本發(fā)明涉及一種三聚氰胺含量的檢測方法，特別涉及一種用于檢測液態(tài)牛奶中三聚氰胺含量的方法。

背景技術：

三聚氰胺分子(1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺)是一種用于制造三聚氰胺樹脂的原材料。近年來，不法分子將三聚氰胺分子非法添加到牛奶等蛋白質(zhì)類食品中，其主要目的是為了提高產(chǎn)品的虛假蛋白質(zhì)含量。原因是三聚氰胺分子氮元素含量高達66％，而常規(guī)檢測食品中蛋白質(zhì)含量的方法正是根據(jù)產(chǎn)品中氮元素含量來確定蛋白質(zhì)的含量,如凱氏定氮法，無法將蛋白質(zhì)和三聚氰胺分子區(qū)分開來。所以不法分子通過非法添加三聚氰胺的方法，達到虛假提高產(chǎn)品蛋白質(zhì)含量的目的。三聚氰胺分子進入人體會造成很大的危害，尤其是對泌尿系統(tǒng)的危害最為嚴重。2008年某品牌的奶粉中非法摻入三聚氰胺，使得在很多食用過該品牌奶粉的兒童體內(nèi)發(fā)現(xiàn)患有腎結石。2007年在美國，由于寵物食品中的非法摻入三聚氰胺，使得大批食用過這種寵物食品的寵物患病或者死亡。由此可見，建立一種簡單、快速并且適宜于非專業(yè)人員操作的三聚氰胺檢測方法是十分重要的。

對于目前檢測三聚氰胺的方法可以分成兩類：一類是可以達到很高的檢測靈敏度，但是這一類方法必須進行復雜耗時的前處理工作，從混合體系中將三聚氰胺分子提取出來；另一類是可以應用在混合體系中完成對三聚氰胺的直接檢測，但是由于混合體系中眾多雜質(zhì)的干擾，無法使檢測限度達到國家要求的檢測標準。

用于檢測樣品中三聚氰胺的方法主要是高壓液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用和氣質(zhì)聯(lián)用等方法。此類方法不僅操作復雜，還對操作儀器的人員素質(zhì)以及儀器本身的性能要求較高。并且檢測費時，運行費用較高。由于所使用儀器的限制，無法完成現(xiàn)場快速的檢測，以及在食品生產(chǎn)過程中的實時監(jiān)測，而且傳統(tǒng)的檢測方法在檢測時，sers基底需要使用化學還原法制備金或銀溶膠，其制備過程中對溫度、各組分的配比以及配置的時長要求精確控制，由于其條件控制難以準確量化，導致每次制備的金、銀納米顆粒粒徑和分散性無法準確一致，獲得的基底重復性較差。在使用液態(tài)sers基底時，需要對制備的納米顆粒進行反復清洗，操作過程復雜，且在檢測中容易受外界溫度、樣品本身的性質(zhì)影響，難以便捷定性及定量檢測。

技術實現(xiàn)要素：

為解決上述問題，本發(fā)明提供一種用于檢測液態(tài)牛奶中三聚氰胺含量的方法，該種方法可以不經(jīng)過分離步驟，直接在牛奶中檢測三聚氰胺分子存在與否；可以通過其表面增強拉曼信號的強度大小來判斷在牛奶中三聚氰胺分子含量的多少，并且該方法的檢測限度符合牛奶中三聚氰胺檢測的國家標準，而且檢測時，不需要制備金或銀溶膠的sers基底，而是使用傾斜排列的銀納米棒陣列基底，可以使檢測的靈敏度更高、更穩(wěn)定，大大減少了外界溫度、樣品本身對檢測定性及定量的影響，使檢測更便捷，而且不需要對制備的納米顆粒進行反復清洗，操作過程簡單。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術手段：

