本發(fā)明涉及生物醫(yī)學技術領域，具體涉及一種用于不孕不育抗體檢測的試劑盒及其檢測方法。

背景技術：

目前市場上常見的用于不孕不育檢測的產品主要有膠體金檢測、elisa檢測等檢測形式的產品。膠體金檢測是將抗原或抗體結合在硝酸纖維素膜上，并將標記有抗體或抗原膠體金干燥在結合墊上，若樣品含有特異性抗體或抗原可先于膠體金上的抗原或抗體結合，并一同向吸水紙的方向層析，當層析至檢測線時，再與檢測線上的抗原或抗體結合，最后通過顏色判斷陰陽性。膠體金主要是進行單人份單項目檢測，無法做到單人份多項目檢測即檢測單通道，同時膠體金檢測相關項目的靈敏度較低，以上原因都限制了該類產品在臨床中的使用。

而elisa檢測則是將抗原或抗體結合于聚苯乙烯板孔內，此時抗原或抗體仍可具有免疫活性，可進行抗原抗體反應，配合酶催化底物呈色反應(靈敏度高)，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，并可利用呈色之深淺進行定性或定量分析。elisa的檢測形式雖然可以做到多人份檢測，但是該類產品同樣是單通道單項目檢測，并且需要專業(yè)的操作人員進行臨床檢測以及相關配套的儀器如酶標儀、洗板機、水浴箱等進行協(xié)作；同時，該類產品檢測的底物由a/b液組成，操作麻煩，混合后易失效，陰性對照非特異性顯色較強、信噪比較低；最后限制該類產品使用的是elisa檢測需要耗時將近3個小時，試劑反應慢，在實際的臨床使用中導致諸多不便。

基于此，有必要設計一種可快速檢測多種不孕不育抗體的試劑盒。

技術實現(xiàn)要素：

為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種用于不孕不育抗體檢測的試劑盒及其檢測方法。所述用于不孕不育抗體檢測的試劑盒中的不孕不育抗原膜條包被有八種不孕不育抗原，可實現(xiàn)不孕不育八項聯(lián)合檢測，檢測快速且易于自動化。

本發(fā)明第一方面提供了一種用于不孕不育抗體檢測的試劑盒，包括盒體及與所述盒體連接的盒蓋，所述盒體內設有不孕不育抗原膜條、反應槽、酶結合物試劑瓶、樣本稀釋液試劑瓶、顯色底物試劑瓶和濃縮洗滌液試劑瓶；所述不孕不育抗原膜條上設有檢測區(qū)和質控區(qū)，所述檢測區(qū)分別設有包被精子抗原的檢測線、包被子宮內膜抗原的檢測線、包被透明帶抗原的檢測線、包被卵巢抗原的檢測線、包被人絨毛膜促性腺激素抗原的檢測線、包被滋養(yǎng)層細胞抗原的檢測線、包被心磷脂抗原的檢測線以及包被β2糖蛋白抗原的檢測線。

其中，所述各檢測線相互平行且各相鄰檢測線之間的間隔等寬。

其中，所述質控區(qū)設有包被抗人igg抗體的質控線。

其中，沿所述不孕不育抗原膜條長度方向依次設有包被抗人igg抗體的質控線、包被精子抗原的檢測線、包被子宮內膜抗原的檢測線、包被透明帶抗原的檢測線、包被卵巢抗原的檢測線、包被人絨毛膜促性腺激素抗原的檢測線、包被滋養(yǎng)層細胞抗原的檢測線、包被心磷脂抗原的檢測線和包被β2糖蛋白抗原的檢測線。

其中，所述包被抗人igg抗體的質控線與各檢測線相互平行，所述包被抗人igg抗體的質控線與所述包被精子抗原的檢測線之間的間隔為2.0mm，所述各相鄰檢測線之間的間隔為2.0mm。

