一種用于測定高密度脂蛋白膽固醇的試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于測定高密度脂蛋白膽固醇的試劑盒。所述試劑盒包括第一試劑和第二試劑，其中，第一試劑包括抑制非高密度脂蛋白溶解的表面活性劑I和溶解高密度脂蛋白的表面活性劑II，所述表面活性劑I和所述表面活性劑II混合后的HLB值在13～14范圍內(nèi)，表面活性劑I和表面活性劑II在第一試劑中的體積比為1:30～1:1。該試劑盒通過幾種成分的協(xié)同作用，提高了試劑盒的穩(wěn)定性，能特異性釋放HDL，同時能特異掩蔽抑制非HDL的解離，并可消除血清中其他成分的干擾，保證測量的準確性。
【專利說明】—種用于測定高密度脂蛋白膽固醇的試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及膽固醇的測定【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種用于測定高密度脂蛋白膽固醇的試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002]人體血液中的膽固醇除了游離膽固醇，大部分與極低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等脂蛋白結(jié)合成脂蛋白膽固醇形式存在。其中，HDL亦稱為al脂蛋白，比較富含磷脂質(zhì)，在血清中的含量約為300mg/dl。其蛋白質(zhì)部分，A — I約為75%，A — II約為20%。HDL接受來自于包括動脈壁的各組織的膽固醇，通過直接逆轉(zhuǎn)運或間接逆轉(zhuǎn)運，將其運入肝臟，再清除出血液，因此HDL與積累于細胞內(nèi)的膽固醇的除去作用相關(guān)。因此高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)是動脈粥樣硬化(AS)、冠心病(CHD)的等各種動脈硬化癥的危險預防因子(呈負相關(guān))，其在血液中的水平對動脈硬化性疾病的診斷有特異的輔助作用。
[0003]HDL-C增高最主要的臨床價值是能夠?qū)用}粥樣硬化斑塊的泡沫細胞轉(zhuǎn)移至肝臟排出體外，可見于原發(fā)性高密度脂蛋白血癥(家族性高α-脂蛋白血癥)，并發(fā)現(xiàn)此群家族中長壽者多。接受雌激素胰島素或某些藥物(如煙酸、維生素Ε，肝素等)治療者，亦可增高，蝦青素可顯著提升人類高密度脂蛋白膽固醇。高密度脂蛋白膽固醇降低常見于腦血管病冠心病、高甘油三酯血癥、肝功能損害如急慢性肝炎、肝硬化、肝癌、糖尿病、吸煙、缺少運動等其降低可作為冠心病的危險指標。因此，體內(nèi)高密度脂蛋白膽固醇濃度測定對診斷冠心病、心腦血管病、肝炎、肝硬化等疾病具有一定的參考意義。
[0004]目前HDL-C含量測定在臨床試驗中已經(jīng)常規(guī)化。美國膽固醇教育計劃(NCEP)對HDL-C測定的建議中指出=HDL-C測定的準確性非常重要，因為HDL-C在一個很窄的濃度范圍內(nèi)與冠心病呈負相關(guān)；CHD危險增高的界限是在HDL-C濃度范圍的低端，測定的細小誤差會產(chǎn)生相對大的影響。
[0005]測定高密度脂蛋白膽固醇的方法很多，目前市場上流通的主要是勻相測定法，包括PEG修飾酶法、選擇抑制法、清除法和免疫分離法。
[0006]PEG修飾法是用PEG修飾改性膽固醇酯酶(CEH)和膽固醇氧化酶(COD)，修飾酶對脂蛋白的結(jié)構(gòu)具有選擇性，其次序是LDL < VLDL < CM < HDL ;另外葡聚糖、α -環(huán)糊精硫酸鹽(α-S⑶)和Mg2+與非HDL形成復合物，可以避免修飾酶對非HDL的作用，因此在葡聚糖、Mg2+、a -環(huán)糊精硫酸鹽和修飾酶作用下可以直接測定HDL-C。
[0007]選擇抑制法(pro法)是在Rl (第一試劑)中含表面活性劑I (HDL-C的反應抑制劑)、聚陰離子和某種鹽，乳糜微粒(CM)、VLDL、LDL在多聚陰離子一鹽環(huán)境下發(fā)生凝聚，同時表面活性劑I與凝聚的脂蛋白的疏水集團有高度親和力，能吸附在凝聚的脂蛋白的顆粒表面形成遮蔽，抑制非HDL-C的反應，同時，HDL上也有表面活性劑I，但由于親和力較弱，反應時可逆的；R2(第二試劑)中含有對HDL親水基團有高度親和力的表面活性劑IUHDL-C的反應促進劑)，其對HDL的吸附不僅置換出第一反應中與HDL親和的表面活性劑I，還能使HDL形成可溶性復合物，使HDL-C參與反應。
