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一種腫瘤蛋白的檢測試劑盒的制作方法

文檔序號:12113779閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種腫瘤蛋白的檢測試劑盒,其特征在于:包括腫瘤蛋白P185單克隆抗體、酶標板、陽性對照品、陰性對照品、洗滌液、終止液、辣根過氧化物酶-鏈親和素及其顯色底物,所述的腫瘤蛋白P185單克隆抗體包括包被在酶標板上的腫瘤蛋白P185單克隆抗體和生物素標記的腫瘤蛋白P185單克隆抗體;

所述的包被在酶標板上的腫瘤蛋白P185單克隆抗體為腫瘤蛋白P185單克隆抗體2D11,所述的生物素標記的腫瘤蛋白P185單克隆抗體為腫瘤蛋白P185單克隆抗體3F9,腫瘤蛋白P185單克隆抗體2D11、3F9的制備步驟如下:

a)以NIH/3T3細胞i.p免疫第一批6~8周的Balb/C雌鼠,得到雌鼠的抗NIH/3T3血清;

b)收集長至匯合的T6-17細胞,用PBS緩沖液洗三次,將上述制備的抗NIH/3T3抗血清用PBS緩沖液以1:20~100稀釋,然后取2ml加入T6-17細胞中,在4℃條件下溫育過夜,期間晃動盛放T6-17細胞的試管8-10次,然后再用PBS緩沖液洗三次,得到懸浮于PBS緩沖液中的T6-17細胞;

c)用上述懸浮于PBS緩沖液中的T6-17細胞i.p免疫第二批6-8周的BaLb/C雌鼠,然后取雌鼠的脾細胞制成細胞懸液;

d)將步驟c得到的細胞懸液與骨髓瘤細胞SP2/0進行細胞融合;

e)用ELISA法從上述融合的細胞中篩選出分泌腫瘤蛋白P185單克隆抗體的雜交瘤細胞,采用有限稀釋法對雜交瘤細胞進行克隆化,從而得到兩株具有穩(wěn)定分泌腫瘤蛋白P185單克隆抗體能力的雜交瘤細胞株,分別命名為雜交瘤細胞株2D11、雜交瘤細胞株3F9;

f)將雜交瘤細胞株2D11、3F9分別注入不同的雌鼠體內(nèi),收集腹水,將腹水中的抗體純化,即得腫瘤蛋白P185單克隆抗體2D11、3F9。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腫瘤蛋白的檢測試劑盒,其特征在于:所述洗滌液是由28.8g的Na2HPO4·12H2O、80g的NaCl、3.9g的NaH2PO4·2H2O 和50ml的Tween-20加入純化水溶解定容至100000ml所得。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腫瘤蛋白的檢測試劑盒,其特征在于:所述顯色底物包括顯色液A和顯色液B,所述的顯色液A是用檸檬酸緩沖液將30%過氧化氫稀釋1000倍所得,所述的顯色液B為用含20%二甲基亞砜的檸檬酸緩沖液將四甲基聯(lián)苯胺配制成0.4mg/ml所得。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腫瘤蛋白的檢測試劑盒,其特征在于:所述終止液是濃度為2mol/L的硫酸溶液,所述陽性對照品、陰性對照品分別為人體的P185陽性血清、P185陰性血清。

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