本發(fā)明涉及蘆薈苷和蘆薈大黃素檢測的技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種高效液相色譜-二極管陣列/熒光檢測器串聯(lián)檢測蘆薈苷A、B和蘆薈大黃素的方法。

背景技術(shù)：
現(xiàn)有研究表明蒽醌類化合物是蘆薈的主要藥效成分。其中蘆薈苷是蘆薈的標(biāo)志性成分，它具有致瀉、抗炎、抗菌、抗腫瘤、抗糖尿病等活性，2010年版《中華人民共和國藥典》將蘆薈苷作為蘆薈藥材的質(zhì)控成分，此外蘆薈苷有一定的細(xì)胞毒性，在食品和保健品中蘆薈苷則是一種限制性成分，因此蘆薈苷成為評價(jià)蘆薈品質(zhì)優(yōu)劣以及安全性的重要指標(biāo)。但是，蘆薈苷在溶液狀態(tài)下很不穩(wěn)定，最近我們的研究表明蘆薈苷溶解于水后很不穩(wěn)定，會立即發(fā)生分解與聚合，在中性（pH7.0）、室溫條件下600ug/mL濃度的蘆薈苷溶液1天后，蘆薈苷降解了近50%，5天降解90%以上，在該條件下降解產(chǎn)物經(jīng)分析鑒定為蘆薈大黃素與elgonica-dimer，經(jīng)細(xì)胞毒理MTT實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明后二者毒性遠(yuǎn)大于蘆薈苷，也就是說，蘆薈提取物配成水溶液放置后蘆薈苷的量在不斷降低，蘆薈大黃素與elgonica-dimer在不斷增加，因此僅僅對蘆薈苷的含量進(jìn)行測定無法滿足對產(chǎn)品有效性和安全性的質(zhì)量控制。對于蘆薈產(chǎn)品，科學(xué)可靠的質(zhì)量控制方法應(yīng)該同時(shí)測定其中蘆薈苷和蘆薈大黃素的含量，以保證蘆薈產(chǎn)品的安全有效，因此蘆薈苷、蘆薈大黃素高靈敏度同時(shí)測定的方法成為蘆薈產(chǎn)品質(zhì)量控制的關(guān)鍵技術(shù)。另外，對于蘆薈產(chǎn)品，國際蘆薈科學(xué)委員會（IASC）建議其中蘆薈苷含量不超過10ppm，因此蘆薈產(chǎn)品中所含蘆薈苷和蘆薈大黃素含量很低，有的產(chǎn)品中蘆薈苷含量可能低于1ppm，因此需要建立一種靈敏度高（低于1ppm）、專屬性強(qiáng)、樣品前處理簡單、操作簡便，同時(shí)進(jìn)行蘆薈苷和蘆薈大黃素含量測定的方法。目前，蘆薈苷和蘆薈大黃素的含量測定方法主要都有紫外-可見分光光度法、熒光光度法、電化學(xué)分析法、薄層掃描法、高效液相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法；同時(shí)測定這兩個(gè)化合物的方法主要有高效液相色譜法、電化學(xué)分析方法和高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法。氣質(zhì)聯(lián)用和液質(zhì)聯(lián)用可以有效的提高檢測方法的靈敏度，但是氣質(zhì)聯(lián)用需要復(fù)雜的衍生化過程，檢測成本高，較為簡便的方法中如電化學(xué)方法又存在重現(xiàn)性較差的問題，紫外可見分光光度法則專屬性不強(qiáng)，靈敏度不高，熒光光度法的雖然靈敏度高但與紫外可見分光光度法類似專屬性不強(qiáng)，很難排除蘆薈產(chǎn)品中其它蒽醌和色酮類成分的干擾。