本發(fā)明涉及尿微量白蛋白檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種尿微量白蛋白檢測試劑，還涉及使用此檢測試劑的檢測方法。

背景技術(shù)：

尿微量白蛋白的分子量為6.9 kD，帶負(fù)電荷，是腎小球?yàn)V過膜所能通過的最小蛋白質(zhì)分子之一，占濾過蛋白總量的40%。經(jīng)腎小球?yàn)V過的蛋白質(zhì)幾乎全部被近曲小管以主動(dòng)方式回吸收，因此尿中只有微量白蛋白。尿微量白蛋白的排出量受人的體位、運(yùn)動(dòng)、血壓、蛋白攝入量等諸多因素的影響。發(fā)熱、精神緊張可使尿微量白蛋白分泌增加；某些藥物可通過生物學(xué)影響使尿微量白蛋白排出增加。正常情況下，絕大部分蛋白不能通過濾過膜，但在病理情況下，如各種炎癥、代謝異常和免疫損傷，使腎小球血流動(dòng)力學(xué)異常，腎小球?yàn)V過膜損害是造成尿微量白蛋白排出量增加的重要原因。由于長期高血糖使非酶糖?；俾试黾樱瑢?dǎo)致缺氧，血液黏度增高，同時(shí)內(nèi)皮細(xì)胞釋放內(nèi)皮素和一氧化氮等血管活性物質(zhì)使腎小球毛細(xì)血管張力改變，進(jìn)而引起腎血流動(dòng)力學(xué)變化，使腎小球處于高濾過狀態(tài)并導(dǎo)致腎損害。早期檢測尿微量白蛋白對阻止和延緩糖尿病腎病的發(fā)展具有十分重要的臨床意義。

尿微量白蛋白指的是尿中白蛋白增加，而尿總蛋白在參考范圍內(nèi)或試紙片法為陰性結(jié)果。它的檢測作為早期腎損害診斷的重要指標(biāo)已受到廣泛重視，它對糖尿病早期診治及其預(yù)后具有重要意義。目前認(rèn)為，尿微量白蛋白是糖尿病腎病的早期外在指標(biāo)，本發(fā)明采用免疫透射比濁法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種用于檢測尿微量白蛋白的試劑及使用該試劑檢測尿微量白蛋白含量的方法。該試劑盒采用抗原-抗體特異性結(jié)合法，可以有效檢測尿微量白蛋白的含量，具有抗干擾能力強(qiáng)，穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。

基本原理：

本方法是一種免疫透射比濁法。將特異性抗體結(jié)合于膠乳顆粒表面，樣本與膠乳顆粒在Mes緩沖液中混合，樣本中的尿微量白蛋白與膠乳顆粒表面的抗體結(jié)合，使相鄰的膠乳顆粒彼此交聯(lián)，在415nm波長下檢測溶液濁度變化，變化程度與樣本中的尿微量白蛋白含量成正比。

本發(fā)明是通過以下步驟得到的：

一種尿微量白蛋白檢測試劑，包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1和試劑R2的組成如下：

1）試劑R1的組分為：

Mes緩沖液 pH 7.6_{·············································}50 mmol/L；

TritonX-100_{··················································}25 ml/L；

膠乳顆粒_{··················································}...30 ml/L；

疊氮鈉_{·············································}..........7.7 mmol/L；

2）試劑R2的組分為：

Mes緩沖液 pH 7.6_{·········································}50 mmol/L；

羊抗人白蛋白抗體_{·········································}3 g/L；

甘露醇_{················································}...20 mmol/L；

疊氮鈉_{·················································}..7.7 mmol/L。

所述的尿微量白蛋白檢測試劑來檢測尿微量白蛋白的檢測方法，使用全自動(dòng)生化分析儀日立7180，利用終點(diǎn)法進(jìn)行測定，檢測主波長為415 nm。

所述的檢測方法，R1試劑和R2試劑的比例為3:1。

本發(fā)明的有益效果：

1）采用Mes緩沖體系，顯著改善了試劑的穩(wěn)定性；

2）采用膠乳顆粒和甘露醇，不僅顯著改善測定的性能，而且增強(qiáng)了試劑的穩(wěn)定性和抗干擾能力；

3）試劑的準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性良好，價(jià)格便宜，使用方便，完全可以滿足臨床需要。