[0008]清除法是利用表面活性劑對脂蛋白的親和性差異。在Rl (第一試劑)反應促進劑(表面活性劑I)的作用下，血清中非HDL形成可溶性復合物，可溶性復合物表層的游離膽固醇在COD催化下反應生成H2O2，通過過氧化物酶(POD)(或過氧化氫酶(CAT)，Rl中不加P0D,不加疊氮鈉)除去H2O2 ;然后，加入R2 (第二試劑)，在特殊選擇性表面活性劑作用下，只有HDL可溶，所釋放的膽固醇在膽固醇酯酶(CEH)和COD作用下，生成H2O2,通過POD (如果Rl中用CAT除去H2O2,則R2中要添加疊氮鈉抑制其作用)、4_AAP和色原，發(fā)生顯色反應，直接測定HDL-C。
[0009]免疫分離法有兩種，一是PEG/抗體包裹法，用低濃度的PEG4000包裹非HDL，加入特異性抗apoB、apoCIII抗體,使非HDL顆粒復合物凝聚,然后加入膽固醇酶試劑,檢測HDL-C，最后加入鹽酸胍試劑，終止酶促反應和溶解含apoB脂蛋白復合物，避免干擾吸光度測定；二是抗體免疫分離法，Rl中的抗人β脂蛋白抗體首先與血清中非HDL結(jié)合形成不溶性抗原-抗體復合物，加入R2后，復合物不與酶試劑起反應，只有HDL-C與酶試劑發(fā)生反應，生成H2O2,最后通過Trinder反應測定HDL-C含量。
[0010]PEG修飾法需要對酶進行修飾，很大程度上降低了酶的活性，造成成本增加；免疫分離法特異性抗體價格昂貴且反應步驟多，實用性差；清除法和選擇抑制法主要關(guān)鍵是表面活性劑的選擇，但表面活性劑的使用比較困難，對非HDL的掩蔽抑制不完全，同時對HDL的釋放不徹底。
[0011]針對上述問題，非常有必要開發(fā)一種對HDL-C的檢測更加靈敏的產(chǎn)品。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0012]本發(fā)明提供了一種測定高密度脂蛋白中的膽固醇的試劑盒，可簡單、高效地檢測高密度脂蛋白膽固醇的含量。
[0013]本發(fā)明提供的用于測定高密度脂蛋白中的膽固醇的試劑盒包括包括第一試劑(R1)，所述Rl包括抑制非高密度脂蛋白溶解的表面活性劑I和溶解高密度脂蛋白的表面活性劑II，并且所述表面活性劑I和所述表面活性劑II混合后的親水疏水平衡值(Hydrophile-Lipophile Balance Number,HLB 值)為 13 ?14。其中，HLB 值也稱水油度，它既與表面活性劑的親水親油性有關(guān)，又與表面活性劑的表面(界面)張力、界面上的吸附性、乳化性及乳狀液穩(wěn)定性、分散性、溶解性、去污性等基本性能有關(guān)，還與表面活性劑的應用性能有關(guān)。HLB值越大代表親水性越強，HLB值越小代表親油性越強，一般而言，HLB值從I?40之間。親油性表面活性劑HLB較低，親水性表面活性劑HLB較高。親水親油轉(zhuǎn)折點HLB為10。HLB小于10為親油性，大于10為親水性。HLB在實際應用中有重要參考價值。
[0014]在本申請中，除非標明或毫無疑義的表明HLB值是公式計算值還是實際測量值，否則在本申請中均指實際測量值。
[0015]在一個具體的實施方案中，所述表面活性劑I在所述Rl中的體積含量為0.1?3.0%。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述表面活性劑I在所述Rl中的體積含量為0.3?1.0%。
[0016]在一個具體的實施方案中，所述表面活性劑II在所述Rl中的體積含量為0.1?3.0%。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述表面活性劑II在所述Rl中的體積含量為1.0?2.5%。
[0017]在一個具體的實施方案中，所述表面活性劑I和所述表面活性劑II在所述Rl中的體積比為1:30?1:1。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述表面活性劑I和所述表面活性劑II在所述Rl中的體積比為1:20?1:1。在一個進一步優(yōu)選的實施方案中，所述表面活性劑I和所述表面活性劑II在所述Rl中的體積比為1:15?1: 1.5。