植物體中蘆薈苷是以一對光學(xué)異構(gòu)體蘆薈苷A和蘆薈苷B存在，然而上述檢測方法在蘆薈苷的測定中是往往僅測定了蘆薈苷A的含量，漏掉了蘆薈苷B的量，這主要存在以下原因，首先現(xiàn)有檢測方法的存在色譜峰分離度不夠高，易受其他蒽醌和色酮類成分的干擾；再者目前市場上供應(yīng)的蘆薈苷含量測定對照品僅有蘆薈苷A，因此上述檢測方法對蘆薈苷的測定中是往往僅測定了蘆薈苷A的含量，漏掉了蘆薈苷B的量。這也就影響了現(xiàn)有檢測方法的檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有微量蘆薈苷和蘆薈大黃素同時(shí)檢測的技術(shù)問題，提供一種高效液相色譜-二極管陣列/熒光檢測器串聯(lián)檢測蘆薈苷A、B和蘆薈大黃素的方法。本方法大大提高了蘆薈大黃素檢測的靈敏度和保證了蘆薈苷含量檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。本發(fā)明的上述目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種高效液相色譜-二極管陣列/熒光檢測器串聯(lián)檢測蘆薈樣品中蘆薈苷A、B和蘆薈大黃素的方法，采用色譜條件為：使用規(guī)格為250mm×4.6mm、5μm的AgilentTC-C18色譜柱；流動(dòng)相為乙腈和超純水；梯度洗脫程序?yàn)?至21min，20%~26%乙腈、21至35min，26%~45%乙腈、35至50min，45%~55%乙腈；每次進(jìn)樣之間以初始流動(dòng)相比例平衡色譜柱10min；柱溫為32～37℃，進(jìn)樣量為20μL，流速為1.0mL/min；二極管陣列檢測器的檢測波長為356nm；熒光檢測器的檢測波長為λex=428nm，λem=520nm；所述蘆薈樣品為庫拉索蘆薈的制品。一種高效液相色譜-二極管陣列/熒光檢測器串聯(lián)檢測蘆薈樣品中蘆薈苷A、B和蘆薈大黃素的方法，包括以下步驟：S1.按現(xiàn)有方法制備待測液與對照品溶液；S2.含量的測定：采用高效液相色譜-二極管陣列檢測器和熒光檢測器串聯(lián)測定S1中的待測液和對照品溶液，得到相應(yīng)的峰面積；采用色譜條件為：使用規(guī)格為250mm×4.6mm、5μm的AgilentTC-C18色譜柱；流動(dòng)相為乙腈和超純水；梯度洗脫程序?yàn)?至21min，20%~26%乙腈、21至35min，26%~45%乙腈、35至50min，45%~55%乙腈；每次進(jìn)樣之間以初始流動(dòng)相比例平衡色譜柱10min；柱溫為32～37℃，進(jìn)樣量為20μL，流速為1.0mL/min；二極管陣列檢測器的檢測波長為356nm；熒光檢測器的檢測波長為λex=428nm，λem=520nm；S3.根據(jù)S2中得到的待測液和對照品溶液的峰面積計(jì)算得到待測樣品中蘆薈苷A、蘆薈苷B和蘆薈大黃素的含量；所述蘆薈樣品為庫拉索蘆薈的制品。本發(fā)明中，流動(dòng)相的乙腈和超純水按體積比混合。蘆薈大黃素在一定的激發(fā)波長下能發(fā)出較強(qiáng)的熒光，采用熒光檢測器可以大大提高其檢測靈敏度。本發(fā)明采用高效液相色譜-二極管陣列檢測器串聯(lián)熒光檢測器的方法對低含量或微量的蘆薈苷和蘆薈大黃素進(jìn)行檢測，實(shí)現(xiàn)了蘆薈苷和蘆薈大黃素同時(shí)檢測的目的，本方法還可排除樣品中其他不會產(chǎn)生熒光物質(zhì)的干擾，使其蘆薈大黃素的檢測專屬性更強(qiáng)，其檢測限可以比現(xiàn)有紫外檢測法高出二個(gè)數(shù)量級。