本發(fā)明涉及一種檢測方法，具體是一種雞禽流感的檢測試劑盒。

背景技術(shù)：

雞禽流感是由正黏病毒科A型流感病毒引起的一種禽類的急性、烈性傳染病，除了可感染禽類外，還可感染人、豬和馬等多種動物，被 OIE列為A類傳染病。禽流感病毒 (AIV)屬于A型流感病毒，禽流感病毒(AIV)變異頻繁，血清亞型眾多。 根據(jù)HA抗原性差異分為16個HA亞型?？乖儺愋詮?，宿主范圍廣泛，亞型間無交叉保護性，使得禽流感頻繁暴發(fā)，成為養(yǎng)禽業(yè)的一大毀滅性疾病。

高致病性禽流感主要是由H5 或H7 亞型AIV 引起的，潛伏期極短，突然爆發(fā)，多不 見任何臨床癥狀而突然死亡，發(fā)病率和死亡率可高達(dá) 100％，給養(yǎng)禽業(yè)帶來嚴(yán)重經(jīng)濟損失， 另外還可感染人，甚至導(dǎo)致死亡。據(jù)世界衛(wèi)生組織 (WHO) 報道，截止到 2009 年5 月 22 日，全世界共有H5N1 亞型禽流感病毒感染人 429 例，死亡 262 例 ；我國共有感染病例 38 例，死亡25例。目前，我國部分地區(qū)以H5亞型為主的中低致病力禽流感的流行，能造成雞產(chǎn)蛋量下降，給我國養(yǎng)禽業(yè)造成很大的經(jīng)濟損失，這一點已引起國內(nèi)各界的廣泛關(guān)注。所以早期快速檢測無疑是預(yù)防、控制禽流感的前提條件，尤其是針對H5、H7亞型的AIV。病毒分離、血清學(xué)試驗至今仍是診斷AI和對AIV進(jìn)行定型普遍采用的方法。但這些方法操作繁瑣 復(fù)雜 ；難以對AI進(jìn)行快速診斷 ；十分不利于AI的防治。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種雞禽流感的檢測試劑盒，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種雞禽流感的檢測試劑盒，含有：固定有與H5型禽流感病毒核蛋白有抗原抗體反應(yīng)而與H7型禽流感病毒核蛋白實質(zhì)上沒有抗原抗體反應(yīng)的第一抗體的層析介質(zhì)、以及與H5型禽流感病毒核蛋白有抗原抗體反應(yīng)而與H7型禽流感病毒核蛋白實質(zhì)上沒有抗原抗體反應(yīng)的第二抗體和標(biāo)記物結(jié)合而成的標(biāo)記試劑。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述第一抗體為與由 SDS- 聚丙烯酰胺凝膠電泳所分離的全長的H5型禽流感病毒核蛋白在 Western blot 法中沒有抗原抗體反應(yīng)的抗體，第二抗體為與由 SDS- 聚丙烯酰胺凝膠電泳所分離的全長的H5型禽流感病毒核蛋白在 Western blot法中有抗原抗體反應(yīng)的抗體。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述第一抗體為1種或 1 種以上的單克隆抗體。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述第一抗體為通過對A型流感病毒H5N1亞型的全長的核蛋白進(jìn)行免疫而得到的抗體。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：一種雞禽流感的的檢測方法，其為利用免疫層析法的檢測方法，使用了固定有與H5型禽流感病毒核蛋白有抗原抗體反應(yīng)而與H7型禽流感病毒核蛋白實質(zhì)上沒有抗原抗體反應(yīng)的 第一抗體的層析介質(zhì)、以及與H5型禽流感病毒核蛋白有抗原抗體反應(yīng)而與H7型禽流感病毒核蛋 白實質(zhì)上沒有抗原抗體反應(yīng)的第二抗體和標(biāo)記物結(jié)合而成的標(biāo)記試劑，其中， 第一抗體為與由SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳所分離的全長的H5型禽流感病毒核蛋白在 Western blot法中沒有抗原抗體反應(yīng)的抗體，第二抗體為與由SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳 所分離的全長的H5型禽流感病毒核蛋白在 Western blot法中有抗原抗體反應(yīng)的抗體。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述第一抗體為 1 種或 1 種以上的單克隆抗體。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述第一抗體為通過對A型流感病毒H5N1亞型的全長的核蛋白進(jìn)行免疫而得到的抗體。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的雞禽流感病毒檢測試劑盒由于檢測靈敏度高，因此比現(xiàn)有的檢測試劑盒少的病毒量就能夠得到“陽性”的判定，因此，假陰性的判定減少，對“陰性”的判定的可靠 性變得非常高。因此，對于處于雞禽流感發(fā)病初期且病毒開始在體內(nèi)增殖不久的患者，能夠提供醫(yī)生做出流感病毒感染的正確診斷所需的有益信息，并且可以在早期開始用抗流感病毒劑的治療。另外，即使在利用接種疫苗來抑制病毒增殖速度的患者中，也可以正確地診斷有無雞禽流感病毒的感染，因此，能夠引起對感染擴大的注意，另外，也能夠提供用于判定雞禽流感疫苗效果的免疫學(xué)上重要的信息。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施方式對本專利的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說明。