其中，所述不孕不育抗原膜條的長度為80mm，寬度為2.0mm-5.0mm。

其中，所述不孕不育抗原膜條為孔徑大小為0.22μm的多孔硝酸纖維素膜。

其中，所述酶結合物試劑瓶中裝有堿性磷酸酶標記抗人igg抗體、堿性磷酸酶標記抗人iga抗體和堿性磷酸酶標記抗人igm抗體形成的混合物；所述樣本稀釋液試劑瓶中裝有含質量濃度為3％的牛血清白蛋白的tris緩沖液；所述顯色底物試劑瓶中裝有5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸鹽與氯化硝基四氮唑藍的混合物；所述濃縮洗滌液試劑瓶中裝有20倍濃縮的tris緩沖液。

其中，所述試劑盒在檢測過程中的反應溫度為37℃恒溫。

本發(fā)明第一方面提供的用于不孕不育抗體檢測的試劑盒，可實現(xiàn)半定量檢測人血清中的精子、子宮內膜、透明帶、卵巢、人絨毛膜促性腺激素、滋養(yǎng)層細胞、心磷脂、β2糖蛋白1等不孕不育相關抗原的特異性igg抗體或iga抗體或igm抗體，達到了不孕不育八項聯(lián)合檢測、檢測全面、檢測快速且易于自動化的效果。

本發(fā)明第二方面提供了第一方面所述的用于不孕不育抗體檢測的試劑盒的檢測方法，包括以下步驟：

(1)檢測前準備：將用于不孕不育抗體檢測的試劑盒和待測血清樣本平衡至室溫，將所述已平衡至室溫的待測血清樣本按預設的比例稀釋，獲得待測血清樣本a；將不孕不育抗原膜條放入反應槽中；將濃縮洗滌液按照預設的比例稀釋，獲得洗滌液a；

(2)孵育待測血清樣本a：將所述待測血清樣本a加入到反應槽中，所述待測血清樣本a與所述不孕不育抗原膜條上包被的精子抗原、子宮內膜抗原、透明帶抗原、卵巢抗原、人絨毛膜促性腺激素抗原、滋養(yǎng)層細胞抗原、心磷脂抗原以及β2糖蛋白抗原于37℃恒溫孵育10min進行反應，獲得檢測膜條a；

(3)洗滌檢測膜條a：倒掉反應槽內的待測血清樣本a，加入洗滌液a洗滌檢測膜條a1min，倒掉，反復沖洗3次，獲得檢測膜條b；

(4)孵育檢測膜條b：將酶結合物加入到反應槽中，所述酶結合物與所述檢測膜條b于37℃恒溫孵育10min進行反應，獲得檢測膜條c；

(5)洗滌檢測膜條c：倒掉反應槽內的酶結合物，加入洗滌液a洗滌檢測膜條c1min，倒掉，反復沖洗3次，獲得檢測膜條d；

(6)顯色檢測膜條d：將顯色底物加入到反應槽中，所述顯色底物與所述檢測膜條d于37℃恒溫孵育10min進行反應，獲得檢測膜條e；

(7)倒掉反應槽內顯色底物，加入蒸餾水洗滌檢測膜條e，倒掉，獲得檢測膜條f。

本發(fā)明第二方面提供的用于不孕不育抗體檢測的試劑盒的檢測方法，方法簡單易操作。

綜上，本發(fā)明有益效果包括以下幾個方面：

1、本發(fā)明提供的用于不孕不育抗體檢測的試劑盒，抗原膜條包括包被八種不同的不孕不育抗原的檢測線，可實現(xiàn)半定量檢測人血清中的精子、子宮內膜、透明帶、卵巢、人絨毛膜促性腺激素、滋養(yǎng)層細胞、心磷脂、β2糖蛋白1等不孕不育相關抗原的特異性igg抗體或iga抗體或igm抗體，達到了不孕不育八項聯(lián)合檢測、檢測全面、檢測快速且易于自動化的效果；

