一種左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)及其制備、檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有重氮氨基基因毒性警示結(jié)構(gòu)的左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)。本發(fā)明還提供一種上述雜質(zhì)的制備方法、檢測方法以及上述雜質(zhì)在檢測左西孟旦原料藥及其制劑中潛在基因毒性雜質(zhì)的應(yīng)用。
【專利說明】-種左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)及其制備、檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物合成領(lǐng)域，具體涉及一種左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)及其制備、 檢測方法的研究。

【背景技術(shù)】
[0002] 左西孟旦（Levosimendan)，〇?)-[[4_(1，4, 5, 6-四氫-4-甲基-6-氧代-3-咕嗪 基）苯基]-亞肼基]丙二腈(式II)是芬蘭ORION公司開發(fā)研制的噠嗪酮類、具有正性肌力 作用的鈣增敏劑，其直接與肌鈣蛋白相結(jié)合，使鈣離子誘導(dǎo)的心肌收縮所必需的心肌纖維 蛋白的空間構(gòu)型得以穩(wěn)定，從而使心肌收縮力增加，可有效治療心衰并對肌鈣蛋白具有顯 著的鈣依賴性結(jié)合作用，適用于需要增加心肌收縮力的急性失代償心力衰竭（ADHF)的短期 治療；同時，W09321921還描述了左西孟旦在治療心肌局部缺血中的良好效果。
[0003] 左西孟旦作為一種有效的正性肌力作用的鈣增敏劑在國內(nèi)外廣受關(guān)注的同時，臨 床研究者對左西孟旦的用藥安全性也進(jìn)行了更深入的研究。W09965888A2指出，在細(xì)菌誘變 性試驗中發(fā)現(xiàn)合成的左西孟旦樣品偶然會顯現(xiàn)出潛在的基因毒性，并描述了左西孟旦的潛 在基因毒性是由[[4-(2-疊氮-3-甲基-5-氧代四氫呋喃-2-基）苯基]亞肼基]丙二腈 (式III)引起的，是有效的誘變劑；同時還指出，左西孟旦合成過程中可以生成足夠在細(xì)菌誘 變性試驗中得出陽性結(jié)果的量，這一研究結(jié)果引起了國內(nèi)外的廣泛關(guān)注。

【權(quán)利要求】
1. 一種左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)，其具有式I所述結(jié)構(gòu)：
2. 如權(quán)利要求1所述的雜質(zhì)，其為式I化合物藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、對應(yīng)異構(gòu) 體或非對映異構(gòu)體。
3. 如權(quán)利要求1所述的雜質(zhì)，其具有如下核磁數(shù)據(jù)：H-NMR (i/6-DMS0,400MHz) : ^ =12.78 (s, 1H, NH), 11.02 (s, 1H, NH), 10.92(s, 1H, NH), 7.84 (m, 4H, Ar), 7.61 (d, 2H, Ar), 7.40 (d, 2H, Ar), 3. 39 (m, 2H, CH2), 2. 72 (m, 2H, CH2), 2. 25 (m, 2H, CH), 1.10 (d, 6H, 2CH3) ppm;其中各峰位移 ±0.1 ppm。
4. 一種制備權(quán)利要求1所述雜質(zhì)的方法，包括一定溫度下，6-(4-氨基苯基）-4, 5-二 氫-5-甲基-3 (2H)-噠嗪酮(式IV)與亞硝酸在溶劑中進(jìn)行反應(yīng)：
5. 如權(quán)利要求4所述的制備方法，包括將式IV化合物和/或其鹽、游離胺、溶劑化物在 亞硝酸作用下，于溶劑中反應(yīng)；所述的亞硝酸為亞硝酸鹽與酸原位反應(yīng)制備或亞硝酸溶液。
6. 如權(quán)利要求4或5所述的制備方法，所述溶劑為水、鹵代烴類溶劑、醇類溶劑、酯類溶 齊?、芳烴類溶劑、酮類溶劑、醚類溶劑、腈類溶劑、酰胺類溶劑或有機酸、無機酸及其溶液的 任一種或其組合；所述的有機酸及其溶液優(yōu)選醋酸；所述的無機酸及其溶液優(yōu)選為鹽酸、 氫溴酸、硫酸。
7. -種用于檢測左西孟旦樣品中潛在的基因毒性雜質(zhì)的參比試劑，所述試劑包括權(quán)利 要1所述式I化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物；優(yōu)選所述參比試劑還包括分析 上可接受的載體。
8. 如權(quán)利要求1所述雜質(zhì)用于檢測左西孟旦原料藥及其制劑中潛在基因毒性雜質(zhì)的 應(yīng)用；所述制劑優(yōu)選為口服劑或注射劑。
9. 一種權(quán)利要求1所述雜質(zhì)的檢測方法，包括采用高效液相色譜法測定左西孟旦中該 基因毒性雜質(zhì)的含量；所述高效液相色譜法為反相色譜法；優(yōu)選色譜柱為C8、C18、苯基鍵 合硅膠為填料的分析色譜柱；檢測器為紫外檢測器；以甲醇和磷酸鹽緩沖液為流動相，按 照等度和梯度洗脫程序進(jìn)行檢測；優(yōu)選所述的磷酸鹽緩沖溶液的PH值控制在Γ4范圍內(nèi)。
10. 如權(quán)利要求9所述的方法，所述色譜柱為Agilent XDB-C18柱；柱溫為30°C ;流速 為I. Oml/min ;檢測波長為380nm ;流動相為甲醇：磷酸鹽緩沖液(體積比）=6:4。
【文檔編號】G01N30/02GK104230816SQ201410479758
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年9月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月19日
【發(fā)明者】張善軍, 向顯帥, 李佳, 高建 申請人:成都新恒創(chuàng)藥業(yè)有限公司