一種雞禽流感的檢測試劑盒，含有：固定有與H5型禽流感病毒核蛋白有抗原抗體反應(yīng)而與H7型禽流感病毒核蛋白實質(zhì)上沒有抗原抗體反應(yīng)的第一抗體的層析介質(zhì)、以及與H5型禽流感病毒核蛋白有抗原抗體反應(yīng)而與H7型禽流感病毒核蛋白實質(zhì)上沒有抗原抗體反應(yīng)的第二抗體和標(biāo)記物結(jié)合而成的標(biāo)記試劑。

第一抗體為與由 SDS- 聚丙烯酰胺凝膠電泳所分離的全長的H5型禽流感病毒核蛋白在 Western blot 法中沒有抗原抗體反應(yīng)的抗體，第二抗體為與由 SDS- 聚丙烯酰胺凝膠電泳所分離的全長的H5型禽流感病毒核蛋白在 Western blot法中有抗原抗體反應(yīng)的抗體。

第一抗體為1種或 1 種以上的單克隆抗體。

第一抗體為通過對A型流感病毒H5N1亞型的全長的核蛋白進(jìn)行免疫而得到的抗體。

一種雞禽流感的的檢測方法，其為利用免疫層析法的檢測方法，使用了固定有與H5型禽流感病毒核蛋白有抗原抗體反應(yīng)而與H7型禽流感病毒核蛋白實質(zhì)上沒有抗原抗體反應(yīng)的 第一抗體的層析介質(zhì)、以及與H5型禽流感病毒核蛋白有抗原抗體反應(yīng)而與H7型禽流感病毒核蛋 白實質(zhì)上沒有抗原抗體反應(yīng)的第二抗體和標(biāo)記物結(jié)合而成的標(biāo)記試劑，其中， 第一抗體為與由SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳所分離的全長的H5型禽流感病毒核蛋白在 Western blot法中沒有抗原抗體反應(yīng)的抗體，第二抗體為與由SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳 所分離的全長的H5型禽流感病毒核蛋白在 Western blot法中有抗原抗體反應(yīng)的抗體。

