本發(fā)明涉及生物制品檢測
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地，涉及一種檢測類毒素絮狀單位的裝置及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：自1888年Roux和Yersin發(fā)現(xiàn)白喉是由白喉?xiàng)U菌產(chǎn)生的毒性很強(qiáng)的外毒素引起的，和次年北里柴三郎發(fā)現(xiàn)了破傷風(fēng)外毒素是致病因子后，才開始了毒素與類毒素的研究。類毒素是一種用物理或化學(xué)等方法處理，使毒素失去毒性而保持抗原性的蛋白質(zhì)，它可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，并能與之發(fā)生特異性反應(yīng)。它是一種自動免疫制劑，用于細(xì)菌毒素性疾病的預(yù)防，包括白喉、破傷風(fēng)、肉毒、氣性壞疽、葡萄球菌和霍亂等類毒素。使用最廣泛的是白喉和破傷風(fēng)類毒素。絮狀單位的測定為常規(guī)測定類毒素與相應(yīng)抗毒素的方法，最早由Ramont提出，后經(jīng)Dean-Webb和Levin-wyman改進(jìn)，并在各國得到廣泛的應(yīng)用，已成為類毒素測定的一個常規(guī)方法，但上述三種方法所得到的等當(dāng)比不同。在絮狀試驗(yàn)時如以類毒素作為標(biāo)準(zhǔn)品，則抗毒素在試驗(yàn)中只起到一個試劑的作用而不是標(biāo)準(zhǔn)的作用，就可避免上述差異。有了類毒素標(biāo)準(zhǔn)品也就可以用試管法以外的其他免疫學(xué)方法來測定絮狀單位(Lf)值。傳統(tǒng)的絮狀單位測定法依據(jù)《中華人民共和國藥典》三部(通則3506)進(jìn)行類毒素絮狀單位測定，用于類毒素有效成分的質(zhì)量控制?？苟舅嘏c預(yù)先標(biāo)定的類毒素在適當(dāng)?shù)暮俊⒈壤?、溫度、反?yīng)時間等條件下，在試管中發(fā)生抗原-抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可見的絮狀凝集反應(yīng)，根據(jù)類毒素的絮狀單位值確定抗毒素的絮狀效價，試驗(yàn)步驟均由人工操作完成，在結(jié)果判定時需要檢定人員不斷觀察小瓶中是否產(chǎn)生絮狀沉淀。由于現(xiàn)象細(xì)微，在觀察時需要將小瓶逐瓶取出進(jìn)行。在這個過程中，一方面將小瓶取出時的晃動可能會帶來瓶中液體的擾動，從而影響實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象；另一方面，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判定是根據(jù)瓶中出現(xiàn)絮狀反應(yīng)的先后而得出，在逐瓶觀察時有一定的延時，這種延時會干擾最終結(jié)果的判定；再次檢測用標(biāo)準(zhǔn)抗毒素通常采用外購國家標(biāo)準(zhǔn)品，依照本法檢測標(biāo)準(zhǔn)抗毒素每個待檢樣品至少需要7.5ml左右，檢測成本相對較高。絮狀單位檢測作為類毒素有效性成分控制的重要指標(biāo)之一，有著不可替代的地位。如果按照傳統(tǒng)的絮狀單位檢測方法進(jìn)行各工序段質(zhì)量控制，需要耗費(fèi)大量的人力和物力，且工作效率比較低，不適用于規(guī)?；a(chǎn)工序樣品控制。鑒于傳統(tǒng)方法操作復(fù)雜、主觀因素多、原料消耗大、檢測成本高等弊端，有必要開發(fā)一種簡單易行的絮狀單位檢測方法以解決傳統(tǒng)方法的諸多弊端，用于類毒素制備過程中有效成分的質(zhì)量控制，能快速、準(zhǔn)確的檢測類毒素的絮狀單位。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種操作簡單、可高通量檢測、且檢測結(jié)果準(zhǔn)確的類毒素絮狀單位檢測方法及檢測時所使用的裝置。