環(huán)境雌激素光電化學傳感器制備方法與應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種CdS敏化TiO2環(huán)境雌激素光電化學傳感器制備方法與應用，該方法利用TiO2作為抗原捕獲基底材料，采用直接滴加Na2S的方法，在Cd2+功能化的TiP納米材料作為標記物修飾電極的表面原位生成CdS光電活性材料，通過可見光波長的LED燈照射CdS轉(zhuǎn)化成光電流信號?；撞牧蟃iO2與CdS能帶匹配度良好，能進一步提高CdS的光電流轉(zhuǎn)換信號，從而制備超靈敏檢測雌二醇，雌三醇，己烯雌酚，雙酚A，壬基酚，雌酮等多種環(huán)境污染物的競爭型光電化學免疫傳感器。
【專利說明】一種CdS敏化T12環(huán)境雌激素光電化學傳感器制備方法與應用

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種CdS敏化T12環(huán)境雌激素光電化學傳感器制備方法與應用，具體涉及一種原位生成CdS敏化T12的競爭型環(huán)境雌激素光電化學生物傳感器的制備方法及應用，屬于新型功能材料與環(huán)境污染物生物傳感檢測【技術領域】。

【背景技術】
[0002]隨著現(xiàn)代工農(nóng)業(yè)的快速發(fā)展，大量環(huán)境有害物質(zhì)隨著人類的生產(chǎn)活動進入人類生活環(huán)境，對人類的健康產(chǎn)生極大危害。環(huán)境雌激素是指存在于環(huán)境中，具有類似生物體內(nèi)雌激素活性的化學物質(zhì)，進入人體后可產(chǎn)生具有模擬雌激素作用的環(huán)境毒素。環(huán)境中的痕量雌激素通過食物鏈進入人體，會形成假性激素，通過影響人類腎上腺、甲狀腺等人體重要的內(nèi)分泌腺體，使其不正常分泌，從而造成人體神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的功能障礙，嚴重影響人類身心健康。
[0003]監(jiān)測是保證食品安全的重要環(huán)節(jié)，建立一種快速、簡便、靈敏檢測環(huán)境雌激素的方法十分重要。目前國內(nèi)外對環(huán)境雌激素檢測的方法主要有高效液相色譜法、免疫學方法，電化學方法、生物分析法等，但多數(shù)需要貴重儀器，其操作復雜，檢出限高，不能得到很好的應用。因此，為了解決上述方法的不足之處，本發(fā)明提供了一種簡單、快速、靈敏度和選擇性高的光電化學免疫分析方法。
[0004]光電化學傳感器是基于物質(zhì)的光電轉(zhuǎn)換特性來確定待測物濃度的一類檢測裝置。光電化學檢測方法具有靈敏度高、設備簡單、易于微型化的特點，已經(jīng)成為一種極具應用潛力的分析方法，在食品、環(huán)境、醫(yī)藥等領域具有廣闊的應用前景。
[0005]本發(fā)明采用具有良好的光吸收效率的羅丹明B敏化T12半導體復合材料作為半抗原捕獲基底，利用Cd2+功能化的多孔TiP納米顆粒標記抗體，通過在電極表面直接滴加Na2S,原位生成高光電轉(zhuǎn)換率的窄帶隙CdS。由于基底材料T12與CdS能帶匹配度良好，能進一步提高CdS的光電流轉(zhuǎn)換信號。本發(fā)明制備的一種CdS敏化T12環(huán)境雌激素光電化學傳感器，具有低成本、高靈敏、特異性好、快速檢測等優(yōu)點，且制備過程簡單，在可見光區(qū)域?qū)崿F(xiàn)了對多種環(huán)境雌激素的快速、靈敏檢測，有效克服了目前環(huán)境雌激素檢測方法的不足。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的之一是基于原位生成窄帶隙CdS，構建了一種簡單、快速、靈敏的競爭型光電化學免疫傳感器。
