一種核磁共振氫譜測定莫西克汀含量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種核磁共振氫譜測定莫西克汀含量的方法，屬于核磁共振檢測方法【技術領域】。該方法以廉價易得化合物為內標，與已知液相色譜歸一化含量的莫西克汀樣品一同溶解于氘代試劑中，經(jīng)過相同氘代試劑稀釋至一定濃度后，轉移至核磁樣品管中進行核磁共振氫譜測試，然后分別對譜圖中內標物及莫西克汀的定量峰進行積分，所得數(shù)據(jù)代入計算公式計算即可得到莫西克汀含量，與歐洲藥典提供的液相色譜外標檢測方法結果相符。本發(fā)明提供一種新的測定莫西克汀含量的方法，該方法具有內標物廉價易得、簡單準確及重復性好等優(yōu)點。
【專利說明】一種核磁共振氫譜測定莫西克汀含量的方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及核磁共振檢測方法【技術領域】，具體涉及一種核磁共振氫譜測定莫西克 汀含量的方法，該方法適用于莫西克汀含量為70wt. %以上的樣品的檢測。

【背景技術】
[0002] 莫西克汀是由鏈霉菌發(fā)酵產(chǎn)生的成分單一、半合成的大環(huán)內酯類藥物，有著良好 的驅蟲活性，同時具有長效、安全等特性，是一種目前廣泛應于獸醫(yī)臨床的廣譜、高效、新型 大環(huán)內酯類驅蟲抗生素（參見：Parasites&Vectors2009,2(Suppl2)，S5)。莫西克汀的含 量目前一直采用已知含量的標準品作外標進行高效液相色譜測定（參見：歐洲藥典，第7 版，2010, 2529-2531 ;CN103399115, 2013)。由于標準樣品價格昂貴，長期使用成本高，而且 在存放過程中標準樣品即使發(fā)生少量吸潮、污染或者降解等變化都會嚴重影響測定結果。 因此，開發(fā)一種避免使用莫西克汀標準品的替代測試方案非常必要。
[0003] 核磁共振氫譜CH-NMR)技術主要用于有機化合物的結構測定，它也是一種藥物定 量分析的重要手段，其基本原理是1H-NMR中的共振峰面積與該共振峰包含氫原子個數(shù)成正 t匕，該法的優(yōu)點是無需引入任何校正因子、速度快、簡單準確。自從廣泛應用超導傅立葉變 換核磁共振譜儀以來，儀器性能得到極大改善，其定量分析的精確度、準確度和重現(xiàn)性達到 或接近高效液相色譜儀。目前很多國家和地區(qū)藥典已收錄核磁定量分析方法，2010年修訂 的中國藥典也增加了核磁共振波譜的定量方法（參見：中華人民共和國藥典二部，第二版， 2010,附錄 81)。
[0004] 因此，利用iH-NMR技術，選擇廉價穩(wěn)定的內標物替代需要使用標準品作外標的高 效液相色譜法進行莫西克汀含量測定是一項非常有意義的研究工作。


【發(fā)明內容】

[0005] 為了克服現(xiàn)有高效液相色譜測量莫西克汀含量方法中存在的不足之處，本發(fā)明提 供一種核磁共振氫譜測定莫西克汀含量的方法，該方法利用核磁共振氫譜內標法測定莫西 克汀含量，具有內標物廉價易得、簡單準確及重復性好等優(yōu)點。
[0006]本發(fā)明采用的技術方案是：
[0007] -種核磁共振氫譜測定莫西克汀含量的方法，包括如下步驟：
[0008] (1)稱量質量為ms的旲西克汀樣品和質量為％的內標物至樣品瓶中，然后在樣品 瓶中加入氘代溶劑，通過超聲波震蕩使莫西克汀樣品和內標物溶解，得到濃度為C1的莫西 克汀溶液；
[0009] (2)從步驟（1)樣品瓶中取出所需質量的溶液，加入裝有相同氘代溶劑的另一樣 品瓶中，在另一樣品瓶中配制濃度為C2的旲西克汀溶液；
[0010] (3)將步驟（2)中濃度為C2的莫西克汀溶液轉移至核磁樣品管中進行核磁共振氫 譜測試；測試完畢，選擇莫西克汀與內標物定量峰進行積分并分別得到積分面積As及積分 面積化，將以上數(shù)據(jù)帶入公式（1)求得莫西克汀含量。