2、本發(fā)明提供的用于不孕不育抗體檢測的試劑盒的檢測方法，方法簡單易操作。

附圖說明

圖1為本發(fā)明一實施方式提供的用于不孕不育抗體檢測的試劑盒的示意圖；

圖2為本發(fā)明一實施方式提供的不孕不育抗原膜條的示意圖。

具體實施方式

以下所述是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也視為本發(fā)明的保護范圍。

如圖1所示，本發(fā)明第一方面提供了一種用于不孕不育抗體檢測的試劑盒，包括盒體1及與所述盒體連接的盒蓋2，所述盒體1內設有不孕不育抗原膜條11、反應槽12、酶結合物試劑瓶13、樣本稀釋液試劑瓶14、顯色底物試劑瓶15和濃縮洗滌液試劑瓶16；所述不孕不育抗原膜條上設有檢測區(qū)和質控區(qū)，所述檢測區(qū)設有包被精子抗原的檢測線、包被子宮內膜抗原的檢測線、包被透明帶抗原的檢測線、包被卵巢抗原的檢測線、包被人絨毛膜促性腺激素抗原的檢測線、包被滋養(yǎng)層細胞抗原的檢測線、包被心磷脂抗原的檢測線以及包被β2糖蛋白抗原的檢測線。

本發(fā)明實施方式中，所述試劑盒中，所述不孕不育抗原膜條可以存儲在一存儲瓶中，所述不孕不育抗原膜條以存儲瓶的形式內設在所述試劑盒的盒體中?？蛇x地，所述盒體內還設有用于固定所述試劑瓶、反應膜條和反應槽的固定件。所述固定件可以為紙板、塑料板或海綿?？蛇x地，所述反應槽用于檢測時放置不孕不育抗原膜條，所述反應槽的結構為常規(guī)技術，在此不再贅述。

本發(fā)明實施方式中，所述各檢測線相互平行且各相鄰檢測線之間的間隔等寬?？蛇x地，所述質控區(qū)設有包被抗人igg抗體的質控線。如圖2所示，可選地，沿所述不孕不育抗原膜條長度方向依次設有包被抗人igg抗體的質控線0、包被精子抗原的檢測線1、包被子宮內膜抗原的檢測線2、包被透明帶抗原的檢測線3、包被卵巢抗原的檢測線4、包被人絨毛膜促性腺激素抗原的檢測線5、包被滋養(yǎng)層細胞抗原的檢測線6、包被心磷脂抗原的檢測線7和包被β2糖蛋白抗原的檢測線8。可選地，所述包被抗人igg抗體的質控線與各檢測線相互平行，所述包被抗人igg抗體的質控線與所述包被精子抗原的檢測線之間的間隔為2.0mm，所述各相鄰檢測線之間的間隔為2.0mm?？蛇x地，所述質控線與所述檢測線相互平行且與所述不孕不育抗原膜條長度方向垂直。具體地，所述質控線與所述檢測線的長度等于所述不孕不育抗原膜條的寬度?？蛇x地，所述質控線與所述各檢測線的寬度相等。進一步可選地，所述質控線與所述各檢測線的寬度均為0.5mm-0.7mm。具體地，所述質控線與所述各檢測線的寬度均為0.6mm?？蛇x地，所述不孕不育抗原膜條沿其長度方向設有相對設置的第一端和第二端，所述質控線與所述第一端的距離為10mm-12mm。進一步可選地，所述質控線與所述第一端的距離為11mm。

本發(fā)明實施方式中，所述不孕不育抗原膜條為孔徑大小為0.22μm的多孔硝酸纖維素膜?？蛇x地，所述不孕不育抗原膜條的長度為80mm，寬度為2.0mm-5.0mm。進一步可選地，所述不孕不育抗原膜條的寬度為3mm。