本發(fā)明首先提供一種檢測類毒素絮狀單位的裝置，由樣品轉(zhuǎn)盤、試劑隔間、反應(yīng)模塊和記錄裝置構(gòu)成，所述反應(yīng)模塊內(nèi)設(shè)置有溫控裝置、激光光源和散射比濁探測儀；所述樣品轉(zhuǎn)盤與試劑隔間和反應(yīng)模塊實(shí)現(xiàn)自動電連接，樣品轉(zhuǎn)盤上的樣品可自動轉(zhuǎn)入反應(yīng)模塊；試劑隔間和反應(yīng)模塊實(shí)現(xiàn)自動電連接；反應(yīng)模塊和記錄裝置自動電連接。其中，樣品轉(zhuǎn)盤呈圓盤形，可獨(dú)立放置標(biāo)準(zhǔn)品及待測樣品。樣品轉(zhuǎn)盤內(nèi)同時放置8個樣品擱架，每個樣品擱架放置9個反應(yīng)杯。試劑隔間內(nèi)用于放置反應(yīng)液和針對不同類毒素的特異性抗體。反應(yīng)模塊側(cè)壁有激光光源，激光光源和散射比濁探測儀在反應(yīng)模塊內(nèi)互相呈90°設(shè)置；反應(yīng)模塊設(shè)置的激光光源可以根據(jù)相對時間的信號變動用來進(jìn)行結(jié)果計算，記錄特異的信號變化。本發(fā)明裝置中，激光光源的激光波長可調(diào)節(jié)，為600-1000nm波長。本發(fā)明提供了一種檢測類毒素絮狀單位的方法，應(yīng)用本發(fā)明上述裝置對待測類毒素樣品進(jìn)行檢測。具體操作為：稀釋標(biāo)準(zhǔn)抗毒素使其濃度高于待檢測的類毒素濃度，放置在試劑隔間，同時把反應(yīng)液一并放入試劑隔間；分別將標(biāo)準(zhǔn)類毒素、待測類毒素樣品稀釋放入樣品轉(zhuǎn)盤，從樣品轉(zhuǎn)盤自動轉(zhuǎn)移至反應(yīng)模塊中進(jìn)行測定，通過側(cè)壁發(fā)出的激光光源記錄整個類毒素與抗毒素反應(yīng)情況；將待測類毒素樣品反應(yīng)值自動帶入已經(jīng)擬合的標(biāo)準(zhǔn)類毒素的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程內(nèi)，計算出待測類毒素絮狀單位結(jié)果。進(jìn)一步地，控制反應(yīng)模塊的溫度為37℃±0.5℃，調(diào)節(jié)激光光源發(fā)出的激光波長為600-1000nm。優(yōu)選地，實(shí)際檢測時，激光波長為670nm。當(dāng)類毒素與抗毒素在液相中特異結(jié)合，產(chǎn)生一定大小的復(fù)合物，形成光的折射或吸收，測定這種折射或吸收后的散射光作為計算單位，當(dāng)儀器測定到某一時間單位內(nèi)形成的速率下降時，即出現(xiàn)速率峰，該峰值的高低，即代表類毒素的量。據(jù)此原理，進(jìn)一步地，本發(fā)明采用速率散射法分析類毒素與抗毒素反應(yīng)過程，記錄特異的信號值，根據(jù)相對時間的信號變動進(jìn)行結(jié)果計算。本發(fā)明提供了上述類毒素絮狀單位檢測裝置在制備類毒素中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了上述方法在類毒素制備中的應(yīng)用。本發(fā)明克服了傳統(tǒng)絮狀單位檢測方法操作繁瑣，結(jié)果判定可控性差、物料消耗大和檢測效率低等缺點(diǎn)，提供一種新的類毒素絮狀單位檢測裝置。整套裝置可以實(shí)現(xiàn)全自動化檢測，減少人員操作誤差，提高檢測精密度。采用獨(dú)立的反應(yīng)模塊進(jìn)行測定，保證反應(yīng)條件恒溫，不受室溫波動影響結(jié)果?？梢宰詣佑涗涱惗舅睾投舅氐乃俾史磻?yīng)值，減少人員記錄時間，以及肉眼識別絮狀反應(yīng)的判定誤差。