[0007]本發(fā)明的目的之二是通過原位生成的窄帶隙CdS與基底寬帶隙T12能帶匹配，實現(xiàn)了可見光區(qū)域?qū)Χ喾N環(huán)境雌激素的快速、靈敏檢測目的。
[0008]本發(fā)明的技術方案如下:
1.一種CdS敏化Ti02環(huán)境雌激素光電化學傳感器制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將導電玻璃依次用丙酮、乙醇和超純水超聲清洗,氮氣吹干；取6μ?、2?4mg/mL羅丹明B功能化T12溶液滴加到導電玻璃的導電面，室溫下晾干，40(T50(TC煅燒3(T60min，冷卻，得到羅丹明B-T12修飾的玻璃電極；
(2)在羅丹明B-T12修飾的玻璃電極表面，滴加4μ?、0.Γ? Pg/mL的環(huán)境雌激素標準溶液，超純水沖洗電極表面，4°C冰箱中晾干；
(3)繼續(xù)滴加4PL、質(zhì)量分數(shù)為廣3%的BSA溶液，封閉電極表面上非特異性活性位點，超純水沖洗電極表面，40C冰箱中晾干；
(4)繼續(xù)滴加4μ?環(huán)境雌激素標準溶液與抗體孵化溶液的混合液，超純水沖洗電極表面，4°C冰箱中晾干，制得了 CdS敏化T12光電化學傳感器。
[0009]所述環(huán)境雌激素標準溶液與抗體孵化溶液的混合液，是由等體積的TiPOCd2+-Ab抗體孵化溶液分別與不同濃度待測的環(huán)境雌激素標準溶液混合制得；所述不同濃度待測的環(huán)境雌激素標準溶液，其濃度為I pg/mL?20 ng/mL。
[0010]2.羅丹明B功能化T12溶液的制備
(1)T12粉末的制備
0.0Γ0.03 mo I鈦酸四丁酯溶解于30mL乙醇中，加入1mL水，攪拌30?120min，將混合溶液轉(zhuǎn)移到高壓釜中，200°C下反應5?10h，所得到的產(chǎn)物用蒸餾水和無水乙醇離心洗滌，7(T90°C條件下真空干燥12h，得到T12粉末；
(2)羅丹明B功能化T12溶液的制備
取10 mg T12粉末加入到2.5 mL、0.Γθ.2 mg/mL羅丹明B水溶液中，用0.lmol/LNaOH調(diào)節(jié)pH至7,振蕩4?24 h,離心干燥,用水配成2 mg/mL的羅丹明B功能化T12溶液。
[0011]3.TiPOCd2+-Ab抗體孵化溶液的制備
(1)TiP的制備
0.3 g的十二烷基硫酸鈉加20 mL乙醇超聲，向溶液中加入2?4 mL、質(zhì)量分數(shù)為85%的H3PO4,混合溶液攪拌4 h，生成白色的NaH2PO4沉淀，離心分散在少量乙醇中；向上述乙醇分散的溶液中快速加入5 mL鈦酸丁酯與乙醇的混合溶液，該混溶液中鈦酸丁酯與乙醇的體積比為1:4?8，攪拌20 min，80°C回流6 h，用水、乙醇各離心洗滌三次，得到TiP白色粉末；
(2)TiPiCd2+溶液的制備
將 I mL、40 mg/mLTiP 水溶液和 17 mL、6?14 mmol/L 的 Cd (NO3) 2.4H20 水溶液共混,50°C下攪拌4?24 h，離心，水洗滌3次，得到的TiPOCd2+用水分散為20 mg/mL的TiPOCd2+溶液；
(3)TiPiCd2+-Ab抗體孵化溶液的制備
向2mL、20 mg/mL的TiPOCd2+溶液中加入7.5 mL、l?3 mg/mL的聚丙烯胺鹽酸鹽水溶液，超聲2(T60 min，離心洗滌；分散在2 mL、質(zhì)量分數(shù)為1.(Γ3.5%的戊二醛水溶液中，震蕩2 h并離心，用pH為7.4的PBS稀釋為2 mL ;加入10?100 μ L、I mg/mL環(huán)境雌激素抗體Ab溶液，振蕩20 h，用pH為7.4的PBS離心洗滌，最后分散在5 mL、pH為7.4的PBS中，制得TiPOCd2+-Ab抗體孵化溶液，4°C下保存?zhèn)溆谩?br> [0012]4.環(huán)境雌激素的檢測步驟
(I)在所制備的光電化學傳感器電極表面，滴加4 μ?、0.7 mol/L的Na2S溶液，放置30?80 min ；