本發(fā)明實施方式中，所述酶結合物試劑瓶裝有堿性磷酸酶標記抗人igg抗體、堿性磷酸酶標記抗人iga抗體和堿性磷酸酶標記抗人igm抗體形成的混合物。可選地，所述酶結合物試劑瓶還裝有樣本稀釋液，在所述酶結合物試劑瓶中，所述堿性磷酸酶標記抗人igg抗體：所述堿性磷酸酶標記抗人iga抗體：所述堿性磷酸酶標記抗人igm抗體：樣本稀釋液的體積比為1:1:1:2000。本發(fā)明提供的酶結合物試劑瓶中同時裝有三種酶結合物。

本發(fā)明實施方式中，所述樣本稀釋液試劑瓶中裝有含質量濃度為3％的牛血清白蛋白的tris緩沖液。

本發(fā)明實施方式中，所述顯色底物試劑瓶中裝有5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸鹽與氯化硝基四氮唑藍的混合物，兩者質量比為2:1。

本發(fā)明實施方式中，所述濃縮洗滌液試劑瓶中裝有20倍濃縮的tris緩沖液。

本發(fā)明實施方式中，所述試劑盒在檢測過程中的反應溫度為37℃恒溫。本發(fā)明所述試劑盒在檢測過程中的反應溫度為37℃恒溫，可加速抗原抗體的結合反應，試劑盒的檢測過程更加迅速。