第一抗體為 1 種或 1 種以上的單克隆抗體。

第一抗體為通過對A型流感病毒H5N1亞型的全長的核蛋白進(jìn)行免疫而得到的抗體。

本發(fā)明中使用的第一抗體和第二抗體為與H5型禽流感病毒核蛋白有抗原抗體反應(yīng) 而與 B 型流感病毒核蛋白實質(zhì)上沒有抗原抗體反應(yīng)的抗體。流感病毒由于核蛋白的抗原性 的不同而分為 A 型、B 型等。進(jìn)而，H5型禽流感病毒在病毒粒子的表面具有血凝素 (HA) 和神經(jīng)氨酸酶 (NA) 這樣的糖蛋白，并且由于這些 HA 和 NA 的結(jié)構(gòu)差異而分為各種亞型。本發(fā)明中 所使用的第一抗體和第二抗體由于識別流感病毒的核蛋白，因此可以與H5型禽流感病毒的各 種亞型的核蛋白廣泛地發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，至少可以與雞禽流感病毒的 H1N1亞型、H3N2 亞 型、H5N1 亞型以及 H7N7 亞型等的核蛋白發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，但是是與 B 型流感病毒的核蛋 白沒有抗原抗體反應(yīng)的抗體。與本發(fā)明的第一抗體和第二抗體發(fā)生抗原抗體反應(yīng)的 H5型禽流感病毒的核蛋白可以是從病毒中分離的天然蛋白，也可以是基于公知的核蛋白基因的堿基 序列制作的重組蛋白。進(jìn)而，與本發(fā)明的第一抗體和第二抗體發(fā)生抗原抗體反應(yīng)的核蛋白 可以是從病毒的構(gòu)成成分中分離純化的，也可以是未純化的，但是在未分離的情況下，也可 以是源自用表面活性劑以核蛋白和抗體容易接觸的方式處理過的病毒的核蛋白。

本發(fā)明中的“未變性的H5型禽流感病毒核蛋白”，只要殘留有天然存在的H5型禽流感病毒蛋白的立體結(jié)構(gòu)中的、至少維持與特定的抗體發(fā)生抗原抗體反應(yīng)的充分的立體結(jié)構(gòu)即 可，但是因 SDS-PAGE 等破壞了天然存在的該蛋白的立體結(jié)構(gòu)、無法維持H5型禽流感病毒核蛋 白對該抗體的實質(zhì)上的抗原抗體反應(yīng)的除外。

本發(fā)明中所使用的第一抗體和第二抗體與流感病毒核蛋白是否發(fā)生抗原抗體反應(yīng)可以利用周知的免疫測定方法來進(jìn)行確認(rèn)。即，若以測定形式來分類，則有三明治法、競爭法、凝聚法等免疫測定方法，若以使用的標(biāo)記物來分類，則有熒光法、酶法、放射法等免疫 測定方法，利用這些免疫測定方法中的任意一者均可以進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)的確認(rèn)。在本發(fā)明中，“實質(zhì)上沒有抗原抗體反應(yīng)”是指，在上述免疫測定方法中，在可檢測的水平上沒有抗 原抗體反應(yīng)、或者即使有反應(yīng)該反應(yīng)的程度與H5型禽流感病毒核蛋白的抗原抗體反應(yīng)的程度 相比明顯較弱，與構(gòu)成流感病毒的其它蛋白為同一程度的反應(yīng)，不是特異性反應(yīng)。

作為本發(fā)明的第一抗體，是與A型流感病毒核蛋白有抗原抗體反應(yīng)而與 B 型流感 病毒核蛋白實質(zhì)上沒有抗原抗體反應(yīng)的抗體，進(jìn)而，只要是與天然存在的 A 型流感病毒核 蛋白的發(fā)生抗原抗體反應(yīng)的部位的立體結(jié)構(gòu)被破壞了的該蛋白實質(zhì)上沒有抗原抗體反應(yīng) 的抗體即可，作為這樣的抗體，例如，優(yōu)選為與A型流感病毒核蛋白有抗原抗體反應(yīng)而與 B型流感病毒核蛋白實質(zhì)上沒有抗原抗體反應(yīng)的抗體，與由SDS-PAGE分離的全長的A型流感 病毒核蛋白在 Western blot 法中沒有抗原抗體反應(yīng)的抗體。