本發(fā)明屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種阿伐那非及其制劑的高效液相色譜分析方法。

背景技術(shù)：

阿伐那非(Avanafil)，化學(xué)名為4-[(3-氯-4-甲氧基芐基)氨基]-2-[2-(羥甲基)-1-吡咯烷基]-N-(2-嘧啶基甲基)-5-嘧啶甲磺酰胺，CAS登錄號為330784-47-9?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

Avanafil是一種磷酸二酯酶5(PDE5)抑制劑，是Vivus公司從日本田邊三菱制藥公司轉(zhuǎn)讓的研究項目。用于治療男性勃起功能障礙(ED)，于2012年4月27日上市，劑型為片劑(規(guī)格50mg、100mg及200mg)

阿伐那非為一種PDE5抑制劑可以有效的抑制陰莖中cGMP的降解，使陰莖中的cGMP的水平上升，致使陰莖海綿體的平滑肌放松及增進(jìn)血液的流入，能夠使陰莖內(nèi)血流量增加。

目前，阿伐那非及其制劑在國內(nèi)還沒有上市，該原料藥及其制劑的分析方法尚無文獻(xiàn)報道。為了保證阿伐那非后續(xù)的研發(fā)和生產(chǎn)質(zhì)量，需要對原料藥及其制劑的質(zhì)量進(jìn)行控制。因此，研究獲得一種阿伐那非的有關(guān)物質(zhì)檢查和含量測定的檢測方法，這對醫(yī)藥生產(chǎn)企業(yè)來說顯得尤為迫切。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種可行性高，操作過程簡單方便，適用性好，可以廣泛應(yīng)用于阿伐那非及其制劑的高效液相色譜分析法。

為了解決上述技術(shù)問題提出的技術(shù)方案是：一種阿伐那非的高效液相色譜分析方法，步驟如下：

(1)高效液相色譜條件為：色譜柱：選用十八烷基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，規(guī)格為4.6mm*150mm，5um、4.6mm*200mm，5um、4.6mm*250mm，5um、4.6mm*150mm，3.5um、4.6mm*200mm，3.5um或4.6mm*250mm，3.5um；

流動相：乙腈和水混合組成，體積配比是乙腈∶緩沖鹽＝30～70∶70～30；

緩沖鹽為磷酸鹽、醋酸鹽緩沖體系中的一種或多種；

緩沖鹽濃度為1～100mmol/L；

流速：0.5～1.5mL/min；

柱溫：30～40℃；

紫外檢測器波長：200nm～300nm；

進(jìn)樣體積：5～50uL；

(2)配制樣品溶液，其中樣品是阿伐那非原料及其片劑；

(3)測定峰面積，計算樣品純度和含量。

優(yōu)選的，所述流動相配比是乙腈：緩沖鹽＝40～50∶60～50，柱溫為40℃，流速為1.0ml/min，進(jìn)樣體積為20uL，所述紫外檢測器波長為220nm。

優(yōu)選的，緩沖鹽為醋酸緩沖鹽體系。

優(yōu)選的，緩沖鹽濃度為5～50mmol/L

優(yōu)選的，所述阿伐那非制劑優(yōu)為片劑。

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題提出的另一技術(shù)方案是：所述的阿伐那非的高效液相色譜分析方法在阿伐那非質(zhì)量研究中的應(yīng)用。

本發(fā)明的有益效果是：

(1)本發(fā)明提供的分析方法，根據(jù)中國藥典2010版，完成方法學(xué)驗證，包括系統(tǒng)適性試驗、專屬性(降解試驗)、穩(wěn)定性試驗、線性試驗、回收率試驗、精密度以及耐用性等試驗。經(jīng)過這些驗證，本發(fā)明提供的分析方法實用可靠，穩(wěn)定性較好。

(2)本發(fā)明從阿伐那非中鑒定了3個已知雜質(zhì)，包括合成工藝中的中間體1、中間體2和中間體3，同時對原料和制劑進(jìn)行強(qiáng)降解試驗，降解雜質(zhì)也得到了有效的分離，分離度大于1.5，主峰峰純度較好，此方法可以有效的評價阿伐那非及其制劑的質(zhì)量。

(3)使用普通的液相色譜儀即可，設(shè)備要求不高。

(4)流動相選用的兩個介質(zhì)普通易得，可行性高。

(5)操作過程簡單方便。

(6)適用性好，可以廣泛應(yīng)用于阿伐那非及其制劑樣品的質(zhì)量控制。

附圖說明

圖1是實施例一的阿伐那非原料的高效液相色譜圖

圖2是實施例二的阿伐那非原料含量測定對照品的高效液相色譜圖

圖3是實施例三的阿伐那非片劑的高效液相色譜圖

圖4是實施例三的阿伐那非片劑空白輔料的高效液相色譜圖

圖5是實施例一的阿伐那非系統(tǒng)適用性溶液的高效液相色譜圖

具體實施方式

以下結(jié)合附圖對本發(fā)明實施方式作進(jìn)一步地詳細(xì)描述。

實施例一

阿伐那非原料有關(guān)物質(zhì)檢查

儀器與色譜條件：

色譜柱：Agilent C 18；4.6mmX 150mm，3.5um

流動相：乙腈：50mmol/L磷酸鹽緩沖液＝40∶60

檢測波長：220nm

流速：1.0ml/min

柱溫：40℃

進(jìn)樣體積：20uL

高效液相色譜儀：日本島津LC-20A，PDA檢測器

實驗步驟：

溶液配制：

取阿伐那非原料藥適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋制成每1ml中約含0.5～1mg的溶液，作為有關(guān)物質(zhì)檢查供試品溶液；精密量取供試品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；精密量取供試品溶液和對照品溶液各20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖，如圖1所示，按照不加校正因子的自身對照法計算其純度。