反應(yīng)模塊設(shè)置激光光源可以根據(jù)相對時間的信號變動被用來進(jìn)行結(jié)果計算，能記錄特異的信號變化，根據(jù)類毒素和抗毒素的反應(yīng)比例，可以通過速率免疫濁度精值確量化待測類毒素絮狀單位檢測結(jié)果。本發(fā)明的檢測類毒素絮狀單位的裝置可以同時檢測多批次不同濃度樣品，提高檢測效率。整個檢測及結(jié)果判定過程均由檢測裝置自動完成，避免了人為操作及結(jié)果判定誤差，增加檢測結(jié)果的可控性，且每個樣品單次理論檢測抗毒素用量相對傳統(tǒng)方法減少20倍以上的使用量，大大降低了原材料成本。將其應(yīng)用于類毒素絮狀單位檢測方法，可降低生物制品檢定成本和勞動力成本，提高檢定效率和控制質(zhì)量?；谏鲜黾夹g(shù)方案，本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：1.不受批量限制減少人為誤差。2.不受外界環(huán)境溫度變化影響。3.可以獨(dú)立進(jìn)行反應(yīng)并記錄速率反應(yīng)情況的數(shù)據(jù)，同時根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)類毒素濃度自動計算出樣品絮狀單位結(jié)果。節(jié)約了原本需要人來觀察的時間，減少人力。檢測結(jié)果客觀、準(zhǔn)確。4.采用可反復(fù)使用的反應(yīng)杯作反應(yīng)器皿，可以反復(fù)利用節(jié)約成本。5.采用速率散射法分析類毒素與抗毒素反應(yīng)過程，根據(jù)相對時間的信號變動被用來進(jìn)行結(jié)果計算，能記錄特異的信號值，排除因污染顆粒、氣泡及非特異性沉淀物引起的干擾性信號，提高了準(zhǔn)確度。6.本裝置檢測類毒素絮狀單位，其反應(yīng)體系相對傳統(tǒng)檢測方法縮小數(shù)十倍，可以大大節(jié)約待測樣本和抗毒素原料用量，降低檢測成本。7.自動化免疫分析快速、簡便，結(jié)果計算時間短，便于及時將各種信息收集，又可節(jié)約大量人力、物力。8.本發(fā)明在樣品轉(zhuǎn)盤內(nèi)同時放置8個樣品擱架，每個樣品擱架放置9個反應(yīng)杯，裝置單次試驗(yàn)最多可以同時檢測72個樣品，較傳統(tǒng)方法單次試驗(yàn)只能檢測1個樣品，檢測效率大幅提高，利于大批量樣品的處理。附圖說明圖1為本發(fā)明檢測類毒素絮狀單位裝置結(jié)構(gòu)示意圖，其中1：樣品轉(zhuǎn)盤，2：試劑隔間，3：反應(yīng)模塊，4：記錄裝置，5：溫控裝置，6：激光光源，7：散射比濁探測儀。具體實(shí)施方式以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，實(shí)施例中所用的生化試劑均為市售。實(shí)施例1絮狀單位檢測類毒素的裝置本檢測裝置由樣品轉(zhuǎn)盤、試劑隔間、反應(yīng)模塊和記錄裝置組成。如圖1所示。所述樣品轉(zhuǎn)盤呈圓盤形可以獨(dú)立放置標(biāo)準(zhǔn)品及待測樣品，試劑隔間內(nèi)放置反應(yīng)液及特異性抗體，樣品轉(zhuǎn)盤與反應(yīng)模塊通過自動化管路電連接，試劑隔間與反應(yīng)模塊通過自動化管路電連接。反應(yīng)模塊設(shè)置有溫控裝置，反應(yīng)模塊側(cè)壁有激光光源，與側(cè)壁激光光源呈90°處設(shè)置有散射比濁探測儀，散射比濁探測儀與記錄裝置電連接。在樣品轉(zhuǎn)盤內(nèi)同時放置8個樣品擱架，每個樣品擱架放置9個反應(yīng)杯。使用本發(fā)明裝置時，首先將標(biāo)準(zhǔn)抗毒素稀釋成適當(dāng)濃度，一般抗毒素濃度應(yīng)高于待檢測的類毒素濃度，加入預(yù)制的加樣盒內(nèi)，然后放置在試劑隔間。