蘆薈苷A和蘆薈苷B是一對異構(gòu)體，如果沒有合適的條件很難將其分離，而且這兩種物質(zhì)的峰重疊在一起往往是不規(guī)整的疊加，即使將其分離，也有可能因?yàn)榛€分離不好，而導(dǎo)致難以準(zhǔn)確計(jì)算其積分峰面積，使測量結(jié)果不準(zhǔn)確。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，由于庫拉索蘆薈中除了蘆薈苷、蘆薈大黃素外，還有很多其他成分，其極性分布廣，其中不少成分與蘆薈苷A和B極性相近似、不少成分與蘆薈大黃素極性相似，因此在洗脫時(shí)需要在本申請所限定的條件下緩慢的提高有機(jī)相的比例，才能保證蘆薈苷A和蘆薈苷B、蘆薈大黃素有良好的分離度，并且使基線平整，為準(zhǔn)確地測量待測物中蘆薈苷的含量提供可能。另外，現(xiàn)有技術(shù)中也有通過色譜柱及流動(dòng)相的選擇實(shí)現(xiàn)蘆薈苷A和蘆薈苷B的分離，但是流動(dòng)相中通常需要采用乙酸，乙酸對色譜柱存在腐蝕性，長期使用會降低普通色譜柱壽命，要么需要選用一些耐pH值更好的色譜柱，這樣會增加成本。而本申請中，僅使用乙腈水溶液即能很好地實(shí)現(xiàn)分離，乙腈不會腐蝕色譜柱，因此可以相對地延長色譜柱壽命，也可以減少對色譜柱的要求。由于蘆薈中的蒽醌類成分極性比較大，常規(guī)提取方法多采用低級醇類，如甲醇、乙醇是比較適合的溶劑。甲醇的提取速度快，沒有區(qū)分效應(yīng)，可以將樣品中的化學(xué)成分全面提取，不易丟失成分。優(yōu)選地，S1為往蘆薈待測物中加入甲醇，再經(jīng)超聲處理后過濾，得到待測液；分別往蘆薈苷A和蘆薈大黃素的對照品中加甲醇溶解，得到蘆薈苷A和蘆薈大黃素的對照品溶液。由于存在著蘆薈苷A和蘆薈大黃素的標(biāo)準(zhǔn)對照品，因此本發(fā)明中S3為根據(jù)S2中得到的對照品溶液的峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到待測樣品中蘆薈苷A、蘆薈苷B和蘆薈大黃素的含量。本發(fā)明使用標(biāo)準(zhǔn)曲線法操作更加簡單方便，更適用于大批量樣品的檢測。由于市面上沒有蘆薈苷B標(biāo)準(zhǔn)對照品出售，并且蘆薈苷B很不穩(wěn)定，因此發(fā)明人采用前期研究的方法（見《李婷,鐘英,王芝,萬金志.蘆薈苷A、B以及異蘆薈色苷D的同時(shí)分離純化[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2011,05:878-881》）制備的蘆薈苷B對照品，用來鑒定蘆薈苷B色譜峰。本發(fā)明在蘆薈苷B含量的計(jì)算方法為，在DAD色譜圖中計(jì)算出蘆薈苷B的色譜峰面積，通過蘆薈苷A對照品所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線公式，計(jì)算出蘆薈苷B的濃度值。由于利用超聲方式進(jìn)行提取，可使甲醇快速地進(jìn)入蘆薈制品中，將其所含的蘆薈苷和蘆薈大黃素盡可能完全地溶于甲醇之中，大大提高提取效率，縮短提取時(shí)間。優(yōu)選地，本發(fā)明所述S1中超聲處理的時(shí)間為30min，超聲次數(shù)為1次。優(yōu)選地，本發(fā)明中所述S2中柱溫為35℃。本發(fā)明中所述蘆薈待測物為庫拉索蘆薈的制品。庫拉索蘆薈為百合科蘆薈屬植物，具有抗癌、消炎、殺菌、抗病毒、保肝及增強(qiáng)免疫等藥理作用。