本發(fā)明屬于血液檢測領(lǐng)域，涉及一種血清中尿素氮肌酐含量的測定方法，尤其涉及一種血清中尿素氮肌酐含量近紅外光譜測定方法。

背景技術(shù)：

尿素是人體蛋白質(zhì)代謝的主要終末產(chǎn)物，肌酐是肌肉在人體內(nèi)代謝的產(chǎn)物，尿素和肌酐均主要由腎小球濾過排出體外，故可用作腎小球濾過功能的診斷和過篩指標(biāo)，當(dāng)腎小球濾過功能減低時，血肌酐和尿素氮因滯留而增高。

目前，臨床實驗室血和尿中肌酐的測定常用酶法或堿性苦味酸法(jaffe法)。其中，jaffe法雖然試劑較便宜，重復(fù)性、準(zhǔn)確性也較好，但易受血清中其他假性肌酐物質(zhì)的干擾，尤其是當(dāng)血清膽紅素值≥165.5μmol/l時開始出現(xiàn)負(fù)偏差。此外，頭孢類和維生素c及多巴胺等藥物也使其結(jié)果出現(xiàn)較大干擾。

酶法利用肌酐在肌酐酰氨基水解酶、肌酸脒基水解酶、肌氨酸氧化酶、過氧化物酶等酶及顯色劑和水、氧的共同作用下生成醌亞胺(紅色)，在505nm波長下測定其吸光度a，其a值的大小和樣品中肌酐的含量成正比。由于酶本身具有的特性，肌酐酰氨基水解酐在反應(yīng)中僅針對肌酐而不受其他物質(zhì)的干擾，這使得測定結(jié)果接近于真實值。

血清(或血漿)中的尿素氮，在尿素氮試劑的酸性環(huán)境中與二乙酰-肟(dam)共沸后，可縮合成一紅色化合物，稱為fearon反應(yīng)。其顏色的深淺與血清(或血漿)中尿素氮的含量成正比，與同樣處理的尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液比色，即可測算出血清(或血漿)中尿素氮的含量。由于此方法干擾性大，目前臨床實驗室多采用尿素酶偶聯(lián)法，用尿素酶分解尿素產(chǎn)生氨，氨在谷氨酸脫氫酶的作用下使nadh氧化為nad⁺時，通過340nm吸光度的降低值可計算出尿素氮含量。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種血清中尿素氮肌酐含量近紅外光譜測定方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種血清中尿素氮肌酐含量近紅外光譜測定方法，步驟一、配制若干個含有不同尿素氮含量和肌酐含量的血清標(biāo)定液；步驟二、用近紅外光譜儀對每個血清標(biāo)定液進行光譜采集；步驟三、根據(jù)血清標(biāo)定液的近紅外光譜以及尿素氮和肌酐的含量，分別建立尿素氮鑒別模型和肌酐鑒別模型；步驟四、用近紅外光譜儀對待檢測的血清樣品進行光譜采集，將血清樣品的光譜分別與尿素氮鑒別模型和肌酐鑒別模型對比，獲得血清樣品中的尿素氮含量和肌酐含量。

其中，步驟一中，血清標(biāo)定液是指已知其尿素氮含量和肌酐含量的血清樣品，若干個血清樣品之間尿素氮含量彼此不同，若干個血清樣品之間肌酐含量彼此不同。同時，血清標(biāo)定液的數(shù)量需滿足建立模型的要求。

步驟三中，尿素氮鑒別模型是指血清標(biāo)定液的光譜與血清標(biāo)定液中尿素氮含量之間的對應(yīng)關(guān)系，肌酐鑒別模型是指血清標(biāo)定液的光譜與血清標(biāo)定液中肌酐含量之間的對應(yīng)關(guān)系。

進一步，本發(fā)明提供一種血清中尿素氮肌酐含量近紅外光譜測定方法，還可以具有這樣的特征：其中，步驟一是采用生化分析儀或檢測試劑盒測定血清中的尿素氮含量和肌酐含量，并配制出不同尿素氮含量和肌酐含量的血清標(biāo)定液。