【權利要求】
1. 一種核磁共振氫譜測定莫西克汀含量的方法，其特征在于：該方法包括如下步驟： (1) 稱量質量為ms的旲西克汀樣品和質量為IHi的內標物至樣品瓶中，然后在樣品瓶中 加入氘代溶劑，通過超聲波震蕩使莫西克汀樣品和內標物溶解，得到濃度為Cl的莫西克汀 溶液； (2) 從步驟（1)樣品瓶中取出所需質量的溶液，加入裝有相同氘代溶劑的另一樣品瓶 中，在另一樣品瓶中配制濃度為C2的旲西克汀溶液； (3) 將步驟（2)中濃度為C2的莫西克汀溶液轉移至核磁樣品管中進行核磁共振氫譜測 試；測試完畢，選擇莫西克汀與內標物定量峰進行積分并分別得到積分面積As及積分面積 Ai,將以上數(shù)據(jù)帶入公式（1)求得莫西克汀含量；
其中：P為莫西克汀含量為莫西克汀樣品的液相色譜歸一化含量;AS為莫西克汀 定量峰的積分面積；Ai為內標物定量峰的積分面積；ns為莫西克汀定量峰包含的氫個數(shù)；rii 為內標物定量峰包含的氫個數(shù);ms為莫西克汀樣品質量;MS為莫西克汀摩爾質量（639. 82g/ mol)噸為內標物的質量軋為內標的摩爾質量％為內標物的純度。
2. 根據(jù)權利要求1所述的核磁共振氫譜測定莫西克汀含量的方法，其特征在于：所述 莫西克汀樣品中莫西克汀含量為70?IOOwt. %。
3. 根據(jù)權利要求1所述的核磁共振氫譜測定莫西克汀含量的方法，其特征在于：所述 內標物為1，3, 5-三甲苯、對苯二酚、1，3, 5-三氧六環(huán)、1，2, 4, 5-四氯苯、1，4-二硝基苯、對 苯二酸、苯甲酸芐酯和順丁烯二酸酐中的一種或兩種。
4. 根據(jù)權利要求1所述的核磁共振氫譜測定莫西克汀含量的方法，其特征在于：步驟 (1) 中，所述內標物加入量應使其在核磁共振氫譜中的定量峰積分面積為莫西克汀定量峰 積分面積的0.7至1.3倍之間。
5. 根據(jù)權利要求1所述的核磁共振氫譜測定莫西克汀含量的方法，其特征在于：步驟 ⑴中，所得莫西克汀溶液的濃度Cl為10?300mg/mL。
6. 根據(jù)權利要求1所述的核磁共振氫譜測定莫西克汀含量的方法，其特征在于：所述 氘代溶劑包括氘代氯仿、氘代二甲基亞砜、氘代水、氘代甲醇、氘代二氯甲烷、氘代乙腈和氘 代丙酮中的一種或兩種的混合溶劑。
7. 根據(jù)權利要求1所述的核磁共振氫譜測定莫西克汀含量的方法，其特征在于：步驟 (2) 中，所得莫西克汀溶液的濃度C2為0. 5?20mg/mL。
8. 根據(jù)權利要求1所述的核磁共振氫譜測定莫西克汀含量的方法，其特征在于：所述 莫西克汀樣品的液相色譜歸一化含量為按照歐洲藥典莫西克汀含量測定的標準方法進行 測試所得結果。
【文檔編號】G01N24/08GK104330431SQ201410526450
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2014年9月30日 優(yōu)先權日:2014年9月30日
【發(fā)明者】戴耀, 李賀先, 林誠輝, 王榮良 申請人:大連九信生物化工科技有限公司