附圖說明

圖1為兩種試劑的相關(guān)性曲線圖，

圖2為兩種試劑效期穩(wěn)定性曲線圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明：

實(shí)施例1

尿微量白蛋白的檢測試劑，包括試劑R1和試劑R2：

1）試劑R1的組分為：

Mes緩沖液 pH 7.6_{···············································}50 mmol/L；

TritonX-100_{·········································}...........25 ml/L；

膠乳顆粒_{·······················································}30 ml/L；

疊氮鈉_{·······················································}..7.7 mmol/L

2) 試劑R2的組分為：

Mes緩沖液 pH 7._{···············································}50 mmol/L；

羊抗人白蛋白抗體_{·············································}.3 g/L；

甘露醇_{························································}20 mmol/L；

疊氮鈉_{························································}7.7 mmol/L；

3）本實(shí)施例試劑的使用方法：

本實(shí)施例描述的尿微量白蛋白檢測試劑，在使用時(shí)采用具有雙試劑功能的全自動(dòng)生化分析儀，如日立7180全自動(dòng)分析儀等，利用終點(diǎn)法進(jìn)行測定。將R1和R2按照5:1的比例放置到對應(yīng)的試劑位上，在樣品盤的對應(yīng)位置放置好蒸餾水、標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，操作如表1。

表1 實(shí)施例1試劑檢測方法

計(jì)算：尿微量白蛋白含量（mg/L）＝（?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)）×C標(biāo)準(zhǔn)。

實(shí)施例2

干擾性試驗(yàn)：取新鮮混合尿液，分成2等份，然后將每等份再分成5等份，加入不同的干擾物質(zhì)，使其在尿液中的濃度達(dá)到表2的要求。然后分別用實(shí)施例1所得試劑，與市場常見并認(rèn)可的尿微量白蛋白試劑同時(shí)對比測定尿液中尿微量白蛋白的含量，對照組測定結(jié)果與加入不同干擾物質(zhì)后各組的測定結(jié)果見表2。相對偏差 (%) = (干擾樣本的測定均值－對照樣本的測定均值) /對照樣本的測定均值×100%。

由表2可以看出，實(shí)施例1試劑在抗壞血酸≤27.3 μmol/L、尿酸≤240 μmol/L、尿素≤6.5 mmol/L、NAG≤9 U/L對測試結(jié)果沒有明顯干擾；而對照組試劑在上述濃度干擾物質(zhì)存在時(shí)，受到明顯干擾，這說明實(shí)施例1試劑的抗干擾性能遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于對比試劑。

表2實(shí)施例試劑抗干擾性能比較

實(shí)施例3

相關(guān)性實(shí)驗(yàn)：利用實(shí)施例1配方配制試劑，與市場常見的國家食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)可的某公司的尿微量白蛋白試劑盒進(jìn)行對照檢測，同時(shí)檢測了20個(gè)臨床尿液樣本，檢測結(jié)果如表3所示。并獲得了兩種試劑的相關(guān)性曲線（如圖1所示），通過檢測結(jié)果顯示，兩個(gè)試劑盒的相關(guān)系數(shù)為0.999，說明了兩者有極大的相關(guān)性。

表3實(shí)施例1試劑與市場常見并得到認(rèn)可的心肌肌鈣蛋白I測定試劑盒對比檢測結(jié)果

實(shí)施例4

試劑的穩(wěn)定性對比試驗(yàn)：對實(shí)施例1中的試劑，均勻分裝13組，每組的試劑量為R1為25 mL，R2為5 mL；并且取13組市場常見的國家食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)可的某公司的尿微量白蛋白試劑盒作對照。放置到2-8℃冰箱中，每月的同一天取出一組實(shí)施例1試劑和對照組試劑檢測同一混合尿液樣本，檢測結(jié)果如圖2所示，實(shí)施例1試劑在2-8℃儲存條件下比市場常見的尿微量白蛋白測定試劑盒更加穩(wěn)定。

通過驗(yàn)證，本試劑與同類檢測試劑對比相關(guān)性好，臨床檢測樣本結(jié)果一致，能夠達(dá)到市場對產(chǎn)品的應(yīng)用要求，并且抗干擾性能好，是一種更加穩(wěn)定、良好的尿微量白蛋白檢測試劑。