(2)使用電化學工作站以三電極體系進行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉬絲電極為輔助電極，所制備的光電化學傳感器電極為工作電極，在10 mL、pH 7.(Γ7.5的含0.lmol/L抗壞血酸的PBS緩沖溶液中進行測試；
(3)用時間-電流法對環(huán)境刺激素標準溶液進行檢測，設置電壓為0.1 V，運行時間100s，照射LED燈波長為400?450 nm ；
(4)當背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔20s開燈持續(xù)照射10 S，記錄光電流，繪制工作曲線.-^4 ，
(5)將待測的環(huán)境雌激素樣品溶液代替環(huán)境雌激素標準溶液進行檢測。
[0013]5.本發(fā)明所述的環(huán)境雌激素選自下列之一:雌二醇，雌三醇，己烯雌酚，雙酚A，壬基酚，雌酮。
[0014]本發(fā)明的有益成果
(O與單純的T12相比，采用羅丹明B功能化T12，可有效提高光電轉(zhuǎn)換效率。
[0015](2)利用Cd2+功能化的TiP納米顆粒作為抗體被標記物，采用在電極表面直接滴加Na2S原位生成窄帶隙的CdS半導體納米材料，原料低廉、方法簡單。
[0016](3)電極表面原位生成的CdS與作為捕獲基底材料的T12具有良好的能帶匹配，有效的提高了 CdS的光電轉(zhuǎn)換效率，制得的傳感器實現(xiàn)了對環(huán)境雌激素的超靈敏檢測。
[0017](5)本發(fā)明利用半抗原、抗體的免疫反應，提高了檢測方法的特異性。
[0018](6)本發(fā)明制備的競爭型光電化學免疫傳感器，用于多種環(huán)境雌激素的檢測，響應時間短，檢測限低，線性范圍寬，可以實現(xiàn)簡單、快速、高靈敏和特異性檢測。

【具體實施方式】
[0019]實施例1 一種CdS敏化Ti02環(huán)境雌激素光電化學傳感器制備方法及應用
(1)將導電玻璃依次用丙酮、乙醇和超純水超聲清洗，氮氣吹干；取6PL、2mg/mL羅丹明B功能化T12溶液滴加到導電玻璃的導電面，室溫下晾干，400°C煅燒30 min,冷卻，得到羅丹明B-T12修飾的玻璃電極；
(2)在羅丹明B-T12修飾的玻璃電極表面，滴加4μ?、0.1 Pg/mL的環(huán)境雌激素標準溶液，超純水沖洗電極表面，4°C冰箱中晾干；
(3)繼續(xù)滴加4PL、質(zhì)量分數(shù)為1%的BSA溶液，封閉電極表面上非特異性活性位點，超純水沖洗電極表面，40C冰箱中晾干；
(4)繼續(xù)滴加4μ?環(huán)境雌激素標準溶液與抗體孵化溶液的混合液，超純水沖洗電極表面，4°C冰箱中晾干，制得了 CdS敏化T12光電化學傳感器。
[0020]所述環(huán)境雌激素標準溶液與抗體孵化溶液的混合液，是由等體積的TiPOCd2+-Ab抗體孵化溶液分別與不同濃度待測的環(huán)境雌激素標準溶液混合制得；所述不同濃度待測的環(huán)境雌激素標準溶液，其濃度為I pg/mL?20 ng/mL。
[0021 ] 實施例2 —種CdS敏化Ti02環(huán)境雌激素光電化學傳感器制備方法及應用
(I)將導電玻璃依次用丙酮、乙醇和超純水超聲清洗，氮氣吹干；取6 PL、3mg/mL羅丹明B功能化T12溶液滴加到導電玻璃的導電面，室溫下晾干，450°C煅燒45 min,冷卻，得到羅丹明B-T12修飾的玻璃電極； (2)在羅丹明B-T12修飾的玻璃電極表面，滴加4μ?、0.5 Pg/mL的環(huán)境雌激素標準溶液，超純水沖洗電極表面，4°C冰箱中晾干；
(3)繼續(xù)滴加4PL、質(zhì)量分數(shù)為2%的BSA溶液，封閉電極表面上非特異性活性位點，超純水沖洗電極表面，40C冰箱中晾干；
(4)繼續(xù)滴加4μ?環(huán)境雌激素標準溶液與抗體孵化溶液的混合液，超純水沖洗電極表面，4°C冰箱中晾干，制得了 CdS敏化T12光電化學傳感器。
