本發(fā)明涉及耳石樣本制備，具體地說(shuō)，涉及一種淡水魚(yú)類耳石樣本制備的方法。

背景技術(shù)：

1、魚(yú)類耳石是沉積在真硬骨魚(yú)內(nèi)耳中的一種硬質(zhì)結(jié)構(gòu)，分為三對(duì)，包括星耳石、微耳石、矢耳石。主要組成成分為碳酸鈣，也包各種微量化學(xué)元素和有機(jī)質(zhì)，在平衡和聽(tīng)覺(jué)方面發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。

2、由于耳石生長(zhǎng)具有日節(jié)律和年節(jié)律性，且本身為惰性的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，沉積在耳石中微量化學(xué)元素具備良好的穩(wěn)定性，故是魚(yú)類年齡鑒定和棲息地反演的有力工具。目前通過(guò)耳石與魚(yú)類生態(tài)學(xué)的結(jié)合有著諸多研究方向，如產(chǎn)卵場(chǎng)和育幼場(chǎng)確定、洄游路徑、棲息地利用等。

3、在利用耳石進(jìn)行上述研究方向的過(guò)程中，研究者一般需要通過(guò)制備特定耳石樣本，獲得清晰、平整的耳石日輪或年輪剖面，以便進(jìn)行后續(xù)分析，然而耳石樣本制作過(guò)程比較復(fù)雜。不同耳淡水魚(yú)類耳石具有不同特點(diǎn)，如長(zhǎng)度、寬度以及厚度等，因此耳石樣本制作方法也存在區(qū)別。目前常用的有采用指甲油、硬化樹(shù)膠、熱熔膠等固化材料包埋耳石然后磨片的方法，整個(gè)過(guò)程比較復(fù)雜，耗時(shí)較長(zhǎng)，效果不夠理想。以上方法往往存在以下問(wèn)題：(1)采用耳石切片制備的方法存在固化時(shí)間長(zhǎng)、打磨不易拿捏、操作不便易造成磨損和損壞的問(wèn)題；(2)硬化樹(shù)脂和熱熔膠等固化材料在制備過(guò)程中極易產(chǎn)生氣泡，在凝固后影響樣本觀察與測(cè)樣；(3)以上方法大多采用固化直接打磨，過(guò)程費(fèi)時(shí)費(fèi)力，延長(zhǎng)制備時(shí)間。(4)同時(shí)之前方法本身限制，并不能廣泛適合大多數(shù)淡水魚(yú)類耳石制備，不適宜大范圍推廣。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的內(nèi)容是提供一種淡水魚(yú)類耳石樣本制備的方法，其能夠解決現(xiàn)有耳石樣品制備使用方法單一、耗時(shí)較長(zhǎng)、和不易操作和應(yīng)用范圍小的問(wèn)題。

2、根據(jù)本發(fā)明的一種淡水魚(yú)類耳石樣本制備的方法，其包括以下步驟：

3、一、耳石取樣；

4、二、耳石清洗；

5、三、耳石稱重；

6、四、耳石固定；

7、首先進(jìn)行樹(shù)脂液的配制，固化劑和樹(shù)脂按照10：3的比例進(jìn)行配置，配制的溶液總量為耳石制備數(shù)量乘以2克；溶液配制完成后，用鑷子夾取晾干后的耳石以凸面朝下，凹面朝上的位置放置在方形硅膠模具內(nèi)，再將配制好的樹(shù)脂按照每個(gè)模具2克溶液進(jìn)行澆筑；

8、五、抽取真空并硬化；

9、將包埋好的耳石模具放入真空泵中，在-0.15～0.1兆帕的大氣壓強(qiáng)下，對(duì)溶液進(jìn)行1-2分鐘抽氣，去除溶液中的氣泡；隨后取出膜具，用鑷子小心調(diào)整耳石至原位，放置在恒溫加熱臺(tái)上進(jìn)行30分鐘左右加熱進(jìn)一步去除氣泡以及加速凝固后，再在室溫下放置2-4小時(shí)等待硬化；

10、六、耳石切割；

11、將硬化之后的耳石從方形塑料模具中取出，固定在低速高密切割機(jī)上，在靠近耳石尖端2mm垂直邊緣處對(duì)硬化后的樹(shù)脂進(jìn)行橫切或縱切，待切割完成，取下樣本，在拋光機(jī)上進(jìn)行打磨，每5-10秒在暗場(chǎng)顯微鏡下進(jìn)行觀察，直至觀察到耳石的核心；隨后再次將打磨好的耳石固定在切割機(jī)上分別沿著未打磨兩側(cè)進(jìn)行切割，得到小切片；