本發(fā)明提供一種用于檢測液態(tài)牛奶中三聚氰胺含量的方法，包括以下步驟：

a.取1ml樣品牛奶，在樣品牛奶中加入40ul濃度為1mol/l的氫氧化鈉水溶液，混勻后加入1ml乙酸乙酯；

b.將步驟a中的混合液在8000r/min的轉(zhuǎn)速下離心30秒，取出1ml上清液加入ph值為3的氯化氫水溶液1ml，靜置1min；

c.將2ul步驟b中得的溶液的下層清液滴加到銀納米棒陣列基底上，使所述溶液濃縮，得到檢測液；

d.將步驟c中得到的檢測液進行拉曼散射檢測，設置激光功率為100mw，積分時間為10s，測得檢測液的sers光譜；

e.進行定性檢測，根據(jù)步驟d中得到的檢測液的sers光譜，以685cm-1對應尖峰為三聚氰胺的特征峰；

f.進行定量檢測，根據(jù)步驟d中得到的檢測液的sers光譜，以685cm-1對應峰強度進行三聚氰胺含量計算。

進一步的，所述步驟c中銀納米棒陣列基底傾斜排列。

進一步的，所述銀納米棒陣列基底的銀納米棒相對于玻璃片法線方向的傾斜角74.2±1.1度，長度約1030.7±53.4nm，直徑約66.8±5.2nm。

有益效果：

本發(fā)明根據(jù)三聚氰胺分子的直接表面增強拉曼信號完成了在牛奶中對其的檢測。在混合體系中，由于該方法是采集三聚氰胺的直接信號，不會受到牛奶中其他物質(zhì)的干擾。并且該發(fā)明克服了以往繁瑣的樣品前處理步驟，省時，簡單。另外，本發(fā)明是利用表面增強拉曼光譜技術對待測物進行檢測的，該技術是一種超靈敏檢測技術，使得本發(fā)明可以在混合體系中三聚氰胺含量很低的情況下將其檢測出來。本發(fā)明操作簡單，對牛奶中的三聚氰胺分子的檢測能力可以達到1mg/l，符合國家標準，而且檢測時，不需要制備金或銀溶膠的sers基底，而是使用傾斜排列的銀納米棒陣列基底，可以使檢測的靈敏度更高、更穩(wěn)定，大大減少了外界溫度、樣品本身對檢測定性及定量的影響，使檢測更便捷，而且不需要對制備的納米顆粒進行反復清洗，操作過程簡單。可以為食品的監(jiān)督檢查和食品生產(chǎn)的實時監(jiān)測提供一種新的方法。

附圖說明

圖1為實施1中三聚氰胺濃度為10mg/l的牛奶樣品的sers光譜；

圖2為實施例1中經(jīng)過前處理后對比得到的三聚氰胺的sers光譜；

圖3為含有不同濃度三聚氰胺牛奶樣品檢測液的sers光譜；

圖4為牛奶中三聚氰胺的標準工作曲線。

具體實施方式

下面結合附圖及具體實施例對本發(fā)明做進一步說明。

實施例1：(1)在無污染的牛奶樣品中加入一定質(zhì)量的三聚氰胺分子，最終得到濃度為10mg/l的牛奶樣品，取1ml樣品牛奶(加標10mg/l)中加入40ul濃度為1mol/l的氫氧化鈉水溶液，混勻后加入1ml乙酸乙酯；將上述混合液在8000轉(zhuǎn)每分鐘的轉(zhuǎn)速下離心30秒，取出1ml上清液加入1ml氯化氫水溶液(ph＝3)，靜置1min。將2ul下層清液滴加到銀納米棒陣列基底上，所述銀納米棒陣列基底傾斜排列，所述銀納米棒陣列基底的銀納米棒相對于玻璃片法線方向的傾斜角74.2±1.1度，長度約1030.7±53.4nm，直徑約66.8±5.2nm，設置激光功率為100mw，積分時間為10s，測得三聚氰胺的sers光譜，如圖1所示。

經(jīng)過前處理后，對比無三聚氰胺牛奶與有三聚氰胺牛奶的檢測液的sers光譜，結果顯示三聚氰胺在685cm-1處有一明顯尖峰，如圖2所示，該位置處尖峰確為三聚氰胺的特征峰，其主要來源于三聚氰胺雜環(huán)的呼吸振動。

(2)在無污染的牛奶樣品中加入不同質(zhì)量的三聚氰胺分子，最終得到濃度為0mg/l、1mg/l、2mg/l、5mg/l的牛奶樣品，對每樣牛奶樣品按照以下步驟進行操作：

a.取1ml樣品牛奶，在樣品牛奶中加入40ul濃度為1mol/l的氫氧化鈉水溶液，混勻后加入1ml乙酸乙酯；

b.將步驟a中的混合液在8000r/min的轉(zhuǎn)速下離心30秒，取出1ml上清液加入ph值為3的氯化氫水溶液1ml，靜置1min；

c.將2ul步驟b中得的溶液的下層清液滴加到銀納米棒陣列基底上，所述銀納米棒陣列基底傾斜排列，所述銀納米棒陣列基底的銀納米棒相對于玻璃片法線方向的傾斜角74.2±1.1度，長度約1030.7±53.4nm，直徑約66.8±5.2nm，使所述溶液濃縮，得到檢測液；

d.將步驟c中得到的檢測液進行拉曼散射檢測，設置激光功率為100mw，積分時間為10s，測得檢測液的sers光譜；

得到如圖3所示的含有不同濃度三聚氰胺牛奶樣品檢測液的sers光譜。

通過grams光譜分析軟件對獲得的樣品信號進行分析，選擇gaussian和lorentz混合線性對685cm-1處三聚氰胺特征峰進行解峰處理，獲得該特征峰的實際強度。將不同濃度三聚氰胺的特征峰強度隨著三聚氰胺在牛奶中含量的不同繪制出三聚氰胺在牛奶樣品中的sers信號的標準工作曲線。通過origin8.5數(shù)據(jù)處理和繪圖軟件進行線性擬合，結果顯示該方法在濃度為1mg/l至20mg/l時具有良好的線性關系，線性度為0.99，如圖4所示。

為了確定該方法對牛奶中三聚氰胺的檢出限，獲取1800cm-1～1999cm-1范圍內(nèi)背景信號的相對標準偏差值，將其作為衡量實際檢測中是否檢測出三聚氰胺的標準。結果表明，該方法可在牛奶中檢測出濃度為1mg/l的三聚氰胺信號，符合國家規(guī)定的2.5mg/l的最高檢出限，如圖4所示。