[0022]所述環(huán)境雌激素標準溶液與抗體孵化溶液的混合液，是由等體積的TiPOCd2+-Ab抗體孵化溶液分別與不同濃度待測的環(huán)境雌激素標準溶液混合制得；所述不同濃度待測的環(huán)境雌激素標準溶液，其濃度為I pg/mL?20 ng/mL。
[0023]實施例3 —種CdS敏化Ti02環(huán)境雌激素光電化學傳感器制備方法及應用
(1)將導電玻璃依次用丙酮、乙醇和超純水超聲清洗,氮氣吹干；取6μ?、4 mg/mL羅丹明B功能化T12溶液滴加到導電玻璃的導電面，室溫下晾干，500°C煅燒60 min，冷卻，得到羅丹明B-T12修飾的玻璃電極；
(2)在羅丹明B-T12修飾的玻璃電極表面，滴加4μ?、1 Pg/mL的環(huán)境雌激素標準溶液，超純水沖洗電極表面，40C冰箱中晾干；
(3)繼續(xù)滴加4PL、質(zhì)量分數(shù)為3%的BSA溶液，封閉電極表面上非特異性活性位點，超純水沖洗電極表面，40C冰箱中晾干；
(4)繼續(xù)滴加4μ?環(huán)境雌激素標準溶液與抗體孵化溶液的混合液，超純水沖洗電極表面，4°C冰箱中晾干，制得了 CdS敏化T12光電化學傳感器。
[0024]所述環(huán)境雌激素標準溶液與抗體孵化溶液的混合液，是由等體積的TiPOCd2+-Ab抗體孵化溶液分別與不同濃度待測的環(huán)境雌激素標準溶液混合制得；所述不同濃度待測的環(huán)境雌激素標準溶液，其濃度為I pg/mL?20 ng/mL。
[0025]實施例4羅丹明B功能化T12溶液的制備
(1)T12粉末的制備
0.0lmol鈦酸四丁酯溶解于30 mL乙醇中，加入10 mL水，攪拌30 min，將混合溶液轉(zhuǎn)移到高壓釜中，200°C下反應5 h，所得到的產(chǎn)物用蒸餾水和無水乙醇離心洗滌，70°C條件下真空干燥12 h，得到T12粉末；
(2)羅丹明B功能化T12溶液的制備
取10 mg T12粉末加入到2.5 mL、0.1 mg/mL羅丹明B水溶液中，用0.lmol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至7,振蕩4 h,離心干燥,用水配成2 mg/mL的羅丹明B功能化T12溶液。
[0026]實施例5羅丹明B功能化T12溶液的制備
(1)T12粉末的制備
0.02 mol鈦酸四丁酯溶解于30 mL乙醇中，加入10 mL水，攪拌60 min，將混合溶液轉(zhuǎn)移到高壓釜中，200°C下反應8 h，所得到的產(chǎn)物用蒸餾水和無水乙醇離心洗滌，80 V條件下真空干燥12 h，得到T12粉末；
(2)羅丹明B功能化T12溶液的制備
取10 mg T12粉末加入到2.5 mL、0.15 mg/mL羅丹明B水溶液中，用0.lmol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至7,振蕩10 h,離心干燥,用水配成2 mg/mL的羅丹明B功能化T12溶液。
[0027]實施例6羅丹明B功能化T12溶液的制備 (1)T12粉末的制備
0.03 mol鈦酸四丁酯溶解于30 mL乙醇中，加入10 mL水，攪拌120 min，將混合溶液轉(zhuǎn)移到高壓釜中，200°C下反應10 h，所得到的產(chǎn)物用蒸餾水和無水乙醇離心洗滌，90°C條件下真空干燥12 h，得到T12粉末；
(2)羅丹明B功能化T12溶液的制備
取10 mg T12粉末加入到2.5 mL、0.2 mg/mL羅丹明B水溶液中，用0.1moI/LNaOHiI節(jié)pH至7,振蕩24 h,離心干燥,用水配成2 mg/mL的羅丹明B功能化T12溶液。
[0028]實施例7 TiPiCd2+-Ab抗體孵化溶液的制備
(1)TiP的制備