其中，上述血清可以為采集而來的多份血清，用以配制血清標(biāo)定液。生化分析儀是指可檢測血液中尿素氮和肌酐含量的儀器，檢測試劑盒是指市售的可檢測血液中尿素氮和肌酐含量的產(chǎn)品。

進一步，本發(fā)明提供一種血清中尿素氮肌酐含量近紅外光譜測定方法，還可以具有這樣的特征：其中，步驟二和步驟四中，使用近紅外光譜儀檢測血清標(biāo)定液和血清樣品時，還采用配合近紅外光譜儀的液體檢測裝置；液體檢測裝置包括通光孔、半透半反鏡片和樣品通道探測器；通光孔、半透半反鏡片和樣品通道探測器設(shè)于同一直線上，形成樣品測試光路。

進一步，本發(fā)明提供一種血清中尿素氮肌酐含量近紅外光譜測定方法，還可以具有這樣的特征：其中，液體檢測裝置還包括空氣通道探測器；空氣通道探測器設(shè)于半透半反鏡片的一側(cè)，與樣品測試光路垂直的方向，用于接收半透半反鏡片的反射光。

進一步，本發(fā)明提供一種血清中尿素氮肌酐含量近紅外光譜測定方法，還可以具有這樣的特征：其中，液體檢測裝置還包括樣品試管；樣品試管放置在半透半反鏡片和樣品通道探測器之間，位于樣品測試光路上；進行近紅外光譜采集時，血清標(biāo)定液或待檢測的血清樣品均放入樣品試管中。

檢測時，近紅外光線通過通光孔，射至半透半反鏡片上，一部分近紅外光線由半透半反鏡片反射進入空氣通道探測器；另一部分近紅外光線透過半透半反鏡片照射樣品試管，透過樣品試管及其內(nèi)部的測試液體(血清標(biāo)定液或血清樣品)射入樣品通道探測器，光線在透過測試液體時發(fā)生吸收現(xiàn)象。

進一步，本發(fā)明提供一種血清中尿素氮肌酐含量近紅外光譜測定方法，還可以具有這樣的特征：其中，樣品試管呈長方體，測試光線與樣品試管的管壁垂直。

進一步，本發(fā)明提供一種血清中尿素氮肌酐含量近紅外光譜測定方法，還可以具有這樣的特征：其中，若干個血清標(biāo)定液的尿素氮含量的范圍為2-7mmol/l、肌酐含量的范圍為20-200umol/l。

進一步，本發(fā)明提供一種血清中尿素氮肌酐含量近紅外光譜測定方法，還可以具有這樣的特征：其中，血清標(biāo)定液的數(shù)量至少為30個。

此外，步驟一還可以采用尿素氮肌酐雙項定量檢測方法測定血清中的尿素氮含量和肌酐含量，以配制出若干個含有不同尿素氮含量和肌酐含量的血清標(biāo)定液。

上述尿素氮肌酐雙項定量檢測方法的具體步驟為：步驟ⅰ、在待檢測尿素氮和肌酐含量的血清中取出兩份相同的血清。步驟ⅱ、將試劑a和試劑b同時分別加入到兩份血清中，混合均勻，并于36～38℃溫浴3-6min。試劑a由磷酸鹽緩沖液30～70nmol/l、尿素酶4000～6000u/l、谷氨酸脫氫酶8000～10000u/l、α-酮戊二酸140～180nmol/l、nadh2.0～4.0nmol/l、防腐劑150～250μl/l混合制成。試劑b由磷酸鹽緩沖液30～70nmol/l、尿素酶4000～6000u/l、谷氨酸脫氫酶8000～10000u/l、α-酮戊二酸140～180nmol/l、nadh2.0～4.0nmol/l、防腐劑150～250μl/l、肌酐酰氨基水解酶5～7ku/l、肌酸脒基水解酶5～17ku/l混合制成。一份血清與試劑a的體積比為1:70～80；一份血清與試劑b的體積比為1:70～80。步驟ⅲ、在340nm波長處測量試劑a和血清的混合液中nadh的吸光度下降速率，并與相同處理的尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液比較，計算獲得血清中尿素氮的含量；步驟ⅳ、在340nm波長處測量試劑b和血清的混合液中nadh的吸光度下降速率，并與相同處理的尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液比較，計算獲得血清中尿素氮和肌酐的總含量，再減去步驟ⅲ獲得的尿素含量，得到血清中肌酐的含量。

