本發(fā)明涉及液相色譜檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種艾條中綠原酸檢測方法，該檢測方法檢測準(zhǔn)確，適合艾條。
背景技術(shù)：
艾條是棉紙包裹艾絨制成的圓柱形長卷，艾條主要用于艾灸，艾灸乃中國最古老的醫(yī)術(shù)之一，屬中醫(yī)外治法，溫灸養(yǎng)生是通過百草之王艾草特制成艾條，點燃后放入溫灸器中滾動于經(jīng)絡(luò)或患處四周，幫助人體全面溫通經(jīng)絡(luò)，溫補元氣，調(diào)和氣血，潤澤面色，散發(fā)健康神采。
艾條中含有黃酮類、綠原酸等活性物質(zhì)，其中綠原酸是一種重要的生物活性物質(zhì)，具有清除自由基、抗菌、消炎、抗病毒、增高白血球、保肝利膽、降血壓、降血脂和興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等作用。艾條中綠原酸含量的檢測有重要意義。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
有鑒于此，本發(fā)明提供了一種艾條中綠原酸檢測方法，該檢測方法檢測準(zhǔn)確，分離能力較好，柱效高，適合艾條。
本發(fā)明提供了一種艾條中綠原酸檢測方法，步驟包括：
(1)將綠原酸對照品溶于有機溶劑制備對照品溶液；對艾條樣品進行預(yù)處理制備供試品溶液；
(2)將對照品溶液、供試品溶液分別進行液相色譜分析，液相色譜分析的條件包括：色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；檢測波長：327nm；流動相：乙腈-0.4％磷酸溶液，檢測時間0-9min內(nèi)，流動相乙腈體積百分比11％，流動相0.4％磷酸溶液體積百分比89％；檢測時間9-14min內(nèi)，流動相乙腈體積百分比由11％增至90％，流動相0.4％磷酸溶液體積百分比由11％增至90％；檢測時間14-16min內(nèi)，流動相乙腈體積百分比90％，流動相0.4％磷酸溶液體積百分比10％。
(3)根據(jù)液相色譜結(jié)果，以樣品峰面積與對照品峰面積比較來測定綠原酸含量。
本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明采用氣相色譜法能對艾條中的綠原酸進行有效檢測，實驗證明該檢測方法準(zhǔn)確度高，分離能力較好，柱效高，穩(wěn)定性好，理論塔板數(shù)按綠原酸計算不低于1000，該峰與其相鄰色譜峰的分離度大于1.5，綠原酸回收率達(dá)97％以上，方法的重復(fù)性良好，中間精密度良好，采用不同品牌的色譜柱測定結(jié)果精密度佳，適合艾條中綠原酸含量的檢測。
具體實施方式
本發(fā)明提供了一種艾條中綠原酸檢測方法，步驟包括：
(1)將綠原酸對照品溶于有機溶劑制備對照品溶液；對艾條樣品進行預(yù)處理制備供試品溶液；
(2)將對照品溶液、供試品溶液分別進行液相色譜分析，液相色譜分析的條件包括：色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；檢測波長：327nm；流動相：乙腈-0.4％磷酸溶液，檢測時間0-9min內(nèi)，流動相乙腈體積百分比11％，流動相0.4％磷酸溶液體積百分比89％；檢測時間9-14min內(nèi)，流動相乙腈體積百分比由11％增至90％，流動相0.4％磷酸溶液體積百分比由11％增至90％；檢測時間14-16min內(nèi)，流動相乙腈體積百分比90％，流動相0.4％磷酸溶液體積百分比10％。
(3)根據(jù)液相色譜結(jié)果，以樣品峰面積與對照品峰面積比較來測定綠原酸含量。
優(yōu)選的，步驟(1)所述有機溶劑為甲醇。
更加優(yōu)選的，步驟(1)所述對照品溶液的配制方法為：稱取綠原酸對照品，加50％的甲醇制成每1ml含0.06mg綠原酸對照品的溶液。
優(yōu)選的，步驟(1)所述預(yù)處理為將艾條樣品中加入甲醇，超聲處理后過濾，取濾液即為供試品溶液。
更加優(yōu)選的，步驟(1)所述預(yù)處理為每1g艾條樣品中加入25mL的50％甲醇，超聲20-40min后冷卻，補足損失的50％甲醇后過濾，取濾液即為供試品溶液。
優(yōu)選的，步驟(2)所述液相色譜分析的條件還包括：進樣量：5μl，柱溫：30℃。
下面將結(jié)合具體實施例對本發(fā)明提供的艾條中綠原酸檢測方法予以進一步說明。下面描述的實施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。
下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的實驗材料如無特殊說明，均為市場購買得到。
本實施例提供了一種艾條中綠原酸檢測方法。
1.1所用到的儀器與試藥如下：
儀器：U3000液相色譜儀、WH1002型電子天平、MS105DU型電子天平。
色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑
試藥：綠原酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110753-201415)，甲醇(分析純)，乙腈(色譜純)。
