)新感染和腫瘤的防御能力。機(jī)體免疫監(jiān)視功能的受損會(huì)加速衰老細(xì)胞的積累，進(jìn)一步加速衰老的進(jìn)程。因此，監(jiān)測(cè)、維持免疫系統(tǒng)的功能對(duì)延緩衰老具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種以是否表達(dá)ccl5為標(biāo)記界定的cd8+原始t細(xì)胞新亞群，其分離方法及其應(yīng)用。其應(yīng)用方面包括了ccl5+cd8+t細(xì)胞及ccl5-cd8+t細(xì)胞。

2、在本發(fā)明的第一方面，提供細(xì)胞群的應(yīng)用，用于作為分析靶標(biāo)、制備分析免疫細(xì)胞功能的試劑；其中，所述細(xì)胞群選自：表達(dá)ccl5的免疫細(xì)胞群；或不表達(dá)(包括低表達(dá))ccl5的免疫細(xì)胞群。

3、在一種或多種實(shí)施方式中，所述免疫細(xì)胞為cd8+t細(xì)胞。

4、在一種或多種實(shí)施方式中，所述表達(dá)ccl5的免疫細(xì)胞群為ccl5+cd8+t細(xì)胞群。

5、在一種或多種實(shí)施方式中，所述的不表達(dá)ccl5的免疫細(xì)胞群為ccl5-cd8+t細(xì)胞群((tsn)亞群)。

6、在一種或多種實(shí)施方式中，所述分析免疫細(xì)胞功能包括：分析cd8+?t細(xì)胞功能；其中，如果測(cè)試對(duì)象的ccl5+cd8+t細(xì)胞占總cd8+?t細(xì)胞的比例顯著高，則表明cd8+?t細(xì)胞功能顯著低。

7、在一種或多種實(shí)施方式中，所述的分析包括預(yù)后，對(duì)于ccl5+cd8+t細(xì)胞占總cd8+?t細(xì)胞的比例顯著高的對(duì)象，給予增加ccl5非表達(dá)cd8+t細(xì)胞的治療方案。

8、在一種或多種實(shí)施方式中，所述ccl5+cd8+t細(xì)胞占總cd8+?t細(xì)胞的比例顯著高，是指占總cd8+?t細(xì)胞的占比高于10％或更高；較佳地占比高于12％或更高；更佳地占比高于15％或更高；更佳地占比高于18％或更高；進(jìn)一步更佳地占比高于20％或更高。

9、在一種或多種實(shí)施方式中，在年齡相對(duì)高的對(duì)象中，所述表達(dá)ccl5的免疫細(xì)胞群占總cd8+?t細(xì)胞的比例顯著高。

10、在一種或多種實(shí)施方式中，所述年齡相對(duì)高的對(duì)象為人，年齡高于50歲(如50-100歲)，高于55歲，高于60歲，高于65歲，高于70歲，高于75歲，高于80歲，高于85歲，高于90歲或高于95歲。

11、在一種或多種實(shí)施方式中，人50歲年齡與小鼠的10月齡相當(dāng)。

12、在一種或多種實(shí)施方式中，分析測(cè)試對(duì)象的免疫細(xì)胞功能包括：分析測(cè)試對(duì)象的抗腫瘤能力，分析測(cè)試對(duì)象的抗病原體(包括病毒)能力，或分析測(cè)試對(duì)象的t細(xì)胞受體(tcr)的多樣性。

13、在一種或多種實(shí)施方式中，所述表達(dá)ccl5的免疫細(xì)胞群占總cd8+?t細(xì)胞的比例顯著高，則表明測(cè)試對(duì)象的抗腫瘤能力相對(duì)低(顯著低于普通患者，或顯著低于未呈現(xiàn)“ccl5+cd8+t細(xì)胞占總cd8+?t細(xì)胞的比例顯著高”的患者)。

14、在一種或多種實(shí)施方式中，所述表達(dá)ccl5的免疫細(xì)胞群占總cd8+?t細(xì)胞的比例顯著高，則表明測(cè)試對(duì)象的抗病原體能力相對(duì)低(顯著低于普通患者，或顯著低于未呈現(xiàn)“ccl5+cd8+t細(xì)胞占總cd8+?t細(xì)胞的比例顯著高”的患者)。

15、在一種或多種實(shí)施方式中，所述表達(dá)ccl5的免疫細(xì)胞群占總cd8+?t細(xì)胞的比例顯著高，則表明測(cè)試對(duì)象的t細(xì)胞受體(tcr)的多樣性相對(duì)低(顯著低于普通患者，或顯著低于未呈現(xiàn)“ccl5+cd8+t細(xì)胞占總cd8+?t細(xì)胞的比例顯著高”的患者)。

16、在一種或多種實(shí)施方式中，所述ccl5+cd8+t細(xì)胞群通過(guò)特異性結(jié)合或捕獲ccl5+和cd8+的結(jié)合分子(如抗體)或捕獲分子從含t細(xì)胞(t細(xì)胞)的樣本中進(jìn)行分選；所述ccl5-cd8+t細(xì)胞群((tsn)亞群)為cd8+t細(xì)胞群中減去(降低)ccl5+cd8+t細(xì)胞后獲得的細(xì)胞群。