同時把反應(yīng)液一并放入試劑隔間；然后，將標(biāo)準(zhǔn)類毒素或/和待測樣品適當(dāng)稀釋，分別加入至反應(yīng)杯中，在反應(yīng)模塊中進(jìn)行測定，通過側(cè)壁發(fā)出的激光光源記錄整個類毒素與抗毒素反應(yīng)情況；最后，將待測類毒素樣品反應(yīng)值自動帶入已經(jīng)擬合的標(biāo)準(zhǔn)類毒素的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出待測類毒素絮狀單位結(jié)果。本檢測裝置反應(yīng)溫度通常設(shè)置在37℃，單個樣品檢測時間為1.5分鐘，單次試驗(yàn)可以同時檢測72個樣品，具備完成規(guī)?；瘷z定任務(wù)的能力，且操作簡便、工作效率高。實(shí)施例2絮狀單位檢測用標(biāo)準(zhǔn)白喉類毒素制備、純度鑒定和標(biāo)定采用白喉?xiàng)U菌PW8株(CMCC38007)或由PW8株篩選的產(chǎn)毒高、免疫力強(qiáng)的菌種接種于液體培養(yǎng)基，發(fā)酵后收獲培養(yǎng)液，精制后加入適量甲醛溶液，置適宜溫度進(jìn)行脫毒，脫毒到期后以得到白喉類毒素。(可參見：《中華人民共和國藥典》三部“吸附白喉疫苗”)。對于上述制備的白喉類毒素，經(jīng)純度鑒定每mg蛋白氮高于1500Lf，并將該類毒素2-8℃下放置。其中，純度檢測方法包括絮狀單位檢測和蛋白氮含量檢測方法，操作流程參見《中華人民共和國藥典》三部通則3506和通則0704。采用外購中國食品藥品檢定研究院發(fā)布的“白喉絮狀反應(yīng)抗毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品”進(jìn)行絮狀單位標(biāo)定，經(jīng)雙人多次標(biāo)定后對上述制備的白喉類毒素賦值。為保證檢測系統(tǒng)持續(xù)穩(wěn)定、可靠，對上述制備的白喉類毒素進(jìn)行37℃7天、14天、21天、28天、30天、60、90天放置，以觀察其加速穩(wěn)定性情況，便于制定2-8℃放置的有效期。結(jié)果顯示37℃放置90天絮狀單位結(jié)果與2-8℃放置90天無變化，表明制備的白喉類毒素穩(wěn)定性良好，2-8℃放置有效期可以暫定為1年。當(dāng)然，本領(lǐng)域技術(shù)人員明白，采用上述方法也可以制備出其它類毒素，且制備出的類毒素可以用于下面的實(shí)施例中。實(shí)施例3白喉抗毒素的制備、純化及凍干將實(shí)施例2獲得的白喉類毒素用弗氏完全佐劑等體積混合并乳化，以用于免疫綿羊，從而制備出抗白喉的血清(含抗白喉的多克隆抗體)。使用絮狀單位法對抗白喉血清進(jìn)行測定。將實(shí)施例2獲得的白喉類毒素稀釋至100Lf/ml，量取每ml含100Lf的白喉類毒素溶液0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml，分別加入絮狀反應(yīng)管，精密量取適當(dāng)比例稀釋后的抗白喉的血清1ml，快速準(zhǔn)確的加入上述各絮狀反應(yīng)管內(nèi)，搖勻，置45-50℃水域中，連續(xù)觀察，并記錄絮狀出現(xiàn)次序和時間。再取5支絮狀反應(yīng)管，重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)，將最先出絮狀之管放中間，前后各加兩管不同量白喉類毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每管間隔0.05ml，再向各管中加入抗白喉血清1ml，觀察絮狀出現(xiàn)情況，從而計算出抗白喉的血清絮狀單位結(jié)果。針對上述獲得的含抗白喉多克隆抗體的血清進(jìn)行如下的純化與純度分析。采用飽和硫酸銨沉淀的方法對抗白喉多克隆抗體進(jìn)行純化，將白喉多克隆抗體中加入等體積的飽和硫酸銨2-8℃靜置2小時，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，用硼酸緩沖液復(fù)溶，0.22μm濾器過濾后得到抗白喉多克隆抗體純化液。