本發(fā)明實施方式中，所述不孕不育抗原膜條分別包被精子、子宮內膜、透明帶、卵巢、人絨毛膜促性腺激素、滋養(yǎng)層細胞、心磷脂以及β2糖蛋白抗原這八種抗原；精子對女性是一個同種異體抗原，正常情況下女性生殖道具有能降解精子抗原的酶系統(tǒng)，不引起對精子抗原的免疫反應。當此種酶系統(tǒng)缺陷時，射入陰道的精子抗原可被陰道黏膜吸收，誘發(fā)全身或局部的免疫應答，致使女性機體產生抗精子抗體。抗精子抗體影響精子在女性生殖道內轉送。抗精子抗體與精子表面抗原結合改變精子運動的特征使其原地顫動、制動、凝集，甚至無法通過宮頸黏液，能夠到達受精部位的精子寥寥無幾，使受精幾乎不可能發(fā)生。抗精子抗體還能影響精子的獲能及頂體反應，干擾精子穿透卵丘、透明帶以及與卵子結合，即使受孕，往往胚胎發(fā)育不良，只有胚囊而無胚芽等，乃至流產或不孕?？咕涌贵w亦可見于其他原因，如輸精管阻塞以及睪丸和附睪的損傷和炎癥。鑒于抗精子抗體的異質性及其中很多抗精子抗體針對的靶抗原與生育并不相關。因此，對抗精子抗體的陽性結果必須結合臨床表現(xiàn)綜合考慮；子宮內膜是胚胎著床和生長發(fā)育之地，也是精子上行的必經通路。在正常情況下，育齡婦女周期性脫落的子宮內膜隨月經血流出體外，一般不誘發(fā)機體產生自身免疫反應。但在病理狀態(tài)下，如子宮內膜炎、子宮內膜異位癥及子宮腺肌癥、經期陰道操作或經期性交等，可轉化成抗原或半抗原，刺激機體自身產生相應的抗體。此外，人工流產刮宮時，胚囊也可能作為抗原刺激機體產生抗體。一旦女性體內有抗子宮內膜抗體存在，便會導致不孕、停孕或發(fā)生流產。不少女性因在初次妊娠時作了人流，而不再懷孕，這種繼發(fā)不孕癥患者多數(shù)是因為體內產生了抗子宮內膜抗體。抗子宮內膜抗體屬于自身抗體，在正常育齡婦女中也可以檢測到，但在不孕癥人群中，特別是患有子宮內膜異位癥的婦女中更多見。另外，抗子宮內膜抗體的產生還可能與機體免疫系統(tǒng)失調有關，在原因不明的不孕癥患者，抗子宮內膜抗體的檢出率高；卵巢組織或細胞作為一種特殊的抗原，刺激自身產生抗卵巢抗體。卵巢功能早衰者抗卵巢抗體陽性，某些多腺體自身免疫性疾病患者可有抗卵巢抗體水平升高，部分不明原因不孕癥患者體內也可有特異性或非特異性自身抗體升高?？孤殉部贵w與相應的抗原結合誘導的免疫反應，可能通過細胞因子和激素代謝兩條途徑導致障礙，如長時間后可引起月經紊亂、黃體和其他性激素分泌不足、不排卵、卵巢早衰、繼發(fā)閉經和原因不明絕經，成為不孕的潛在原因。有卵巢抗體的女性卵泡發(fā)育不正常：卵泡長不到受孕的優(yōu)勢，或者長到受孕優(yōu)勢卻不能自然排出，甚至出現(xiàn)卵巢早衰現(xiàn)象，使很多育齡婦女終生難以發(fā)育出成熟的卵泡，而導致原發(fā)性不孕和繼發(fā)性不孕。體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，高水平抗卵巢抗體的存在可導致卵子透明帶毛糙，受精后胚胎分裂緩慢；人絨毛膜促性腺激素是維持早期妊娠的主要激素。對于有自然流產史、人工流產史及生化妊娠史的女性，在流產過程中，絨毛組織中的人絨毛膜促性腺激素可能作為抗原刺激母體產生抗體。這種抗人絨毛膜抗體就可以阻止人滋養(yǎng)層細胞融合和孕酮的合成，從而導致女性的不孕或者是習慣性流產。抗人絨毛膜促性腺激素抗體用于先兆流產，葡萄胎，宮外孕的輔助診斷；抗透明帶抗體與透明帶結合，可遮蓋透明帶上的特異性精子受體，使精子無法識別卵子并與之結合，還可在補體的作用下直接產生細胞毒作用，破壞透明帶，從而破壞卵細胞，造成不孕；抗滋養(yǎng)層細胞抗體主要作為反復流產患者的輔助診斷指標；抗心磷脂抗體是一種以血小板和內皮細胞膜上帶負電荷的心磷脂作為靶抗原的自身抗體與狼瘡抗凝因子同屬抗磷脂抗體，與不良妊娠結局如復發(fā)流產、死胎及全身性紅斑狼瘡、神經梅毒、多發(fā)性硬化癥、格林-巴利綜合征等神經系統(tǒng)疾病關系密切，在血栓形成的發(fā)生機理中有重要作用。若抗心磷脂抗體陽性，則會出現(xiàn)習慣性流產的發(fā)生率極高，可發(fā)生重復流產、死胎、胎盤梗塞、圍產期胎兒存活率降低?？剐牧字贵w能阻止前列環(huán)素的合成，使血栓素-前列環(huán)素比例失調，而血栓素的相對增多則引起全身和胎盤血管的痙攣缺血，血栓形成。抗磷脂抗體通過爭奪胎盤血管的磷脂受體，導致蛻膜血管病變及胎盤栓塞；β2糖蛋白1是抗磷脂抗體結合時不可或缺的輔酶，會與帶負電荷的物質(例如心磷脂和脂蛋白)結，發(fā)揮其生理功能。β2糖蛋白1與抗β2糖蛋白1抗體形成的復合物誘導內皮細胞活化，從而誘導炎癥分子和粘附分子等的表達，是血栓形成重要的危險因子β2糖蛋白1抗體有助于診斷可疑抗磷脂綜合征(尤其是抗心磷脂抗體陰性患者)，與血栓形成及病態(tài)妊娠、習慣性流產的相關性強于抗心磷脂抗體；免疫因素是影響很多女性生育和妊娠的一個重要原因，由于免疫性因素造成的不孕不育，甚至是習慣性流產的女性，體內不同抗體所造成的影響都是導致了疾病的重要因素，不孕不育八項聯(lián)合檢測能夠更好的檢出造成不孕不育的具體免疫因素，有利于精準治療。

