本發(fā)明涉及生物檢測(cè)，具體涉及一種心血管標(biāo)志物質(zhì)控品及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、心血管疾病是全球范圍內(nèi)高發(fā)的重大疾病之一，其早期診斷和及時(shí)治療對(duì)于提高患者生存率和生活質(zhì)量至關(guān)重要。心血管標(biāo)志物，如心肌肌鈣蛋白i（ctni）、肌酸激酶同工酶抗原(ck-mb)、肌紅蛋白抗原（myo）、氨基末端腦鈉肽前體抗原(nt-probnp)、腦鈉肽抗原(bnp)、d-二聚體抗原（dd）、心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原（h-fabp）、髓過(guò)氧化物酶抗原(mpo)、脂蛋白磷脂酶a2抗原(lp-pla2)等等，在心血管疾病的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起著重要作用。然而，由于檢測(cè)方法的多樣性和復(fù)雜性，如何確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性成為臨床檢驗(yàn)中的關(guān)鍵問(wèn)題。

2、心肌肌鈣蛋白i(cardiac?troponin?i，ctni)是一種高靈敏度、高特異性的心肌損傷的標(biāo)志物。在人類(lèi)心肌損傷的診斷中，ctni已經(jīng)成為“金標(biāo)準(zhǔn)”之一。與其他指標(biāo)相比，ctni具有在血中出現(xiàn)時(shí)間早、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，且為心肌細(xì)胞所特有的優(yōu)點(diǎn)，所以心肌肌鈣蛋白i在臨床上有著廣泛應(yīng)用的前景。

3、腦鈉肽（brain?natriuretic?peptide，bnp）和氨基末端腦鈉肽前體（(n?terminalpro?b?type?natriuretic?peptide,?nt-probnp）已經(jīng)為各級(jí)醫(yī)院和醫(yī)師廣泛用于臨床實(shí)踐，成為心血管病尤其是心力衰竭診斷十分有用的生物標(biāo)志物。

4、d-二聚體(d-dimer，dd)是交聯(lián)纖維蛋白的特異降解產(chǎn)物之一，分子量大小約為190?kda，在體內(nèi)半衰期>3小時(shí)，主要經(jīng)腎臟排泄。陰性的d-二聚體值對(duì)于肺動(dòng)脈栓塞具有理想的陰性預(yù)告作用，陰性的結(jié)果可以基本排除肺動(dòng)脈栓塞，從而可以減少有創(chuàng)的檢查。

5、髓過(guò)氧化物酶（myeloperoxidase?，mpo）又稱(chēng)為過(guò)氧化酶，是一種重要的含鐵溶酶體，存在于髓系細(xì)胞（主要是中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞）的嗜天青顆粒中，是髓細(xì)胞的特異性標(biāo)志。mpo參與多種疾病的發(fā)生，如：炎癥、多發(fā)性硬化、血管炎和動(dòng)脈粥樣硬化等。

6、脂蛋白磷脂酶a2(lipoprotein-associated?phospholipase?a2，lp-pla2)是磷酯酶a2(phospholipase?a2，pla2)超家族中的一員，由441個(gè)氨基酸殘基組成的一種絲氨酸脂酶，相對(duì)分子質(zhì)量為45.4kd。lp-pla2作為一種新的炎性反應(yīng)標(biāo)志物，在動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，as)的幾個(gè)主要階段中均起著作用。

7、肌酸激酶同工酶（creatine?kinase-mb，ck-mb）測(cè)定是診斷急性心肌梗死(acutemyocardial?infarction，ami)最重要的指標(biāo)之一，有助于ami早期診斷以及對(duì)病情嚴(yán)重程度判斷、預(yù)測(cè)預(yù)后等。

8、心型脂肪酸結(jié)合蛋白（heart?fatty?acid?binding?protein，h-fabp）對(duì)心肌有保護(hù)作用。生理?xiàng)l件下，血漿和尿中不含h-fabp或含量很少，正常人血液中可以檢測(cè)到低濃度的h-fabp。國(guó)內(nèi)外大量研究發(fā)現(xiàn)，在ami早期，由于心肌細(xì)胞對(duì)缺血、缺氧的高度敏感性，動(dòng)員脂肪酸供能，導(dǎo)致心肌細(xì)胞內(nèi)h-fabp迅速升高，而h-fabp相對(duì)分子質(zhì)量小，可快速釋放入血，在ami早期即可檢測(cè)到高水平的血漿h-fabp。

9、肌紅蛋白（myoglobin?，myo）是一種氧結(jié)合血紅素蛋白，其分子量為16.7kd，主要分布于心肌和骨骼肌組織，呈緊密球形。myo對(duì)于ami診斷敏感性為83.3%，特異性為88.6%，陰性預(yù)測(cè)率為99.5%。在acs早期診斷和監(jiān)測(cè)的臨床效用已有大量文獻(xiàn)報(bào)告，myo陰性有助于排除心梗。還可作為心肌損傷復(fù)發(fā)或心肌梗死區(qū)域擴(kuò)大的早期監(jiān)測(cè)指標(biāo)。

10、隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)發(fā)展迅速，上述項(xiàng)目應(yīng)用范圍愈加廣泛，在應(yīng)用過(guò)程中也存在著一些問(wèn)題，如尚未按要求進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制，導(dǎo)致患者檢驗(yàn)結(jié)果偏差大。