將適當(dāng)稀釋的抗白喉多克隆抗體進(jìn)行SDS-PAGE還原型電泳，經(jīng)分析，純化后羊抗白喉多克隆抗體在約48KD與22KD有兩條主蛋白帶，分別為多克隆抗體的重鏈與輕鏈；純化抗體的純度為85.2％，純度大于80％，純度較高。通過上述制備流程與純化方法，可以制備滿足絮狀單位試驗(yàn)的原料要求。為保證抗白喉多克隆抗體活性穩(wěn)定，對其進(jìn)行凍干處理。分別在制備的血清中加入終濃度為3％的蔗糖溶液和甘氨酸溶液，混勻后分裝于2ml西林瓶中，半加蓋無菌瓶塞，-40℃預(yù)凍24小時，預(yù)凍結(jié)束后轉(zhuǎn)至凍干機(jī)抽真空凍干48小時，凍干結(jié)束后在真空狀態(tài)下壓實(shí)瓶塞，用壓蓋機(jī)壓蓋。隨機(jī)抽取30支凍干抗白喉多克隆抗體放置在37℃7天、14天、21天、28天、60天和90天以考察其加速穩(wěn)定性情況，便于參照加速穩(wěn)定性結(jié)果制定2-8℃放置的有效期。結(jié)果顯示37℃放置90天絮狀單位結(jié)果與2-8℃放置90天無變化，表明制備的抗白喉多克隆抗體穩(wěn)定性良好，2-8℃放置有效期可以暫定為1年。從上可以看出，通過上述方法制備了與白喉類毒素具有高活性且穩(wěn)定好抗毒素，可以用于絮狀單位檢測。實(shí)施例4絮狀單位檢測裝置操作程序?qū)τ诒景l(fā)明的絮狀單位檢測裝置，可采用如下步驟進(jìn)行使用，檢測白喉類毒素樣品：1)取出待檢測樣品、白喉類毒素標(biāo)準(zhǔn)品、抗白喉多克隆抗體，室溫平衡15-30分鐘；2)將白喉類毒素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至5、10、20、30、40、50、60Lf/ml，采用樣品稀釋到該類毒素含量范圍；3)200μl/瓶分別加入反應(yīng)杯，然后放入樣品轉(zhuǎn)盤中；4)將抗白喉多克隆抗體作1:10稀釋放入試劑隔間；5)開啟實(shí)施例1的裝置，對白喉類毒素標(biāo)準(zhǔn)品各濃度進(jìn)行速率值測定，根據(jù)速率反應(yīng)值與類毒素濃度自動擬合成標(biāo)準(zhǔn)曲線，并顯示相關(guān)系數(shù)值。6)將樣品稀釋至標(biāo)準(zhǔn)品濃度范圍內(nèi)，吸取200μl加入反應(yīng)杯，然后放入樣品轉(zhuǎn)盤中；7)再次開啟本裝置，對待測樣品速率值進(jìn)行測定，記錄裝置根據(jù)擬合好的標(biāo)準(zhǔn)曲線自動計算出待測樣品濃度。上述操作程序和/或類毒素的計算方法可以為本發(fā)明裝置的說明書而成為本裝置的一部分。該絮狀單位檢測裝置操作過程已經(jīng)實(shí)現(xiàn)高度的自動化，絮狀反應(yīng)和結(jié)果判定均在相對獨(dú)立的空間內(nèi)進(jìn)行，避免人為誤差導(dǎo)致結(jié)果波動，明顯優(yōu)于傳統(tǒng)絮狀單位檢測靠人工操作、判定結(jié)果的實(shí)驗(yàn)流程，提高了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度，減少實(shí)驗(yàn)誤差及人為判定結(jié)果的主觀因素；另外，按照該絮狀單位檢測裝置檢測一份待測樣本所需要的標(biāo)準(zhǔn)抗毒素量約為50μl，較傳統(tǒng)絮狀單位檢測方法所需標(biāo)準(zhǔn)抗毒素的量7500μl，體積縮小了約150倍，大大節(jié)約了原材料的成本；再次，該裝置將標(biāo)準(zhǔn)白喉類毒素定標(biāo)完成后，檢測一份待測樣本的時間約為1.5分鐘，而傳統(tǒng)絮狀單位檢測方法檢測一份待測樣本至少需要15分鐘，該裝置檢測效率較傳統(tǒng)方法至少提高10倍以上。綜上所述，操作本絮狀單位檢測裝置，較傳統(tǒng)絮狀單位檢測方法具有以下優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果準(zhǔn)確度高、人為誤差因素小、節(jié)約原材料成本、提高工作效率。