0.3 g的十二烷基硫酸鈉加20 mL乙醇超聲，向溶液中加入2 mL、質(zhì)量分數(shù)為85%的H3PO4,混合溶液攪拌4 h，生成白色的NaH2PO4沉淀，離心分散在少量乙醇中；向上述乙醇分散的溶液中快速加入5 mL鈦酸丁酯與乙醇的混合溶液，該混溶液中鈦酸丁酯與乙醇的體積比為1:4，攪拌20 min，80°C回流6 h，用水、乙醇各離心洗滌三次，得到TiP白色粉末；
(2)TiPiCd2+溶液的制備
將 I mL、40 mg/mLTiP 水溶液和 17 mL、6?14 mol/L 的 Cd (NO3) 2.4Η20 水溶液共混，50°C下攪拌4 h，離心，水洗滌3次，得到的TiPOCd2+用水分散為20 mg/mL的TiPOCd2+溶液；
(3)TiPiCd2+-Ab抗體孵化溶液的制備
向2mL、20 mg/mL的TiPOCd2+溶液中加入7.5 mL、l mg/mL的聚丙烯胺鹽酸鹽水溶液，超聲20min，離心洗滌；分散在2 mL、質(zhì)量分數(shù)為1.0%的戊二醛水溶液中，震蕩2 h并離心，用pH為7.4的PBS稀釋為2 mL ;加入10 μ LU mg/mL環(huán)境雌激素抗體Ab溶液，振蕩20h，用pH為7.4的PBS離心洗滌，最后分散在5 mL、pH為7.4的PBS中，制得TiPiCd2+-Ab抗體孵化溶液，4 °C下保存?zhèn)溆谩?br> [0029]實施例8 TiPiCd2+-Ab抗體孵化溶液的制備
(1)TiP的制備
0.3 g的十二烷基硫酸鈉加20 mL乙醇超聲，向溶液中加入3 mL、質(zhì)量分數(shù)為85%的H3PO4,混合溶液攪拌4 h，生成白色的NaH2PO4沉淀，離心分散在少量乙醇中；向上述乙醇分散的溶液中快速加入5 mL鈦酸丁酯與乙醇的混合溶液，該混溶液中鈦酸丁酯與乙醇的體積比為1:6，攪拌20 min，80°C回流6 h，用水、乙醇各離心洗滌三次，得到TiP白色粉末；
(2)TiPiCd2+溶液的制備
將 I mL、40 mg/mLTiP 水溶液和 17 mL、10 mmol/L 的 Cd (NO3) 2.4H20 水溶液共混，50°C下攪拌20 h，離心，水洗滌3次，得到的TiPOCd2+用水分散為20 mg/mL的TiPOCd2+溶液；
(3)TiPiCd2+-Ab抗體孵化溶液的制備
向2mL、20 mg/mL的TiPOCd2+溶液中加入7.5 mL、2 mg/mL的聚丙烯胺鹽酸鹽水溶液，超聲45 min，離心洗滌；分散在2 mL、質(zhì)量分數(shù)為2.0%的戊二醛水溶液中，震蕩2 h并離心，用pH為7.4的PBS稀釋為2 mL ;加入50 μ L、I mg/mL環(huán)境雌激素抗體Ab溶液，振蕩20h，用pH為7.4的PBS離心洗滌，最后分散在5 mL、pH為7.4的PBS中，制得TiPiCd2+-Ab抗體孵化溶液，4 °C下保存?zhèn)溆谩?br> [0030]實施例OTiPOCd2+-Ab抗體孵化溶液的制備，步驟如下:
(I)TiP的制備 0.3 g的十二烷基硫酸鈉加20 mL乙醇超聲，向溶液中加入4 mL、質(zhì)量分數(shù)為85%的H3PO4,混合溶液攪拌4 h，生成白色的NaH2PO4沉淀，離心分散在少量乙醇中；向上述乙醇分散的溶液中快速加入5 mL鈦酸丁酯與乙醇的混合溶液，該混溶液中鈦酸丁酯與乙醇的體積比為1:8，攪拌20 min，80°C回流6 h，用水、乙醇各離心洗滌三次，得到TiP白色粉末；
(2)TiPiCd2+溶液的制備
將 I mL、40 mg/mLTiP 水溶液和 17 mL、14 mmol/L 的 Cd (NO3) 2.4H20 水溶液共混，50°C下攪拌24 h，離心，水洗滌3次，得到的TiPOCd2+用水分散為20 mg/mL的TiPOCd2+溶液；
(3)TiPiCd2+-Ab抗體孵化溶液的制備
向2mL、20 mg/mL的TiPOCd2+溶液中加入7.5 mL、3 mg/mL的聚丙烯胺鹽酸鹽水溶液,超聲60 min，離心洗滌；分散在2 mL、質(zhì)量分數(shù)為3.5%的戊二醛水溶液中，震蕩2 h并離心，用pH為7.4的PBS稀釋為2 mL ;加入100 μ L、I mg/mL環(huán)境雌激素抗體Ab溶液，振蕩20h，用pH為7.4的PBS離心洗滌，最后分散在5 mL、pH為7.4的PBS中，制得TiPiCd2+-Ab抗體孵化溶液，4 °C下保存?zhèn)溆谩?br> [0031]實施例10雌二醇的檢測