11、基于上述項(xiàng)目在臨床上存在大量需求，并且多數(shù)情況下會(huì)進(jìn)行組合檢測(cè)，需要同時(shí)對(duì)上述項(xiàng)目進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制，迫切需要穩(wěn)定和性能優(yōu)良的復(fù)合質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)量控制。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供一種心血管標(biāo)志物質(zhì)控品及其制備方法，所述的心血管標(biāo)志物質(zhì)控品均勻性和穩(wěn)定性良好，具有良好的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性和復(fù)溶穩(wěn)定性，可作為第三方質(zhì)控品對(duì)心血管疾病篩查和輔助診斷測(cè)量系統(tǒng)的室內(nèi)、室間質(zhì)量控制。

2、本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題采用以下技術(shù)方案：

3、一種心血管標(biāo)志物質(zhì)控品，包括血清基質(zhì)、抗原、防腐劑和穩(wěn)定劑；

4、所述抗原包括心肌肌鈣蛋白i抗原、肌酸激酶同工酶抗原、肌紅蛋白抗原、氨基末端腦鈉肽前體抗原、腦鈉肽抗原、d-二聚體抗原、心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原、髓過(guò)氧化物酶抗原和脂蛋白磷脂酶a2抗原；

5、所述穩(wěn)定劑包括d-海藻糖、蔗糖、甘氨酸、肌醇、聚乙二醇中的至少一種。

6、本發(fā)明的發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，抗原的穩(wěn)定性較差，尤其是肌紅蛋白抗原（myo）、肌酸激酶同工酶抗原(ck-mb)、心肌肌鈣蛋白i抗原(ctni)非常不穩(wěn)定，導(dǎo)致品質(zhì)不合格，無(wú)法長(zhǎng)期保存。

7、本發(fā)明所述的心血管標(biāo)志物質(zhì)控品包含的檢測(cè)項(xiàng)目全面，可覆蓋全部心血管疾病檢測(cè)項(xiàng)目（包括所涉及心力衰竭、肺動(dòng)脈栓塞、血管炎和動(dòng)脈粥樣硬化、心肌損傷、心肌梗死項(xiàng)目）。本發(fā)明所述的質(zhì)控品均勻性和穩(wěn)定性良好，具有良好的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性和復(fù)溶穩(wěn)定性，可作為第三方質(zhì)控品對(duì)心血管疾病篩查和輔助診斷測(cè)量系統(tǒng)的室內(nèi)、室間質(zhì)量控制。

8、在上述的抗原體系和血清體系中加入所述的穩(wěn)定劑，有效的提高了?質(zhì)控品的穩(wěn)定性和均一性。

9、作為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，所述心肌肌鈣蛋白i抗原的濃度為0.5~20ng/ml；

10、所述肌酸激酶同工酶抗原的濃度為10~50ng/ml；

11、所述肌紅蛋白抗原的濃度為50~250ng/ml；

12、所述氨基末端腦鈉肽前體抗原的濃度為200~25000pg/ml；

13、所述腦鈉肽抗原的濃度為100~1000pg/ml；

14、所述d-二聚體抗原的濃度為0.2~2mg/l；

15、所述心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原的濃度為10~50ng/ml；

16、所述髓過(guò)氧化物酶抗原的濃度為200-2000?pmol/l；

17、所述脂蛋白磷脂酶a2抗原的濃度為100~500ng/ml。

18、作為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，所述穩(wěn)定劑的濃度為0.1~20g/l。

19、作為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，所述穩(wěn)定劑包括d-海藻糖、肌醇、蔗糖和甘氨酸，所述d-海藻糖的濃度為3~12g/l，所述肌醇的濃度為1~2g/l，所述蔗糖的濃度為0~0.5g/l，所述甘氨酸的濃度為0~0.5g/l。

20、作為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，所述防腐劑proclin300、青霉素、鏈霉素、慶大霉素、nan3中的至少一種。

21、作為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，所述防腐劑的濃度為0.1~0.5wt%。

22、作為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，所述血清基質(zhì)包括人血清、動(dòng)物血清中的至少一種。

23、本發(fā)明還提供了一種心血管標(biāo)志物質(zhì)控品的制備方法，包括以下步驟：

24、（1）選取外觀澄清無(wú)沉淀的血清基質(zhì)；

25、（2）向血清基質(zhì)中加入心肌肌鈣蛋白i抗原至設(shè)定濃度，靜置；加入肌酸激酶同工酶抗原、肌紅蛋白抗原、氨基末端腦鈉肽前體抗原、腦鈉肽抗原、d-二聚體抗原、心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原、髓過(guò)氧化物酶抗原和脂蛋白磷脂酶a2抗原至設(shè)定濃度；

26、（3）再加入穩(wěn)定劑、防腐劑，攪拌均勻，靜置；

27、（4）凍干，得到心血管標(biāo)志物質(zhì)控品。

28、作為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，所述步驟（2）中靜置溫度為20~40℃，靜置時(shí)間為24~48h。

29、作為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，所述步驟（3）中靜置溫度為2~8℃，靜置時(shí)間為12~24h。

30、本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明所述的心血管標(biāo)志物質(zhì)控品包含的檢測(cè)項(xiàng)目全面，可覆蓋全部心血管疾病檢測(cè)項(xiàng)目（包括所涉及心力衰竭、肺動(dòng)脈栓塞、血管炎和動(dòng)脈粥樣硬化、心肌損傷、心肌梗死項(xiàng)目）。本發(fā)明所述的質(zhì)控品均勻性和穩(wěn)定性良好，具有良好的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性和復(fù)溶穩(wěn)定性，可作為第三方質(zhì)控品對(duì)心血管疾病篩查和輔助診斷測(cè)量系統(tǒng)的室內(nèi)、室間質(zhì)量控制。