優(yōu)選地，所述庫拉索蘆薈的制品為庫拉索蘆薈花干粉、庫拉索蘆薈全葉粉、庫拉索蘆薈精粉、蘆薈全葉凍干粉、蘆薈全葉烘干粉、200:1凝膠噴干粉、200:1凝膠凍干粉、庫拉索蘆薈藥材粉、10:1食品級凝膠汁凍干粉、庫拉索蘆薈凝膠凍干粉、含黃色汁液的蘆薈凝膠凍干粉、漂洗的庫拉索蘆薈凝膠凍干粉、未漂洗的庫拉索蘆薈凝膠凍干粉。庫拉索蘆薈凝膠凍干粉為庫拉索蘆薈新鮮葉片去皮后，勻漿后過濾、真空冷凍干燥制成。相比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下有益效果：本發(fā)明的檢測方法能使待測成分與相鄰色譜峰達(dá)到基線分離的效果，方法的回收率高，重現(xiàn)性好。本發(fā)明的檢測方法對蘆薈苷和蘆薈大黃素分別在0.375～75.000ug/mL和0.130～52.000ug/mL濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（r2>0.9998），最低檢測限（LOD）分別為0.080ug/mL和0.010ug/mL，待檢測組分的日內(nèi)及日間精密度RSD均小于4%。對蘆薈苷的LOQ可以完全滿足IASC對1·口服蘆薈產(chǎn)品中蘆薈苷的含量限定（10ppm）的檢測要求。本發(fā)明為蘆薈產(chǎn)品中蘆薈苷A、B和蘆薈大黃素的質(zhì)量控制提供了一種有效方法。本發(fā)明采用高效液相色譜-二極管陣列檢測器串聯(lián)熒光檢測器的方法，本方法能夠使蘆薈苷A和蘆薈苷B的色譜峰被完全分離，可同時(shí)準(zhǔn)確測定蘆薈產(chǎn)品中的蘆薈苷A、蘆薈苷B和蘆薈大黃素。本發(fā)明測定蘆薈樣品中的蘆薈苷是計(jì)算蘆薈苷總量即應(yīng)該是蘆薈苷B和蘆薈苷A含量的總和，真實(shí)客觀地體現(xiàn)蘆薈苷的量。附圖說明圖1為不同超聲次數(shù)對蘆薈苷和蘆薈大黃素的提取率的影響；圖2為蘆薈苷的紫外吸收圖；圖3為蘆薈大黃素的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜圖；圖4為對照品（a）及庫拉索蘆薈全葉粉（b）的HPLC分析色譜圖（a1和b1為DAD色譜圖，a2和b2為FLD色譜圖）；圖5為蘆薈苷A的回歸曲線（a）和蘆薈大黃素回歸曲線（b）；圖6為對比例1中蘆薈苷的色譜圖（a）和蘆薈大黃素的色譜圖（b）。圖7為對比例2中蘆薈苷的色譜圖（a）和蘆薈大黃素的色譜圖（b）。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。除非特別說明，本發(fā)明實(shí)施例中采用的原料和方法為本領(lǐng)域常規(guī)市購的原料和常規(guī)使用的方法。以下各個(gè)實(shí)施例中使用的相同的儀器和藥品如下：LC-20AT型高效液相色譜儀（日本島津公司），包括SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器，LC-20AD二元泵，CTO-20A柱溫箱，SPD-M20A二極管陣列檢測器，RF-20A熒光檢測器；AB135-S型十萬分之一天平（德國瑞士梅特勒公司）；乙腈（色譜純，Burdick&Jackson，美國）；超純水（PureLabUltra超純水系統(tǒng)，英國ELGA公司）；所有其他試劑均為分析純（天津大茂化學(xué)試劑廠）；蘆薈苷A標(biāo)準(zhǔn)品（成都曼思特生物科技有限公司，批號：MUST-12121804）；蘆薈大黃素對照品（上海同田生物技術(shù)有限公司，批號：10081531）；庫拉索蘆薈全葉粉樣品。實(shí)施例1一種高效液相色譜-二極管陣列/熒光檢測器串聯(lián)檢測蘆薈苷A、B和蘆薈大黃素的方法，包括以下步驟：S1.