本發(fā)明試劑盒適用于人血清樣本檢測，優(yōu)選新鮮的人血清，避免使用嚴重溶血的血清或脂血血清；所述人血清樣本優(yōu)選2-8℃保藏。使用所述人血清樣本進行檢測前，必須將所有的人血清樣本平衡至室溫(22-28℃)。

本發(fā)明試劑盒中不孕不育抗原膜條的制備方法為按照常規(guī)的制備膜條的方法進行制備，其中，配制點樣溶液中是將本發(fā)明的八種不孕不育抗原配制成相應的包被濃度，然后將配制好的點樣溶液以一定的排列次序固定在膜片上，形成獨立的檢測線，后續(xù)再進行干燥、貼膜、切膜、組裝、切條等操作以制備得到不孕不育抗原膜條。

本發(fā)明第一方面提供的用于不孕不育抗體檢測的試劑盒，可實現(xiàn)半定量檢測人血清中的精子、子宮內膜、透明帶、卵巢、人絨毛膜促性腺激素、滋養(yǎng)層細胞、心磷脂、β2糖蛋白1等不孕不育相關抗原的特異性igg抗體或iga抗體或igm抗體，達到了不孕不育八項聯(lián)合檢測、檢測全面、檢測快速且易于自動化的效果。

本發(fā)明第二方面提供了一種用于不孕不育抗體檢測的試劑盒的檢測方法，所述檢測方法包括以下步驟：

s10：檢測前準備：將用于不孕不育抗體檢測的試劑盒和待測血清樣本平衡至室溫，將所述已平衡至室溫的待測血清樣本按預設的比例稀釋，獲得待測血清樣本a；將檢測膜條放入反應槽中；將濃縮洗滌液按照預設的比例稀釋，獲得洗滌液a；

在步驟s10中，待測血清樣本指的是待測人血清樣本，試劑盒和待測血清樣本平衡至室溫；將已平衡至室溫的待測血清樣本按體積比1:10比例稀釋，優(yōu)選用移液器將900μl樣本稀釋液加入到反應槽中，再加入100μl待測血清樣本，獲得待測血清樣本a；將檢測膜條放入反應槽中；將濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水，按體積比1:20稀釋成工作濃度洗滌液，優(yōu)選25ml濃縮洗滌液加入475ml蒸餾水或去離子水，獲得洗滌液a。

s20：孵育待測血清樣本a：將待測血清樣本a加入到反應槽中，待測血清樣本a與所述不孕不育抗原膜條上包被的精子抗原、子宮內膜抗原、透明帶抗原、卵巢抗原、人絨毛膜促性腺激素抗原、滋養(yǎng)層細胞抗原、心磷脂抗原以及β2糖蛋白抗原于37℃恒溫孵育10min進行反應，獲得檢測膜條a；

在步驟s20中，將1ml待測血清樣本a加入到反應槽中，待測血清樣本a與所述反應槽內的檢測膜條于37℃恒溫孵育10min進行反應，檢測膜條上包被的精子抗原、子宮內膜抗原、透明帶抗原、卵巢抗原、人絨毛膜促性腺激素抗原、滋養(yǎng)層細胞抗原、心磷脂抗原以及β2糖蛋白抗原，與待測血清樣本中抗精子igg抗體或抗精子iga抗體或抗精子igm抗體、待測血清樣本中抗子宮內膜igg抗體或抗子宮內膜iga抗體或抗子宮內膜igm抗體、抗透明帶igg抗體或抗透明帶iga抗體或抗透明帶igm抗體、抗卵巢igg抗體或抗卵巢iga抗體或抗卵巢igm抗體、抗人絨毛膜促性腺激素igg抗體或抗人絨毛膜促性腺激素iga抗體或抗人絨毛膜促性腺激素igm抗體、抗人滋養(yǎng)層細胞igg抗體或抗人滋養(yǎng)層細胞iga抗體或抗人滋養(yǎng)層細胞igm抗體、抗人心磷脂igg抗體或抗人心磷脂iga抗體或抗人心磷脂igm抗體以及抗人β2糖蛋白igg抗體或抗人β2糖蛋白iga抗體或抗人β2糖蛋白igm抗體發(fā)生特異性的抗原抗體結合反應，獲得抗原抗體結合物，獲得檢測膜條a，檢測膜條a上的精子抗原抗體結合物a、子宮內膜抗原抗體結合物a、透明帶抗原抗體結合物a、卵巢抗原抗體結合物a、人絨毛膜促性腺激素抗原抗體結合物a、滋養(yǎng)層細胞抗原抗體結合物a、心磷脂抗原抗體結合物a以及β2糖蛋白抗原抗體結合物a。

