本發(fā)明屬于醫(yī)藥分析，涉及一種藥物含量檢測(cè)方法及試劑盒，特別是涉及一種使用高效液相色譜檢測(cè)注射用磷霉素鈉含量的方法及試劑盒。

背景技術(shù)：

1、磷霉素(fosfomycin)分子量小，在結(jié)構(gòu)上屬于磷酸衍生物，具有不同于其他抗生素的結(jié)構(gòu)。磷霉素本身為一種游離酸，其藥用品主要有磷霉素鈣鹽和磷霉素鈉鹽兩種形式，其中磷霉素鈣鹽主要制成口服制劑產(chǎn)品，而磷霉素鈉鹽主要制成注射制劑產(chǎn)品。

2、《中國(guó)藥典(二部)》(2020版)、《日本藥典》和《韓國(guó)藥典》均收載了磷霉素鈉及注射用磷霉素鈉，《歐洲藥典》和《英國(guó)藥典》收載了磷霉素鈉，但所述文獻(xiàn)資料收載的含量測(cè)定方法均為微生物檢定法和滴定法，無(wú)法滿足高通量、自動(dòng)化、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)周期短、重現(xiàn)性好、精密度高等檢測(cè)需求。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員在對(duì)磷霉素鈉相關(guān)制劑進(jìn)行臨床研究時(shí)，無(wú)法快速準(zhǔn)確且高效地獲得可參考的磷霉素含量數(shù)據(jù)，從而增加了研發(fā)的經(jīng)濟(jì)成本和時(shí)間成本。

3、鑒于此，開發(fā)一種方便快捷且準(zhǔn)確高效地檢測(cè)注射用磷霉素鈉含量的方法，對(duì)于磷霉素鈉相關(guān)制劑的臨床研究具有非常重要的意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種方便快捷且準(zhǔn)確高效地使用高效液相色譜檢測(cè)注射用磷霉素鈉((-)-(1r,2s)-1,2-環(huán)氧丙基膦酸二鈉鹽，其具體結(jié)構(gòu)式見(jiàn)式(i))含量的方法。

2、

3、本發(fā)明的目的通過(guò)以下方案實(shí)現(xiàn)：

4、一種使用高效液相色譜檢測(cè)注射用磷霉素鈉含量的方法，其特征在于，所述方法包括：

5、(1)色譜條件選擇

6、采用以十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，色譜柱柱溫為25-35℃；以甲酸水溶液為流動(dòng)相，其中所述流動(dòng)相的甲酸含量基于甲酸水溶液的總質(zhì)量計(jì)為0.18-0.3％，流動(dòng)相流速為0.4-0.6ml/min，等度洗脫；

7、(2)溶液配制

8、對(duì)照品貯備液制備：

9、準(zhǔn)備磷霉素鈉對(duì)照品，溶于水中，并用水稀釋至磷霉素濃度為5mg/ml；

10、對(duì)照品溶液制備：

11、移取不同量的對(duì)照品貯備液，分別置于定容容器中，用水稀釋定容，得到具有不同磷霉素濃度的對(duì)照品溶液；

12、供試品溶液制備：

13、準(zhǔn)備待測(cè)定的注射用磷霉素鈉供試品，溶于水中，并用水稀釋至磷霉素濃度為0.45-0.55mg/ml；

14、(3)測(cè)定方法

15、量取相同體積的供試品溶液和具有不同磷霉素濃度的對(duì)照品溶液，分別注入液相色譜儀，按照色譜條件記錄色譜圖，對(duì)對(duì)照品溶液的磷霉素濃度和所測(cè)得的磷霉素峰面積進(jìn)行線性回歸分析，并根據(jù)以下公式計(jì)算得到磷霉素含量：