待測液的制備和對照品溶液的制備：分別精確稱取適量的蘆薈待測物于50mL容量瓶中，精密加入50mL甲醇超聲30min提取待測成分，放至室溫后補(bǔ)足損失的甲醇，經(jīng)0.22um微孔濾膜過濾，得到待測液。分別精密稱取適量蘆薈苷A和蘆薈大黃素對照品，加甲醇制成蘆薈苷A濃度為75.000ug/mL、蘆薈大黃素濃度為52.000ug/mL的對照品溶液儲備液，進(jìn)一步用甲醇配制成不同濃度梯度的對照品溶液。S2.含量的測定：采用高效液相色譜-二極管陣列檢測器和熒光檢測器串聯(lián)測定S1中的待測液和對照品溶液，得到相應(yīng)的峰面積；采用色譜條件為：使用規(guī)格為250mm×4.6mm、5μm的AgilentTC-C18色譜柱；流動(dòng)相為乙腈和超純水；梯度洗脫程序?yàn)??21min，20%?26%乙腈、21?35min，26%~45%乙腈、35?50min，45%~55%乙腈；每次進(jìn)樣之間以初始流動(dòng)相比例平衡色譜柱10min；柱溫為35℃，進(jìn)樣量為20μL，流速為1.0mL/min；二極管陣列檢測器的檢測波長為356nm；熒光檢測器的檢測波長為λex=428nm，λem=520nm。S3.含量的計(jì)算：根據(jù)S2中得到的對照品溶液的峰面積或峰高繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到待測樣品中蘆薈苷A、蘆薈苷B和蘆薈大黃素的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果（1）樣品制備超聲提取次數(shù)的考察用甲醇對庫拉索蘆薈全葉粉超聲提取一次，取20μL樣品溶液按S2的HPLC條件進(jìn)樣分析，轉(zhuǎn)移第一次提取液，再用甲醇對樣品進(jìn)行第二次超聲提取，取同樣體積的提取液進(jìn)高效液相色譜檢測，結(jié)果見圖1，縱坐標(biāo)為峰面積。結(jié)果表明用甲醇超聲一次即可較好的提取蘆薈苷和蘆薈大黃素。（2）色譜條件及樣品制備方法波長的選擇：分析蘆薈苷的紫外光譜圖（圖2），觀察其最大吸收波長，發(fā)現(xiàn)蘆薈苷在356nm處有較強(qiáng)的紫外吸收，封頂較平緩，故選擇測定蘆薈苷的波長為356nm。蘆薈大黃素本身有很強(qiáng)的熒光，用熒光分光光度計(jì)分別掃描激發(fā)光譜和發(fā)射光譜（圖3），發(fā)現(xiàn)蘆薈大黃素的最大激發(fā)波長λex=428nm，最大發(fā)射波長λem=520nm，故熒光檢測器的λex和λem分別設(shè)定為428nm和520nm。流動(dòng)相：采用乙腈-水體系時(shí)，蘆薈苷A和蘆薈苷B有良好的分離以及蘆薈大黃素峰型良好，洗脫時(shí)間較快，故選擇乙腈-水體系進(jìn)行洗脫。在該條件下，庫拉索蘆薈全葉粉及蘆薈苷和蘆薈大黃素對照品分離色譜圖見圖4。發(fā)明人前期已對蘆薈苷A和蘆薈苷B色譜峰的進(jìn)行了鑒別并制備了蘆薈苷A、蘆薈苷B和蘆薈大黃素標(biāo)準(zhǔn)樣品。制備方法參考《李婷,鐘英,王芝,萬金志.蘆薈苷A、B以及異蘆薈色苷D的同時(shí)分離純化[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2011,05:878-881》。（3）系統(tǒng)適用性考察由于庫拉索蘆薈全葉粉中成分復(fù)雜，干擾成分較多，因此選取批號為20061001的庫拉索蘆薈全葉粉作為方法學(xué)考察樣品。