12、七、二次固定與切割；

13、具體為：

14、a、按照步驟四繼續(xù)配置溶液；

15、b、將得到的耳石切片按照耳石置于頂端且打磨面向下的方向豎直放入圓柱形硅膠模具內(nèi)，使耳石切片保持在模具中心位置；

16、c、根據(jù)耳石編號(hào)打印序號(hào)標(biāo)簽，反面朝上放入硅膠模具底部中心；

17、d、按照步驟五進(jìn)行真空抽取，去除溶液中氣泡，放置硬化得到圓柱狀樹(shù)脂；

18、e、從模具中取出硬化后耳石樣本，再次固定在切割儀上，在未打磨耳石端2mm垂直邊緣處進(jìn)行切割，得到一塊高度比原本樹(shù)脂小的圓柱狀耳石樹(shù)脂樣本；

19、八、耳石打磨；

20、九、耳石拋光；

21、十、耳石染色。

22、作為優(yōu)選，步驟一中，使用手術(shù)剪和鑷子將魚(yú)類頭部中的耳石取出，對(duì)魚(yú)類耳石表面進(jìn)行初步清理，去除血漬、包膜、粘液以及其他污垢，放入耳石管保存。

23、作為優(yōu)選，步驟二中，將耳石從管中取出，放進(jìn)超聲波清洗機(jī)中進(jìn)行3-5分鐘的清洗，再用鑷子取出，用吸水紙對(duì)耳石表面水分進(jìn)行吸取，放置在常溫下進(jìn)行晾干，得到干燥、潔凈的魚(yú)類耳石。

24、作為優(yōu)選，步驟三中，將清洗晾干后的耳石按照左右順序放置在電子天平上進(jìn)行重量測(cè)量，并記錄保存數(shù)據(jù)，以便后續(xù)進(jìn)行年齡退算使用。

25、作為優(yōu)選，步驟八中，將切割完成的柱狀耳石樣本先用1000#砂紙打磨，在暗場(chǎng)顯微鏡下觀察，直至耳石邊緣與核心清晰，但核心不暴露，然后再用3000—5000#砂紙進(jìn)行打磨，至核心完全暴露，耳石整體年輪清晰，核心明顯，停止打磨；打磨中每3-5秒通過(guò)電子顯微鏡進(jìn)行觀察，得到耳石樣本整體高1厘米，耳石厚約0.06mm。

26、作為優(yōu)選，步驟九中，將得到的圓柱耳石樣本表面擦拭干凈，隨后使用金剛石懸浮拋光液在金相拋光機(jī)上進(jìn)行拋光打磨至耳石樣本上端面呈現(xiàn)鏡面反光，即可得到能夠長(zhǎng)期保存的魚(yú)類耳石樣本，放入樣本盒中。

27、作為優(yōu)選，步驟十中，首先進(jìn)行蝕刻準(zhǔn)備，準(zhǔn)備1％的鹽酸或3-5％的edta作為蝕刻劑，用于去除耳石表面的雜質(zhì)，為染色做準(zhǔn)備；待蝕刻完成后，立即將耳石從蝕刻劑中取出，并用足夠的水清洗，以去除殘留的化學(xué)試劑；清洗后，使用烘干機(jī)將耳石烘干，避免使用紙巾或其他材料擦拭，以防止污染或損傷；在耳石表面干燥后，準(zhǔn)備1％甲苯胺藍(lán)作為染色劑，用于染色耳石，以便于觀察其內(nèi)部結(jié)構(gòu)；染色完成后，將耳石從染色劑中取出，并用水沖洗，以去除多余的染色劑；最后，再次使用烘干機(jī)將染色后的耳石烘干，同樣避免使用紙巾或其他材料擦拭。

28、作為優(yōu)選，如果選擇1％鹽酸蝕刻，將耳石浸入鹽酸中1分鐘，后續(xù)染色過(guò)程中，將耳石浸入甲苯胺藍(lán)中，染色時(shí)間為30-120分鐘；如果選擇3-5％edta，將耳石浸入edta中3分鐘，后續(xù)染色過(guò)程中，將耳石浸入甲苯胺藍(lán)中，染色時(shí)間則為5-30分鐘。

29、本發(fā)明的有益效果如下：

30、(1)本發(fā)明采用固定的樹(shù)脂材料和加熱儀器能縮短硬化時(shí)間，固化時(shí)間短，而且打磨易拿捏、操作方便，不易造成磨損和損壞的問(wèn)題。

31、(2)本發(fā)明的硬化樹(shù)脂和熱熔膠等固化材料在制備過(guò)程中不易產(chǎn)生氣泡，能快速抽取真空去除樹(shù)脂中的氣泡，抽取真空時(shí)間短，方便后續(xù)觀察。

32、(3)本發(fā)明使用切割與二次切割方法提高制備速度，減少工作量；在樣本中添加紙質(zhì)標(biāo)簽，防止樣品混淆，且保證了標(biāo)簽長(zhǎng)期保存。二次固定而成的圓柱狀樣本操作方便，交代粘貼方法使得模具中樹(shù)脂不易溢出損失；樣本不易損壞，保存時(shí)間極長(zhǎng)。