實(shí)施例5絮狀單位檢測裝置的線性范圍、線性、特異性、靈敏度、準(zhǔn)確性、精密性與重復(fù)性檢測對于本實(shí)施例中所用到的各試劑或材料，如標(biāo)準(zhǔn)類毒素和抗毒素等，如果上述各實(shí)施例菌體涉及到了其制備，則本實(shí)施例中所用到的試劑或材料即是上述實(shí)施例制備的試劑或材料。1)靈敏度與線性見表1將實(shí)施例2中的白喉類毒素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至100Lf/ml，然后在分別稀釋至60、50、40、30、20、10、5Lf/ml，加入樣品反應(yīng)杯，并采用實(shí)施例3的程序進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果如下：表1絮狀單位檢測裝置的方法靈敏度與線性試驗(yàn)結(jié)果絮狀單位在5-60Lf/ml時，連續(xù)7個點(diǎn)線性R2≥0.98，線性良好；50Lf/ml的速率反應(yīng)值≥陰性對照+10倍SD，該檢測裝置的檢測靈敏度為5Lf/ml，較傳統(tǒng)方法檢測靈敏度提升1倍，具有更高的檢出限。2)特異性試驗(yàn)采用實(shí)施例4的程序?qū)Γ浩苽L(fēng)類毒素、百日咳毒素原液、百日咳絲狀血凝素原液、百日咳粘附素原液、脊髓灰質(zhì)炎病毒收獲液、b型流感嗜血桿菌原液進(jìn)行特異性試驗(yàn)，檢測結(jié)果見表2。表2檢測絮狀單位方法特異性試驗(yàn)速率反應(yīng)值結(jié)果樣品名稱速率值1速率值2絮狀單位結(jié)果(Lf/ml)樣品稀釋液10.512.1<5白喉發(fā)酵液(稀釋5倍后)251.2265.3135白喉類毒素(稀釋20倍后)452.5463.2920破傷風(fēng)類毒素12.212.1<5百日咳毒素原液10.611.0<5百日咳絲狀血凝素原液13.112.9<5百日咳粘附素原液13.513.2<5脊髓灰質(zhì)炎病毒收獲液10.210.9<5b型流感嗜血桿菌原液11.411.9<5結(jié)果顯示：該檢測裝置僅對白喉發(fā)酵液和白喉類毒素反應(yīng)，而對樣品稀釋液、破傷風(fēng)類毒素、百日咳毒素原液、百日咳絲狀血凝素原液、百日咳粘附素原液、脊髓灰質(zhì)炎病毒收獲液和b型流感嗜血桿菌原液不反應(yīng)，該檢測裝置對白喉類毒素有較高的特異性。3)準(zhǔn)確性試驗(yàn)稀釋標(biāo)準(zhǔn)白喉類毒素至高、中、低三個濃度，使理論值絮狀單位值分別為10Lf/ml、30Lf/ml、50Lf/m，采用實(shí)施例3的實(shí)驗(yàn)程序，檢測上述稀釋的絮狀單位，單人獨(dú)立稀釋6次，比較檢測結(jié)果與理論值的差異，統(tǒng)計各濃度樣品的檢測值的準(zhǔn)確性。結(jié)果如下：表3白喉類毒素絮狀單位檢測方法準(zhǔn)確性試驗(yàn)結(jié)果顯示，標(biāo)準(zhǔn)類毒素稀釋至高(10Lf/ml)、中(30Lf/ml)、低(50Lf/ml)三個濃度，準(zhǔn)確性在90-110％之間，準(zhǔn)確性較高。4)精密性試驗(yàn)將標(biāo)準(zhǔn)白喉類毒素雙人分別稀釋，使理論絮狀單位依次為10Lf/ml、30Lf/ml、50Lf/m，采用實(shí)施例3的實(shí)驗(yàn)程序，檢測上述稀釋樣品的絮狀單位，其中沒人單獨(dú)稀釋6次，分析變異系數(shù)(CV％)即檢測精密性。結(jié)果如下：表4絮狀單位檢測方法精密性試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果顯示，標(biāo)準(zhǔn)類毒素稀釋至高(10Lf/ml)、中(30Lf/ml)、低(50Lf/ml)三個濃度，不同人試驗(yàn)間的檢測結(jié)果的變異系數(shù)均小于10％，精密性較高。