16、

17、其中：

18、au為供試品溶液中磷霉素峰的峰面積；

19、cu為供試品溶液中磷霉素的理論濃度，以mg/ml計(jì)；

20、截距為對(duì)照品溶液獲得的線性回歸方程的截距；

21、斜率為對(duì)照品溶液獲得的線性回歸方程的斜率。

22、在本發(fā)明的方法中，使用的檢測(cè)器為電噴霧檢測(cè)器(cad)，霧化器溫度為35℃。

23、此外，本發(fā)明還涉及一種試劑盒，其包含用于本發(fā)明方法的色譜柱和流動(dòng)相。

24、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的方法的優(yōu)點(diǎn)和有益效果在于：

25、本發(fā)明的方法通過(guò)高效液相色譜并采用電噴霧檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)結(jié)合線性回歸分析和特定公式，操作簡(jiǎn)單，專屬性好，可以方便快捷且準(zhǔn)確高效地測(cè)得所需的磷霉素含量，能夠滿足日益增長(zhǎng)的高標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)需求，例如高通量、自動(dòng)化、檢測(cè)周期短、重現(xiàn)性好、精密度高等，非常適用于注射用磷霉素鈉的配伍實(shí)驗(yàn)樣品檢測(cè)，為磷霉素鈉相關(guān)制劑的臨床研究提供有價(jià)值且可參考的磷霉素含量數(shù)據(jù)，從而節(jié)約制劑研發(fā)的成本。

技術(shù)特征：

1.一種使用高效液相色譜檢測(cè)注射用磷霉素鈉含量的方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法使用的檢測(cè)器為電噴霧檢測(cè)器。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述以十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱選自waters?t3或效能相當(dāng)?shù)纳V柱。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷霉素鈉對(duì)照品溶液中磷霉素的濃度為0.01-0.85mg/ml，優(yōu)選0.02-0.80mg/ml，特別是0.05-0.75mg/ml。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述流動(dòng)相的甲酸含量基于甲酸水溶液的總質(zhì)量計(jì)為0.24％。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相的流速為0.45-0.55ml/min，例如0.45ml/min、0.5ml/min或0.55ml/min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷霉素鈉供試品溶液中磷霉素的濃度為0.5mg/ml；優(yōu)選地，所述磷霉素鈉供試品溶液和對(duì)照品溶液的進(jìn)樣體積為5-40μl，優(yōu)選10-30μl，更優(yōu)選15-25μl。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，還使用空白輔料溶液作為陰性對(duì)照液用于驗(yàn)證方法的專屬性，其中所述空白輔料溶液中枸櫞酸的濃度為20-40μg/ml，優(yōu)選25-35μg/ml，特別是30μg/ml。

9.一種試劑盒，其包含用于權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的方法的色譜柱和流動(dòng)相。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒，其中所述色譜柱是以十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，所述流動(dòng)相為甲酸水溶液，其中所述流動(dòng)相的甲酸含量基于甲酸水溶液的總質(zhì)量計(jì)為0.24％。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種使用高效液相色譜檢測(cè)注射用磷霉素鈉含量的方法。所述方法使用電噴霧檢測(cè)器作為檢測(cè)器，并采用以十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱以及甲酸水溶液作為流動(dòng)相，同時(shí)結(jié)合線性回歸分析和特定的計(jì)算公式得到磷霉素含量。本發(fā)明還涉及包含用于本發(fā)明方法的色譜柱和流動(dòng)相的試劑盒。本發(fā)明的方法能夠方便快捷且準(zhǔn)確高效地測(cè)得所需的磷霉素含量，操作簡(jiǎn)單，專屬性、重現(xiàn)性和精密度良好，非常適用于注射用磷霉素鈉的配伍實(shí)驗(yàn)樣品檢測(cè)，能夠?yàn)榱酌顾剽c相關(guān)制劑的臨床研究提供有價(jià)值且可參考的磷霉素含量數(shù)據(jù)。

技術(shù)研發(fā)人員：姚柳端,林詩(shī)琪,馮勝昔,黎曉麗,林立東,陳大嫻
受保護(hù)的技術(shù)使用者：廣州艾奇西醫(yī)藥科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/26