取同一份庫拉索蘆薈全葉粉按色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算理論塔板數(shù)、分離度和拖尾因子。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蘆薈苷A、蘆薈苷B、蘆薈大黃素與相鄰成分分離良好，不受其他組分的干擾，色譜柱的理論塔板數(shù)、分離度、拖尾因子見表1。表1系統(tǒng)適用性結(jié)果a表示未檢測到該成分（4）標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍分別精密量取蘆薈苷A、蘆薈大黃素的對照品貯備液適量，制備系列濃度的對照品溶液。按S2的色譜條件分別對不同濃度的對照品溶液進(jìn)行分析，每樣重復(fù)三次，以峰面積值Y為縱坐標(biāo)，對照品溶液濃度X（ug/mL）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。蘆薈苷A和蘆薈大黃素的回歸方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)見表2和圖5。檢測限(LOD)和定量限(LOQ)是當(dāng)信噪比(S/N)分別為3和10時(shí)化合物的濃度(ug/mL)。該方法對蘆薈苷的定量限為0.300ug/mL，可以滿足IASC對口服蘆薈產(chǎn)品中蘆薈苷的含量限定（10ppm）的檢測要求。蘆薈苷B含量的計(jì)算方法與蘆薈苷A的計(jì)算方法相同，用由蘆薈苷A對照品所得的回歸方程Y=27411X－407.61（其中Y為峰面積值，X為濃度（ug/mL）），計(jì)算出蘆薈苷B的濃度值計(jì)算。表2蘆薈苷A和蘆薈大黃素標(biāo)準(zhǔn)曲線（n=3）aY為峰面積值，X為濃度（ug/mL）；a和b分別是回歸方程的斜率和截距。（5）精密度分別按表3所列，取低、中、高三個(gè)濃度的混合對照品溶液，精密吸取20uL按S2的色譜條件進(jìn)行分析。每個(gè)濃度日內(nèi)測6次，連續(xù)測3天，計(jì)算RSD。結(jié)果表明，蘆薈苷A和蘆薈大黃素的日內(nèi)及日間測定濃度的RSD小于4%，同時(shí)準(zhǔn)確度在99.68-104.49%之間，表明測定方法的精密度符合要求。具體結(jié)果見表3。表3日內(nèi)與日間精密度試驗(yàn)（n=6）a表示均值±標(biāo)準(zhǔn)差。（6）重復(fù)性取同一批庫拉索蘆薈全葉粉6份，按照S1中待測液的制備方法制備，按S2的HPLC條件測定供試品中蘆薈苷和蘆薈大黃素的峰面積，計(jì)算RSD。蘆薈苷A和蘆薈大黃素的保留時(shí)間和峰面積測定值的RSD均小于3%，表明測定方法的重復(fù)性良好，符合含量測定方法學(xué)要求，具體結(jié)果見表4。表4重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果(n=6)（7）樣品穩(wěn)定性取同一份庫拉索蘆薈全葉粉樣品，按照S1的方法制備待測液。分別于0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣，按S2的方法測定供試品中三種待測成分的峰面積。經(jīng)計(jì)算結(jié)果見表5，蘆薈苷A和蘆薈大黃素的保留時(shí)間和含量測定值RSD均小于2%，表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定性良好。