系統(tǒng)適用性溶液：精密稱定中間體1，中間體2及中間體3自制對照品適量，加流動相溶解，最終配制成每1ml含10～20ug的雜質(zhì)混合溶液，精密量取20ul入液相色譜儀，記錄色譜圖，如圖5所示。

按照上述方法檢測，結(jié)果如下：

表1系統(tǒng)適應(yīng)溶液的分離度測試

根據(jù)表1可以看出，阿伐那非原料中各雜質(zhì)可以得到有效分離，分離度均大于1.5，峰形良好，峰純度良好，理論塔板數(shù)大于2000，拖尾因子小于1.5，符合標(biāo)準(zhǔn)。

阿伐那非原料純度為99.81％，總雜為0.19％。從阿伐那非中鑒定了1個已知雜質(zhì)，為合成中間體3，同時對原料和制劑進(jìn)行強(qiáng)降解試驗，降解雜質(zhì)也得到了有效的分離，分離度大于1.5，主峰純度較好，本發(fā)明可以有效的評價阿伐那非及其制劑的質(zhì)量。

本實施例提供的分析方法，根據(jù)中國藥典2010版，完成方法學(xué)驗證，包括系統(tǒng)適用性試驗、專屬性(降解試驗)、穩(wěn)定性試驗、線性試驗、回收率試驗、精密度以及耐用性試驗。經(jīng)過一系列驗證，證明本實施例提供的分析方法實用可靠，穩(wěn)定性較好。

實施例二

阿伐那非原料含量測定

儀器與色譜條件

色譜柱：Agilent C 18；4.6mmX 150mm，3.5um

流動相：乙腈：50mmol/L磷酸鹽緩沖液＝60∶40

檢測波長：220nm

流速：1.0mL/min

柱溫：40℃

進(jìn)樣體積：20ul

儀器：日本島津LC-20A(PDA檢測器)

溶液配制

精密稱定阿伐那非自制原料10mg，置100ml容量瓶中，加流動相適量，振搖使溶解后稀釋至刻度，搖勻，得到供試品母液；精密量取供試品母液1ml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液，精密量取20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密稱定阿伐那非自制對照品10mg，置100ml量瓶中，加流動相適量，振搖使溶解后稀釋至刻度，搖勻，得到對照品母液；精密量取對照品母液1ml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液，同法測定(如圖2所示)，按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。

含量(％)＝C_R*A_X/A_R

C_R為對照品溶液的濃度

A_X為供試品溶液峰面積

A_R為對照品溶液峰面積

按照上述方法檢測，阿伐那非含量測定結(jié)果如下：

按干燥品計，阿伐那非原料含量為99.8％。

實施例三

阿伐那非片劑有關(guān)物質(zhì)檢查

儀器與色譜條件：

色譜柱：Agilent C 18；4.6mmX 150mm，3.5um

流動相：乙腈：50mmol/L磷酸鹽緩沖液＝40∶60

檢測波長：220nm

流速：1.0ml/min

柱溫：40℃

進(jìn)樣體積：20ul

儀器：日本島津LC-20A(PDA檢測器)

溶液配制：

取阿伐那非片劑，研磨至粉末，取研碎后的粉末適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋制成每1ml中約含0.5～1mg的溶液，過濾后取續(xù)濾液作為有關(guān)物質(zhì)檢查供試品溶液；精密量取供試品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；精密量取供試品溶液和對照品溶液各20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按照不加校正因子的自身對照法計算其純度。

按照上述方法檢測，結(jié)果如下：

阿伐那非片劑中各雜質(zhì)可以得到有效分離，空白輔料和溶劑對樣品分析沒有干擾。

阿伐那非片劑純度為99.83％，總雜為0.17％，雜質(zhì)順式異構(gòu)體為0.13％。

實施例四

阿伐那非片劑含量測定

儀器與色譜條件：

色譜柱：Agilent C 18；4.6mmX 150mm，3.5um

流動相：乙腈：50mmol/L磷酸鹽緩沖液＝60∶40

檢測波長：220nm

流速：1.0ml/min

柱溫：40℃

進(jìn)樣體積：20ul

儀器：日本島津LC-20A(PDA檢測器)

溶液配制：

取阿伐那非片劑，研磨至粉末，精密稱定研碎后的粉末適量(約相當(dāng)于阿伐那非10mg)，置100ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，得到供試品母液；取過濾后的續(xù)濾1ml置于10ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另精密稱定阿伐那非自制對照品10mg，置100ml量瓶中，加流動相適量，振搖使溶解后稀釋至刻度，搖勻，得到對照品母液；精密量取對照品母液1ml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；精密量取供試品溶液和對照品溶液各20ul注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，按照不加校正因子的自身對照法計算其純度。

按照上述方法檢測，結(jié)果如下：

阿伐那非片劑含量為98.45％。

顯然，上述實施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對實施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明的保護(hù)范圍之中。