實(shí)施例6絮狀單位檢測裝置的應(yīng)用本發(fā)明的檢測裝置包括：樣品轉(zhuǎn)盤、試劑隔間、反應(yīng)模塊和記錄裝置，還需要包含1套特異性的標(biāo)準(zhǔn)類毒素作為標(biāo)準(zhǔn)品，和/或說明書為1份。同實(shí)施例2、3一樣，對于本實(shí)施例中所用到的各試劑或材料，如特異性的類毒素和抗毒素等，如果上述各實(shí)施例中所用到的試劑或材料即是上述實(shí)施例所制備的試劑或材料。應(yīng)用該檢測裝置并根據(jù)實(shí)施例4的操作流程進(jìn)行白喉毒素和白喉類毒素純化前、后樣品的絮狀單位檢測，以證明該檢測裝置對白喉毒素較純樣品與雜的樣品的適用性，方法對于白喉純化中間產(chǎn)品的監(jiān)控性。1)白喉毒素純化前、后樣品絮狀單位檢測分析檢測白喉毒素純化前、后樣品的絮狀單位，分析該方法對白喉毒素的檢出性，結(jié)果見下表。表5白喉毒素純化前后樣品絮狀單位檢測結(jié)果結(jié)果顯示：對于白喉毒素A、B、C三批純化前后樣品具有較好的反應(yīng)性和檢出性。2)白喉毒素純化中間產(chǎn)品絮狀單位含量分析檢測三批白喉毒素純化重甲產(chǎn)品的絮狀單位，計算單位蛋白氮濃度下純度的變化，分析純化工藝是否可以優(yōu)先的去除無關(guān)蛋白，見表6。表6白喉毒素純化前后樣品絮狀單位檢測結(jié)果隨著白喉毒素純化工藝不斷深化，檢測到的單位蛋白氮中的絮狀單位整體呈上升趨勢，說明該檢測裝置能檢測不同含量的絮狀單位，能反映工藝的純化趨勢，驗(yàn)證了本裝置的有效性。3)白喉類毒素絮狀單位檢測值與藥典方法比較用該裝置檢測三批類毒素絮狀單位，同時用傳統(tǒng)的絮狀單位檢測方法(參見《中華人民共和國藥典》三部通則3506)檢測相同樣品，結(jié)果統(tǒng)計見表7。表7白喉類毒素絮狀單位檢測結(jié)果比較比較連續(xù)生產(chǎn)的三批白喉類毒素用本裝置檢測與傳統(tǒng)絮狀單位(藥典)檢測結(jié)果，兩種方法絮狀單位檢測結(jié)果的變異系數(shù)均小于5％，表明本裝置檢測結(jié)果與藥典方法無顯著差異，驗(yàn)證了裝置的適用性。按照傳統(tǒng)絮狀單位檢測方法的檢測精度是2Lf/ml，上述A、B、C樣品均需要稀釋20倍后檢測，那么檢測精度將下降至40Lf/ml，而本絮狀單位檢測裝置的檢測精度高達(dá)0.1Lf/ml，稀釋20倍樣品的檢查精度也可高達(dá)2Lf/ml，是傳統(tǒng)方法檢測精度的20倍，證明該方法檢測精度遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)方法。結(jié)論：傳統(tǒng)的絮狀單位檢測方法在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室中，判定絮狀試驗(yàn)的終點(diǎn)是非常主觀的。混合物置于一定溫度的水浴箱中，幾分鐘后，不時地取出試管，用放大鏡觀察肉眼可見的絮狀出現(xiàn)。記錄首先出現(xiàn)絮狀那一管的時間，有時甚至首先出現(xiàn)在一個或二個管以上。通常認(rèn)為管中類毒素的量相當(dāng)于首先出現(xiàn)絮狀的混合物中抗毒素的單位數(shù)(Lf當(dāng)量)。為了獲得更客觀的絮狀單位值和證實(shí)本裝置的優(yōu)越性，對白喉類毒素純化過程樣品進(jìn)行監(jiān)控，反應(yīng)過程純度變化趨勢與工藝要求相符。同時，用本裝置和傳統(tǒng)檢測方法比較相同樣品絮狀單位檢測值，結(jié)果無顯著差異。本檢測裝置具有操作簡便、效率高、檢測成本低、靈敏度高、結(jié)果精準(zhǔn)等特點(diǎn)，可用于類毒素絮狀單位檢測，能有效的反應(yīng)類毒素制備工藝過程樣品的絮狀單位變化趨勢，更有利于指導(dǎo)類毒素的生產(chǎn)過程。雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3