(1)在所制備的光電化學傳感器電極表面，滴加4μ?、0.7 mol/L的Na2S溶液，放置30?80 min ；
(2)使用電化學工作站以三電極體系進行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉬絲電極為輔助電極，所制備的光電化學傳感器電極為工作電極，在10 mL、pH 7.(Γ7.5的含0.1 mol/L抗壞血酸的PBS緩沖溶液中進行測試；
(3)用時間-電流法對分析物標準溶液進行檢測，設置電壓為0.1 V，運行時間100 S，照射LED燈波長為400?450 nm ；
(4)當背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔20s開燈持續(xù)照射10 S，記錄光電流，繪制工作曲線.-^4 ，
(5)按照繪制工作曲線的方法進行雌二醇樣品分析，測得線性范圍為5pg/πιΠθ ng/mL，檢測限為2pg/mL。
[0032]實施例11雌三醇的檢測
繪制工作曲線步驟同實施例10，按照繪制工作曲線的方法進行雌三醇樣品分析，測得線性范圍為1.5 pg/mL^10 ng/mL，檢測限為0.85pg/mL。
[0033]實施例12己烯雌酚的檢測
繪制工作曲線步驟同實施例10，按照繪制工作曲線的方法進行己烯雌酚樣品分析，測得線性范圍為7.5 pg/mL?13 ng/mL,檢測限為2.3pg/mL。
[0034]實施例13雙酚A的檢測
繪制工作曲線步驟同實施例10，按照繪制工作曲線的方法進行雙酚A樣品分析，測得線性范圍為5 pg/mL?8 ng/mL,檢測限為1.5pg/mL。
[0035]實施例14壬基酚的檢測
繪制工作曲線步驟同實施例10，按照繪制工作曲線的方法進行壬基酚樣品分析，測得線性范圍為10 pg/mL?20 ng/mL,檢測限為2.8pg/mL。
[0036]實施例14雌酮的檢測
繪制工作曲線步驟同實施例10，按照繪制工作曲線的方法進行雌酮樣品分析，測得線性范圍為8 pg/mL?18 ng/mL,檢測限為1.8pg/mL。
【權利要求】
1.一種CdS敏化T12環(huán)境雌激素光電化學傳感器制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將導電玻璃依次用丙酮、乙醇和超純水超聲清洗,氮氣吹干；取6μ?、2?4mg/mL羅丹明B功能化T12溶液滴加到導電玻璃的導電面，室溫下晾干，40(T50(TC煅燒3(T60min，冷卻，得到羅丹明B-T12修飾的玻璃電極； (2)在羅丹明B-T12修飾的玻璃電極表面，滴加4μ?、0.Γ? Pg/mL的環(huán)境雌激素標準溶液，超純水沖洗電極表面，4°C冰箱中晾干； (3)繼續(xù)滴加4PL、質(zhì)量分數(shù)為廣3%的BSA溶液，封閉電極表面上非特異性活性位點，超純水沖洗電極表面，40C冰箱中晾干； (4)繼續(xù)滴加4μ?環(huán)境雌激素標準溶液與抗體孵化溶液的混合液，超純水沖洗電極表面，4°C冰箱中晾干，制得了 CdS敏化T12光電化學傳感器； 所述環(huán)境雌激素標準溶液與抗體孵化溶液的混合液，是由等體積的TiPOCd2+-Ab抗體孵化溶液分別與不同濃度待測的環(huán)境雌激素標準溶液混合制得； 所述不同濃度待測的環(huán)境雌激素標準溶液，其濃度為I pg/mL?20 ng/mL。