其中，“與相同處理的尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液比較”是指：配置尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液，加入試劑a(b)，混合均勻并溫浴，其中，尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液與一份血清等量，試劑a(b)的加入量與其加入至血清中的量相等，溫浴溫度和時間也與血清的處理條件相同。然后，在340nm波長處測量試劑a(b)和尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液的混合液中nadh的吸光度下降速率，由于尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液的濃度已知，通過計算可知血清中尿素氮(尿素氮和肌酐)的含量。并且，尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液可以與樣品同時處理，以使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確并節(jié)省檢測時間。

本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明提供一種血清中尿素氮肌酐含量近紅外光譜測定方法，采集若干個不同尿素氮含量和肌酐含量的血清的近紅外光譜，分別建立尿素氮含量與光譜相對應(yīng)的鑒別模型、和肌酐含量與光譜相對應(yīng)的鑒別模型，當(dāng)需要檢測其他血清樣品的尿素氮含量時，僅需采集該血清樣品的近紅外光譜，并將其與上述鑒別模型分別對比，即可獲得該血清樣品中的尿素氮含量和肌酐含量。與傳統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法相比，首先，本方法的待檢測血清樣品無需預(yù)處理，不使用任何化學(xué)試劑，無環(huán)境污染、成本低；其次，檢測所需的血清樣品量少，且每份樣品的檢測時間約為近紅外光譜的采集時間，檢測時間短、效率高；此外，本方法避免了人為操作的誤差，提高檢測準(zhǔn)確率。

具體實施方式

實施例一

本實施例提供一種血清中尿素氮肌酐含量近紅外光譜測定方法：

步驟一、采用生化分析儀或檢測試劑盒測定血清中的尿素氮含量和肌酐含量，并配制出若干個含有不同尿素氮含量和肌酐含量的血清標(biāo)定液。

其中，血清標(biāo)定液的數(shù)量需滿足建立模型的要求。優(yōu)選的，血清標(biāo)定液的數(shù)量至少為30個。

若干個血清標(biāo)定液的尿素氮含量的范圍為2-7mmol/l、肌酐含量的范圍為20-200umol/l。

步驟二、用近紅外光譜儀對每個血清標(biāo)定液進行光譜采集。

步驟三、根據(jù)血清標(biāo)定液的近紅外光譜以及尿素氮和肌酐的含量，分別建立尿素氮鑒別模型和肌酐鑒別模型。其中，尿素氮鑒別模型是指血清標(biāo)定液的光譜與血清標(biāo)定液中尿素氮含量之間的對應(yīng)關(guān)系，肌酐鑒別模型是指血清標(biāo)定液的光譜與血清標(biāo)定液中肌酐含量之間的對應(yīng)關(guān)系。

步驟四、用近紅外光譜儀對待檢測的血清樣品進行光譜采集，將血清樣品的光譜分別與尿素氮鑒別模型和肌酐鑒別模型對比，獲得血清樣品中的尿素氮含量和肌酐含量。

其中，步驟二和步驟四中，使用近紅外光譜儀檢測血清標(biāo)定液和血清樣品時，還采用配合近紅外光譜儀的液體檢測裝置。該液體檢測裝置包括通光孔、半透半反鏡片、樣品試管、樣品通道探測器和空氣通道探測器。

通光孔、半透半反鏡片和樣品通道探測器設(shè)于同一直線上，形成樣品測試光路?？諝馔ǖ捞綔y器設(shè)于半透半反鏡片的一側(cè)，與樣品測試光路垂直的方向，用于接收半透半反鏡片的反射光。樣品試管放置在半透半反鏡片和樣品通道探測器之間，位于樣品測試光路上，進行近紅外光譜采集時，血清標(biāo)定液或待檢測的血清樣品均放入樣品試管中。樣品試管呈長方體，測試光線與樣品試管的管壁垂直。