17、在一種或多種實(shí)施方式中，所述含t細(xì)胞的樣本為外周血；更佳地，從離體的外周血中，將所述ccl5+cd8+t細(xì)胞群或ccl5-cd8+t細(xì)胞群進(jìn)行分選和/或測(cè)定比例；更佳地，分選細(xì)胞的方法包括(但不限于)：流式細(xì)胞分選法，免疫磁珠分選法，微流控細(xì)胞分選法，粘附法。

18、在本發(fā)明的另一方面，提供分離或富集細(xì)胞群的方法，所述細(xì)胞群為ccl5+cd8+t細(xì)胞群或ccl5-cd8+t細(xì)胞群；所述方法包括：利用特異性結(jié)合或捕獲ccl5的結(jié)合分子(如抗體)或捕獲分子，將所述ccl5表達(dá)陰性及陽(yáng)性的cd8+t細(xì)胞進(jìn)行分選和/或測(cè)定比例；較佳地，分選細(xì)胞的方法包括(但不限于)：流式細(xì)胞分選法，免疫磁珠分選法，微流控細(xì)胞分選法，粘附法。

19、在本發(fā)明的另一方面，提供一種分離的細(xì)胞群；所述細(xì)胞群為以是否表達(dá)ccl5為標(biāo)記的cd8+t免疫細(xì)胞群；較佳地，所述表達(dá)ccl5的免疫細(xì)胞群為ccl5+cd8+t細(xì)胞群，所述不表達(dá)ccl5的免疫細(xì)胞群為ccl5-cd8+t細(xì)胞群。

20、在一種或多種實(shí)施方式中，所述分離或富集細(xì)胞的方法為不以疾病診斷或治療為直接目的的方法(非診斷性或非治療性的)。

21、在本發(fā)明的另一方面，提供特異性檢測(cè)和分離(分選)ccl5+細(xì)胞的試劑的用途，用于制備分析免疫細(xì)胞功能的試劑；較佳地，所述特異性檢測(cè)和分離(分選)ccl5+細(xì)胞的試劑包括：特異性結(jié)合或捕獲ccl5+結(jié)合分子(如抗體)或捕獲分子(包括界定所述細(xì)胞的表面標(biāo)記的抗體或偶聯(lián)熒光的抗體)。

22、在本發(fā)明的另一方面，提供所述不表達(dá)(包括低表達(dá))ccl5的免疫細(xì)胞群(ccl5-cd8+t細(xì)胞群，或稱為(tsn)亞群)在制備提高免疫細(xì)胞功能(增強(qiáng)免疫)和/或抑制腫瘤的藥物組合物中的應(yīng)用；較佳地，所述的不表達(dá)ccl5的免疫細(xì)胞群在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號(hào)為cctcc?no:c2024243。

23、在本發(fā)明的另一方面，提供一種篩選提高免疫細(xì)胞功能(增強(qiáng)免疫)的物質(zhì)(潛在物質(zhì))的方法，所述方法包括：(1)用候選物質(zhì)處理分離的cd8+t細(xì)胞群(例如其分離自外周血細(xì)胞)；和(2)檢測(cè)所述cd8+t細(xì)胞群中ccl5+cd8+t細(xì)胞群的占比，若其中ccl5+cd8+t細(xì)胞群的占比在統(tǒng)計(jì)學(xué)上降低(如在整個(gè)分離物細(xì)胞群體中，ccl5+cd8+t細(xì)胞群的量占比減少5％以上，10％以上，20％以上，50％以上，80％以上等)，則該候選物質(zhì)是提高免疫細(xì)胞功能(增強(qiáng)免疫)的物質(zhì)(潛在物質(zhì))。

24、在一種或多種實(shí)施方式中，步驟(1)包括：在測(cè)試組中，將候選物質(zhì)加入到所述分離的cd8+t細(xì)胞群中；步驟(2)包括：檢測(cè)所述所述cd8+t細(xì)胞群中ccl5+cd8+t細(xì)胞群的占比；并與對(duì)照組比較，其中所述的對(duì)照組是不添加所述候選物質(zhì)的分離的cd8+t細(xì)胞群；若測(cè)試組中ccl5+cd8+t細(xì)胞群的占比在統(tǒng)計(jì)學(xué)上降低，則該候選物質(zhì)是提高免疫細(xì)胞功能(增強(qiáng)免疫)的物質(zhì)。

25、在一種或多種實(shí)施方式中，所述提高免疫細(xì)胞功能包括：提高抗病原體(包括病毒)感染的能力。

26、在一種或多種實(shí)施方式中，所述提高免疫細(xì)胞功能包括：提高抗腫瘤的能力。

27、在一種或多種實(shí)施方式中，所述的方法還包括：對(duì)獲得的潛在物質(zhì)進(jìn)行進(jìn)一步的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和/或動(dòng)物試驗(yàn)，以從候選物質(zhì)中進(jìn)一步選擇和確定對(duì)于提高免疫細(xì)胞功能(增強(qiáng)免疫)有用的物質(zhì)。

28、在一種或多種實(shí)施方式中，所述的候選物質(zhì)包括小分子化合物或針對(duì)t細(xì)胞設(shè)計(jì)的生物分子。

29、本發(fā)明的其它方面由于本文的公開(kāi)內(nèi)容，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。