s30：洗滌檢測膜條a：倒掉反應槽內的待測血清樣本a，加入洗滌液a洗滌檢測膜條a1min，倒掉，反復沖洗3次，獲得檢測膜條b；

在步驟s30中，倒掉或吸干反應槽內反應后的待測血清樣本a，加入2ml洗滌液a沖洗檢測膜條a1min，倒掉或吸干反應槽內洗滌液a，反復沖洗3次，獲得檢測膜條b，檢測膜條b上的精子抗原抗體結合物b、子宮內膜抗原抗體結合物b、透明帶抗原抗體結合物b、卵巢抗原抗體結合物b、人絨毛膜促性腺激素抗原抗體結合物b、滋養(yǎng)層細胞抗原抗體結合物b、心磷脂抗原抗體結合物b以及β2糖蛋白抗原抗體結合物b。

s40：孵育檢測膜條b：將酶結合物加入到反應槽中，所述酶結合物與所述檢測膜條b于37℃恒溫孵育10min進行反應，獲得檢測膜條c；

在步驟s40中，將1ml酶結合物加入到反應槽中，酶結合物中的堿性磷酸酶標記抗人igg抗體或堿性磷酸酶標記抗人iga抗體或堿性磷酸酶標記抗人igm抗體與所述反應槽內的檢測膜條b于37℃恒溫孵育10min進行反應，檢測膜條b上的精子抗原抗體結合物b與酶結合物中的堿性磷酸酶標記抗人igg抗體或堿性磷酸酶標記抗人iga抗體或堿性磷酸酶標記抗人igm抗體發(fā)生特異性抗原抗體反應，獲得檢測膜條c上的精子抗原抗體結合物c、子宮內膜抗原抗體結合物b與酶結合物中的堿性磷酸酶標記抗人igg抗體或堿性磷酸酶標記抗人iga抗體或堿性磷酸酶標記抗人igm抗體發(fā)生特異性抗原抗體反應，獲得檢測膜條c上的子宮內膜抗原抗體結合物c、透明帶抗原抗體結合物b與酶結合物中的堿性磷酸酶標記抗人igg抗體或堿性磷酸酶標記抗人iga抗體或堿性磷酸酶標記抗人igm抗體發(fā)生特異性抗原抗體反應，獲得檢測膜條c上的透明帶抗原抗體結合物c、卵巢抗原抗體結合物b與酶結合物中的堿性磷酸酶標記抗人igg抗體或堿性磷酸酶標記抗人iga抗體或堿性磷酸酶標記抗人igm抗體發(fā)生特異性抗原抗體反應，獲得檢測膜條c上的卵巢抗原抗體結合物c、人絨毛膜促性腺激素抗原抗體結合物b與酶結合物中的堿性磷酸酶標記抗人igg抗體或堿性磷酸酶標記抗人iga抗體或堿性磷酸酶標記抗人igm抗體發(fā)生特異性抗原抗體反應，獲得檢測膜條c上的人絨毛膜促性腺激素抗原抗體結合物c、滋養(yǎng)層細胞抗原抗體結合物b與酶結合物中的堿性磷酸酶標記抗人igg抗體或堿性磷酸酶標記抗人iga抗體或堿性磷酸酶標記抗人igm抗體發(fā)生特異性抗原抗體反應，獲得檢測膜條c上的滋養(yǎng)層細胞抗原抗體結合物c、心磷脂抗原抗體結合物b與酶結合物中的堿性磷酸酶標記抗人igg抗體或堿性磷酸酶標記抗人iga抗體或堿性磷酸酶標記抗人igm抗體發(fā)生特異性抗原抗體反應，獲得檢測膜條c上的心磷脂抗原抗體結合物c以及β2糖蛋白抗原抗體結合物b與酶結合物中的堿性磷酸酶標記抗人igg抗體或堿性磷酸酶標記抗人iga抗體或堿性磷酸酶標記抗人igm抗體發(fā)生特異性抗原抗體反應，獲得檢測膜條c上的β2糖蛋白抗原抗體結合物c。