檢測時，近紅外光線通過通光孔，射至半透半反鏡片上，一部分近紅外光線由半透半反鏡片反射進入空氣通道探測器；另一部分近紅外光線透過半透半反鏡片照射樣品試管，透過樣品試管及其內(nèi)部的測試液體(血清標(biāo)定液或血清樣品)射入樣品通道探測器，光線在透過測試液體時發(fā)生吸收現(xiàn)象。

實施例二

本實施例提供一種血清中尿素氮肌酐含量近紅外光譜測定方法，與實施例一的方法基本相同，區(qū)別僅在于：步驟一采用尿素氮肌酐雙項定量檢測方法測定血清中的尿素氮含量和肌酐含量，以配制出若干個含有不同尿素氮含量和肌酐含量的血清標(biāo)定液。

上述尿素氮肌酐雙項定量檢測方法的具體步驟為：

步驟ⅰ、在待檢測尿素氮和肌酐含量的血清中取出兩份相同的血清。

步驟ⅱ、將試劑a和試劑b同時分別加入到兩份血清中，混合均勻，并于37℃溫浴5min。

本實施例中，溫浴溫度還可以為36℃，相應(yīng)的，溫浴時間為5min；或者，溫浴溫度還可以為38℃，相應(yīng)的，溫浴時間為3min。

其中，試劑a由磷酸鹽緩沖液30nmol/l、尿素酶4000u/l、谷氨酸脫氫酶8000u/l、α-酮戊二酸140nmol/l、nadh2.0nmol/l、防腐劑150μl/l混合制成。一份血清與試劑a的體積比為1:70。試劑b由磷酸鹽緩沖液30nmol/l、尿素酶4000u/l、谷氨酸脫氫酶8000u/l、α-酮戊二酸140nmol/l、nadh2.0nmol/l、防腐劑150μl/l、肌酐酰氨基水解酶5ku/l、肌酸脒基水解酶5ku/l混合制成。一份血清與試劑b的體積比為1:70。

本實施例中，試劑a還可以由磷酸鹽緩沖液70nmol/l、尿素酶6000u/l、谷氨酸脫氫酶10000u/l、α-酮戊二酸180nmol/l、nadh4.0nmol/l、防腐劑250μl/l混合制成，一份血清與試劑a的體積比為1:80；相應(yīng)的，試劑b由磷酸鹽緩沖液70nmol/l、尿素酶6000u/l、谷氨酸脫氫酶10000u/l、α-酮戊二酸180nmol/l、nadh4.0nmol/l、防腐劑250μl/l、肌酐酰氨基水解酶7ku/l、肌酸脒基水解酶17ku/l混合制成，一份血清與試劑b的體積比為1:80?；蛘?，試劑a還可以由磷酸鹽緩沖液50nmol/l、尿素酶5000u/l、谷氨酸脫氫酶9000u/l、α-酮戊二酸160nmol/l、nadh3.0nmol/l、防腐劑200μl/l混合制成，一份血清與試劑a的體積比為1:75；試劑b由磷酸鹽緩沖液50nmol/l、尿素酶5000u/l、谷氨酸脫氫酶9000u/l、α-酮戊二酸160nmol/l、nadh3.0nmol/l、防腐劑200μl/l、肌酐酰氨基水解酶6ku/l、肌酸脒基水解酶11ku/l混合制成，一份血清與試劑b的體積比為1:75。

步驟ⅲ、在340nm波長處測量試劑a和血清的混合液中nadh的吸光度下降速率，并與相同處理的尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液比較，計算可獲得血清中尿素氮的含量。

步驟ⅳ、在340nm波長處測量試劑b和血清的混合液中nadh的吸光度下降速率，并與相同處理的尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液比較，計算可獲得血清中尿素氮和肌酐的總含量，再減去步驟ⅲ獲得的尿素氮含量，得到血清中肌酐的含量。

其中，尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液的具體處理方法為：配制已知濃度的尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液，在尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液中加入試劑a(b)，混合均勻并溫浴，其中，尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液與一份血清等量，試劑a(b)的加入量與其加入至血清中的量相等，溫浴溫度和時間也與血清的處理條件相同。然后，在340nm波長處測量試劑a(b)和尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液的混合液中nadh的吸光度下降速率，由于尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液的濃度已知，通過計算可知樣品中尿素氮(尿素氮和肌酐)的含量。