2.如權利要求1所述的一種CdS敏化T12環(huán)境雌激素光電化學傳感器制備方法，所述羅丹明B功能化T12溶液，其特征在于，制備步驟如下: (1)T12粉末的制備 0.0Γ0.03 mo I鈦酸四丁酯溶解于30mL乙醇中，加入1mL水，攪拌30?120min，將混合溶液轉(zhuǎn)移到高壓釜中，200°C下反應5?10h，所得到的產(chǎn)物用蒸餾水和無水乙醇離心洗滌，7(T90°C條件下真空干燥12h，得到T12粉末； (2)羅丹明B功能化T12溶液的制備 取10 mg T12粉末加入到2.5 mL、0.Γθ.2 mg/mL羅丹明B水溶液中，用0.lmol/LNaOH調(diào)節(jié)pH至7,振蕩4?24 h,離心干燥,用水配成2 mg/mL的羅丹明B功能化T12溶液。
3.如權利要求1所述的一種CdS敏化T12環(huán)境雌激素光電化學傳感器制備方法，所述TiPiCd2+-Ab抗體孵化溶液，其特征在于，制備步驟如下: (1)TiP的制備 0.3 g的十二烷基硫酸鈉加20 mL乙醇超聲，向溶液中加入2?4 mL、質(zhì)量分數(shù)為85%的H3PO4,混合溶液攪拌4 h，生成白色的NaH2PO4沉淀，離心分散在少量乙醇中；向上述乙醇分散的溶液中快速加入5 mL鈦酸丁酯與乙醇的混合溶液，該混溶液中鈦酸丁酯與乙醇的體積比為1:4?8，攪拌20 min，80°C回流6 h，用水、乙醇各離心洗滌三次，得到TiP白色粉末； (2)TiPiCd2+溶液的制備 將 I mL、40 mg/mLTiP 水溶液和 17 mL、6?14 mmol/L 的 Cd (NO3) 2.4H20 水溶液共混,50°C下攪拌4?24 h，離心，水洗滌3次，得到的TiPOCd2+用水分散為20 mg/mL的TiPOCd2+溶液； (3)TiPiCd2+-Ab抗體孵化溶液的制備 向2mL、20 mg/mL的TiPOCd2+溶液中加入7.5 mL、l?3 mg/mL的聚丙烯胺鹽酸鹽水溶液，超聲2(T60 min，離心洗滌；分散在2 mL、質(zhì)量分數(shù)為1.(Γ3.5%的戊二醛水溶液中，震蕩2 h并離心，用pH為7.4的PBS稀釋為2 mL ;加入10?100 μ L、I mg/mL環(huán)境雌激素抗體Ab溶液，振蕩20 h，用pH為7.4的PBS離心洗滌，最后分散在5 mL、pH為7.4的PBS中，制得TiPOCd2+-Ab抗體孵化溶液，4°C下保存?zhèn)溆谩?br> 4.如權利要求1所述的制備方法制得的一種CdS敏化T12環(huán)境雌激素光電化學傳感器制備方法，其特征在于，用于環(huán)境雌激素的檢測，檢測步驟如下: (1)在所制備的光電化學傳感器電極表面，滴加4μ?、0.7 mol/L的Na2S溶液，放置30?80 min ； (2)使用電化學工作站以三電極體系進行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉬絲電極為輔助電極，所制備的光電化學傳感器電極為工作電極，在10 mL、pH 7.(Γ7.5的含0.lmol/L抗壞血酸的PBS緩沖溶液中進行測試； (3)用時間-電流法對環(huán)境雌激素標準溶液進行檢測，設置電壓為0.1 V，運行時間100s，照射LED燈波長為400?450 nm ； (4)當背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔20s開燈持續(xù)照射10 S，然后記錄光電流，繪制工作曲線； (5)將待測的環(huán)境雌激素樣品溶液代替環(huán)境雌激素標準溶液進行檢測。
5.如權利要求1所述的一種CdS敏化T12環(huán)境雌激素光電化學傳感器制備方法,其特征在于，所述環(huán)境環(huán)境雌激素選自下列之一:雌二醇，雌三醇，己烯雌酚，雙酚A，壬基酚，雌酮。
【文檔編號】G01N27/30GK104297305SQ201410451336
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年9月6日 優(yōu)先權日:2014年9月6日
【發(fā)明者】杜斌, 黎榮霞, 閆濤, 魏琴, 朱寶存, 吳丹 申請人:濟南大學