1.2艾條中綠原酸檢測方法步驟包括：
(1)對照品溶液的制備：精密稱取綠原酸對照品適量，加體積百分比50％的甲醇制成1ml含0.06mg的溶液，即得。
(2)供試品溶液的制備：取待測樣品，除去棉紙，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50％甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘(功率250W，頻率35kHz)，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
(3)分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定。
所述測定的色譜條件如下：
色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；
檢測波長：327nm
柱溫：30℃
流動相如表1所示，其中，A為乙腈，B為0.4％磷酸溶液
表1流動相配比
理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于1000。
(4)根據(jù)氣相色譜結(jié)果，以樣品峰面積與對照品峰面積比較來測定綠原酸含量。
1.3線性關(guān)系考察
取綠原酸對照品適量，加50％甲醇適量使對照品溶解并加50％甲醇至刻度，搖勻，濃度0.05780mg/ml。分別進樣1μl，2μl，5μl，10μl，20μl，以測得峰面積A對進樣質(zhì)量進行線性回歸，所得線性關(guān)系如表2所示。
表2線性關(guān)系表
表1結(jié)果表明，綠原酸在0.0578～1.156μg范圍內(nèi)，Y與X呈良好線性關(guān)系。得回歸方程為：y＝44.768x-0.022r＝1.00000。
1.4系統(tǒng)適用性試驗
取綠原酸對照品溶液和供試品溶液，精密吸取續(xù)濾液5μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。理論塔板數(shù)按綠原酸計算不低于1000，該峰與其相鄰色譜峰的分離度大于1.5。結(jié)果可見，在上述色譜條件下，理論塔板數(shù)和分離度均符合要求，綠原酸分離效果好。
1.5專屬性試驗
不加樣品，按照供試品溶液制備方法制得空白對照溶液。精密吸取對照品溶液，空白對照溶液和供試品溶液各5μl注入液相色譜儀。檢測結(jié)果表明，空白對照溶液在與供試品溶液保留時間相同的位置上，未出現(xiàn)色譜峰，說明空白無干擾。
1.6精密度實驗
①重復(fù)性試驗
供試品采用的藥艾條廠家和批號：盱眙華佗中藥廠藥艾條130601。精密稱取同一批供試品6份，按本實施例提供的含量測定方法及色譜條件進行測定，檢測結(jié)果見表3。
表3重復(fù)性試驗結(jié)果
從表3結(jié)果可見，六組樣品測得的含量基本一致，偏差小，說明測試方法的重復(fù)性良好。
②中間精密度
不同時間、不同操作人員提取藥艾條樣品后測定同批樣品中綠原酸含量，測定結(jié)果見表4。
表4藥艾條中間精密度試驗結(jié)果
從表4結(jié)果可見，各組樣品測得的含量基本一致，偏差小，表明中間精密度良好。
1.7準(zhǔn)確度試驗(回收率試驗)(應(yīng)在95.0％～102.0％)
供試品采用的藥艾條廠家和批號：盱眙華佗中藥廠藥艾條130601。取本品，除去棉紙后稱取約1g的供試品九份，綠原酸對照品的濃度為0.06692mg/ml，每三份分別精密加入綠原酸對照品5ml，10ml，15ml，按供試品含量測定方法操作，測定并計算綠原酸的回收率，結(jié)果見表5。
表5加樣回收試驗結(jié)果
從表5結(jié)果可見，加入綠原酸對照品后測得的綠原酸總量基本等于樣品及對照品中綠原酸總量之和，且九組的綠原酸回收率均在97％以上，平均回收率達(dá)99.43％?？梢姳緶y試方法的綠原酸回收率較高。
1.8耐用性
(1)使用不同品牌的色譜柱：
供試品采用的藥艾條廠家和批號：盱眙華佗中藥廠藥艾條130601。分別精密稱取樣品，按供試品溶液制備方法制備，分別用不同色譜柱，采用相同的測定方法依次測定，結(jié)果見表6。
表6不同品牌色譜柱試驗結(jié)果
表5結(jié)果表明：不同品牌的色譜柱測定結(jié)果基本一致，說明本測試方法精密度良好。
(2)供試品溶液的穩(wěn)定性考察：
供試品采用的藥艾條廠家和批號：盱眙華佗中藥廠藥艾條130601。分別精密稱取上述批號的樣品，分別進樣供試品溶液5μl，分別在0、2.5、5、7.5、10小時內(nèi)測定，測定結(jié)果見表7。
表7綠原酸穩(wěn)定性考察結(jié)果
表7結(jié)果表明，10小時內(nèi)測定的供試品綠原酸含量基本相同，說明供試品溶液在10小時內(nèi)穩(wěn)定，可滿足檢測時間的需要。
綜上所述,按照2010年版《中國藥典》一部附錄XIXA中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則對其方法進行了驗證，此含量測定的方法適合艾條。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。