s50：洗滌檢測膜條c：倒掉反應槽內的酶結合物，加入洗滌液a洗滌檢測膜條c1min，倒掉，反復沖洗3次，獲得檢測膜條d；

在步驟s50中，倒掉或吸干反應槽內反應后的酶結合物，加入2ml洗滌液a沖洗檢測膜條a1min，倒掉或吸干反應槽內洗滌液a，反復沖洗3次，獲得檢測膜條d，檢測膜條d上的精子抗原抗體結合物d、子宮內膜抗原抗體結合物d、透明帶抗原抗體結合物d、卵巢抗原抗體結合物d、人絨毛膜促性腺激素抗原抗體結合物d、滋養(yǎng)層細胞抗原抗體結合物d、心磷脂抗原抗體結合物d以及β2糖蛋白抗原抗體結合物d。

s60：顯色檢測膜條d：將顯色底物加入到反應槽中，所述顯色底物與所述檢測膜條d于37℃恒溫孵育10min進行反應，獲得檢測膜條e；

在步驟s60中，將1ml顯色底物加入到反應槽中，顯色底物中的5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸鹽與氯化硝基四氮唑藍的混合物與所述反應槽內的檢測膜條d于37℃恒溫孵育10min進行反應，檢測膜條d上的精子抗原抗體結合物d、子宮內膜抗原抗體結合物d、透明帶抗原抗體結合物d、卵巢抗原抗體結合物d、人絨毛膜促性腺激素抗原抗體結合物d、滋養(yǎng)層細胞抗原抗體結合物d、心磷脂抗原抗體結合物d以及β2糖蛋白抗原抗體結合物d分別與顯色底物中的5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸鹽與氯化硝基四氮唑藍的混合物發(fā)生顯色反應，獲得檢測膜條e，檢測膜條e上的精子抗原抗體結合物e、子宮內膜抗原抗體結合物e、透明帶抗原抗體結合物e、卵巢抗原抗體結合物e、人絨毛膜促性腺激素抗原抗體結合物e、滋養(yǎng)層細胞抗原抗體結合物e、心磷脂抗原抗體結合物e以及β2糖蛋白抗原抗體結合物e。

s70：倒掉反應槽內顯色底物，加入蒸餾水洗滌檢測膜條e，倒掉，獲得檢測膜條f。

在步驟s70中，倒掉反應槽內顯色底物，加入2ml蒸餾水洗滌檢測膜條e1min，倒掉，獲得檢測膜條f，電吹風吹干或自然干燥檢測膜條f。

在本實施例中還可對檢測膜條f進行判讀，將干燥的檢測膜條f放入免疫印跡分析儀膜條固定架中，借助免疫印跡分析儀對檢測膜條f進行判讀，結果可判斷劃分為陰性、臨界值、臨界值的2倍值、4倍值、8倍值5個等級，輸出為量化的數(shù)值。

本發(fā)明第二方面提供的用于不孕不育抗體檢測的試劑盒的檢測方法，方法簡單易操作，達到了不孕不育八項聯(lián)合檢測、檢測全面、檢測快速且易于自動化的效果。

以上所述實施例僅表達了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但并不能因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應當指出的是，對于本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。因此，本發(fā)明專利的保護范圍應以所附權利要求為準。