33、(4)本發(fā)明提供的方法能廣泛適合大多數(shù)淡水魚(yú)類耳石制備，適宜大范圍推廣。

34、(5)本發(fā)明在原本耳石樣本完成測(cè)樣之后對(duì)耳石進(jìn)行蝕刻染色處理能夠明晰耳石內(nèi)部結(jié)構(gòu)，準(zhǔn)確分辨耳石年輪，能為后續(xù)年齡鑒定以及相關(guān)研究提供進(jìn)一步數(shù)據(jù)參考。

技術(shù)特征：

1.一種淡水魚(yú)類耳石樣本制備的方法，其特征在于：包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種淡水魚(yú)類耳石樣本制備的方法，其特征在于：步驟一中，使用手術(shù)剪和鑷子將魚(yú)類頭部中的耳石取出，對(duì)魚(yú)類耳石表面進(jìn)行初步清理，去除血漬、包膜、粘液以及其他污垢，放入耳石管保存。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種淡水魚(yú)類耳石樣本制備的方法，其特征在于：步驟二中，將耳石從管中取出，放進(jìn)超聲波清洗機(jī)中進(jìn)行3-5分鐘的清洗，再用鑷子取出，用吸水紙對(duì)耳石表面水分進(jìn)行吸取，放置在常溫下進(jìn)行晾干，得到干燥、潔凈的魚(yú)類耳石。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種淡水魚(yú)類耳石樣本制備的方法，其特征在于：步驟三中，將清洗晾干后的耳石按照左右順序放置在電子天平上進(jìn)行重量測(cè)量，并記錄保存數(shù)據(jù)，以便后續(xù)進(jìn)行年齡退算使用。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種淡水魚(yú)類耳石樣本制備的方法，其特征在于：步驟八中，將切割完成的柱狀耳石樣本先用1000#砂紙打磨，在暗場(chǎng)顯微鏡下觀察，直至耳石邊緣與核心清晰，但核心不暴露，然后再用3000—5000#砂紙進(jìn)行打磨，至核心完全暴露，耳石整體年輪清晰，核心明顯，停止打磨；打磨中每3-5秒通過(guò)電子顯微鏡進(jìn)行觀察，得到耳石樣本整體高1厘米，耳石厚0.06mm。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種淡水魚(yú)類耳石樣本制備的方法，其特征在于：步驟九中，將得到的圓柱耳石樣本表面擦拭干凈，隨后使用金剛石懸浮拋光液在金相拋光機(jī)上進(jìn)行拋光打磨至耳石樣本上端面呈現(xiàn)鏡面反光，即可得到能夠長(zhǎng)期保存的魚(yú)類耳石樣本，放入樣本盒中。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種淡水魚(yú)類耳石樣本制備的方法，其特征在于：步驟十中，首先進(jìn)行蝕刻準(zhǔn)備，準(zhǔn)備1％的鹽酸或3-5％的edta作為蝕刻劑，用于去除耳石表面的雜質(zhì)，為染色做準(zhǔn)備；待蝕刻完成后，立即將耳石從蝕刻劑中取出，并用足夠的水清洗，以去除殘留的化學(xué)試劑；清洗后，使用烘干機(jī)將耳石烘干，避免使用紙巾或其他材料擦拭，以防止污染或損傷；在耳石表面干燥后，準(zhǔn)備1％甲苯胺藍(lán)作為染色劑，用于染色耳石，以便于觀察其內(nèi)部結(jié)構(gòu)；染色完成后，將耳石從染色劑中取出，并用水沖洗，以去除多余的染色劑；最后，再次使用烘干機(jī)將染色后的耳石烘干，同樣避免使用紙巾或其他材料擦拭。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種淡水魚(yú)類耳石樣本制備的方法，其特征在于：如果選擇1％鹽酸蝕刻，將耳石浸入鹽酸中1分鐘，后續(xù)染色過(guò)程中，將耳石浸入甲苯胺藍(lán)中，染色時(shí)間為30-120分鐘；如果選擇3-5％edta，將耳石浸入edta中3分鐘，后續(xù)染色過(guò)程中，將耳石浸入甲苯胺藍(lán)中，染色時(shí)間則為5-30分鐘。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及耳石樣本制備技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種淡水魚(yú)類耳石樣本制備的方法，其包括以下步驟：一、耳石取樣；二、耳石清洗；三、耳石稱重；四、耳石固定；五、抽取真空并硬化；六、耳石切割；七、二次固定與切割；八、耳石打磨；九、耳石拋光；十、耳石染色。本發(fā)明能較佳地制備淡水魚(yú)類耳石樣本。

技術(shù)研發(fā)人員：程廣杰,丁城志,熊合勇,張信,唐邦利,李政易,趙永濤,羅樂(lè),張文武,陶捐,彭李,陳愛(ài)國(guó),李威
受保護(hù)的技術(shù)使用者：云南大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30