表5穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果(n=6)（8）回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量的庫拉索蘆薈全葉粉樣品9份，精密加入低、中、高三個(gè)濃度的混合對照品溶液，每個(gè)濃度平行操作三份，按供試品溶液制備方法制得待測溶液，取20uL進(jìn)樣分析，計(jì)算加樣回收率和RSD值，結(jié)果見表6。蘆薈苷A和蘆薈大黃素的平均加樣回收率在95.79～103.64％范圍內(nèi)，RSD值均小于5%，表明方法的準(zhǔn)確度良好。表6回收率試驗(yàn)(n=3)a表示均值±標(biāo)準(zhǔn)差。對比例1本對比例采用甲醇-水體系作為流動(dòng)相，其余條件均與實(shí)施例1相同。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖6所示，采用甲醇-水體系作為流動(dòng)相時(shí)，由于庫拉索蘆薈全葉粉中與蘆薈苷A和B極性相似的成分較多，蘆薈苷、蘆薈大黃素不能得到基線分離，難與雜質(zhì)分開，蘆薈大黃素受樣品基質(zhì)影響導(dǎo)致峰型不佳，且洗脫時(shí)間超過90min。可見，使用甲醇-水體系作為流動(dòng)相無法準(zhǔn)確檢測蘆薈苷A和B、蘆薈大黃素的含量。對比例2本對比例采用乙腈-水體系作為流動(dòng)相，但不采用梯度洗脫程序，洗脫采用濃度為25%的乙腈水溶液，其余條件均與實(shí)施例1相同。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖7所示，采用乙腈水溶液作為流動(dòng)相，在某些條件下可以實(shí)現(xiàn)蘆薈苷A和蘆薈苷B的分離，基線分離度較采用甲醇流動(dòng)相好，但仔細(xì)比較，仍存在較多的雜質(zhì)峰，并且對于蘆薈苷B的峰型，依然容易與雜質(zhì)峰發(fā)生重疊。因此，仍無法滿足準(zhǔn)確測量。同時(shí)，蘆薈大黃素的出峰時(shí)間過程，無法實(shí)現(xiàn)同時(shí)快速檢測蘆薈苷A、蘆薈苷B和蘆薈大黃素。應(yīng)用例1庫拉索蘆薈的制品中各含量的測定結(jié)果取19批庫拉索蘆薈的制品（見表7）按本發(fā)明中S1的待測液制備方法配制樣品，每批平行操作3份，按S2的測定方法進(jìn)行測定并按S3計(jì)算結(jié)果，測定結(jié)果見表8。另外，采用現(xiàn)有方法對這19批庫拉索蘆薈的制品進(jìn)行了檢測，同樣測定結(jié)果見表8。表7中庫拉索蘆薈的制品由中山大學(xué)萬金志副教授鑒定，其中：蘆薈凝膠凍干粉的制備方法為：庫拉索蘆薈新鮮葉片去皮后，勻漿后過濾、真空冷凍干燥制成。漂洗的庫拉索蘆薈凝膠凍干粉的制備方法為：取新鮮的庫拉索蘆薈葉片，濾去葉片切口滲出的黃色汁液，去皮，取凝膠部分漂洗干凈，勻漿后過濾、真空冷凍干燥制成凍干粉。未漂洗的庫拉索蘆薈凝膠凍干粉的制備方法為：取新鮮的庫拉索蘆薈葉片，濾去葉片切口滲出的黃色汁液，去皮，不經(jīng)漂洗，勻漿后過濾、真空冷凍干燥制成。含黃色汁液的蘆薈凝膠凍干粉的制備方法為：取新鮮的庫拉索蘆薈葉片，直接去皮后，連同葉片切口滲出的黃色汁液一同勻漿，過濾、真空冷凍干燥制成。表7庫拉索蘆薈的制品的批號與來源表819批庫拉索蘆薈樣品中蘆薈苷和蘆薈大黃素的含量a表示均值±標(biāo)準(zhǔn)差。b表示未檢測到該成分。從表8中可知，本發(fā)明方法可以同時(shí)檢測各種庫拉索蘆薈制品中蘆薈苷A、蘆薈苷B和蘆薈大黃素的含量。