[0018]在一個具體的實施方案中，所述表面活性劑I選自聚氧乙烯烷基醚、(聚氧丙烯-聚氧乙烯)嵌段聚合物和壬基酚聚氧乙烯醚中的一種或多種；和/或所述表面活性劑II選自聚氧乙烯基聯(lián)苯乙烯化苯基醚、聚氧乙烯烷基醚、失水山梨糖醇脂肪酸酯和聚氧乙烯油酸酯中的一種或多種。例如，所述表面活性劑I選自Emulgen系列(如Emulgen A90、Emulgen220 和 Emulgen LS114 等)、Pluronic 系列(如 Pluronic F_88、Pluronic L121 和Pluronic F127等)、NP系列(如NP-30、NP-1O和NP-7等)中的任一種或多種；表面活性劑 II 選自 Emulgen 系列(Emulgen B66、Emulgen LS110、Emulgen709 等)、P1nin 系列(如P1nin D6512、P1nin YE309 等)、Noigen 系列(Noigen EA-157、Noigen EA-167、NoigenEA-177等)中的任一種或多種。
[0019]在一個具體的實施方案中，所述Rl還包括CAT和COD。將COD和CAT添加于Rl中，能夠消除游離膽固醇產(chǎn)生的H2O2，從而消除游離膽固醇的干擾。并且CAT的使用濃度優(yōu)選為100-1000KU/L，COD的使用濃度優(yōu)選為1-50KU/L。
[0020]在一個具體的實施方案中，所述Rl還包括抗壞血酸氧化酶和/或膽紅素氧化酶，分別用于氧化抗環(huán)血酸和氧化膽紅素。并且抗壞血酸氧化酶的使用濃度選自1-20KU/L，膽紅素氧化酶的使用濃度選自1-20KU/L。因為膽固醇測試原理是COD氧化膽固醇形成H2O2最終H202+4-AAP+T00S在過氧化物酶作用下生成醌類物質(zhì)，在546nm的波長下測試其吸光度。如果不加入抗壞血酸氧化酶，抗壞血酸會還原H2O2,消耗掉H2O2，對測試結(jié)果有影響；抗壞血酸氧化酶可將抗壞血酸氧化成去氫抗壞血酸，而去氫抗壞血酸不能還原H2O2,從而提高了測試結(jié)果的準確性。膽紅素本身有在450nm左右有吸收峰，會干擾吸光度，造成測試結(jié)果不準確。膽紅素氧化酶能氧化膽紅素成為膽綠素，而膽綠素在546nm波長附近無吸收峰。
[0021]在一個具體的實施方案中，所述Rl還包括聚陰離子、Mg2+、α -環(huán)糊精硫酸鹽、顯色齊U、第一防腐劑、第一保護劑和第一緩沖液。聚陰離子和Mg2+共同沉淀非HDL，a-S⑶有內(nèi)空腔的疏水環(huán)境，有微弱的極性與脂蛋白的疏水性基團結(jié)合，分子空腔外側(cè)為親水性基團，能包裹沉淀的非HDL，同時環(huán)糊精的磺酸基團可使CM、VLDL顆粒進入環(huán)狀的糊精結(jié)構(gòu)，可以避免酶的催化作用，其能力還與鹽濃度有關(guān)。
[0022]在一個具體的實施方案中，試劑盒中還包括第二試劑，所述第二試劑包括助色劑、過氧化物酶、膽固醇酯酶、第二防腐劑和第二緩沖液，并任選地包括第二保護劑。因為顯色劑和助色劑(例如4-AAP)放置一起，會緩慢反應形成顯色物質(zhì)，影響吸光度讀取，因此有必要分開，把顯色劑放在Rl中，助色劑放在R2中；或把助色劑放在Rl中，顯色劑放在R2中。因為整個反應是酶的反應，要保證Rl和R2中的pH和離子強度不影響酶的活性，因此要有合適的濃度和PH的緩沖液，即所述的第一緩沖液和所述的第二緩沖液，然后再加酶保護劑。另外，第一防腐劑和第二防腐劑可以相同，也可以不同，優(yōu)選它們相同；第一保護劑和第二保護劑可以相同，也可以不同，優(yōu)選它們相同；第一緩沖液可以相同，也可以不同，優(yōu)選它們相同。
[0023]在一個具體的實施方案中，所述聚陰離子的使用濃度選自0.l_5g/L，且所述聚陰離子選自硫酸葡聚糖、硫酸葡聚糖鹽、肝素、肝素鹽、鎢磷酸、鎢磷酸鹽、硫酸寡糖、硫酸寡糖鹽和硫酸軟骨素中的一種或多種。
[0024]在一個具體的實施方案中，所述α -環(huán)糊精硫酸鹽的使用濃度選自0.l_2g/L，且所述α-環(huán)糊精硫酸鹽選自鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、鎂鹽、鈣鹽中的任一種或多種。
[0025]在一個具體的實施方案中，所述顯色劑的濃度為0.5_5mmol/L。所述顯色劑選自苯胺類化合物或苯酚類化合物；所述苯胺類化合物選自N-(3_磺基丙基)苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙基)-3-甲基苯胺(TOOS)、N-乙基_N_(2_羥基-3-磺基丙基)_3，5- 二甲基苯胺(MAOS)、N-乙基-N-(2-羥基_3_磺基丙基)_3，5- 二甲氧基苯胺(DAOS)、N-乙基-N- (-3-磺基丙基)-3-甲基苯胺(TOPS)、N- (2-羥基-3-磺基丙基)-3,5-二甲氧基苯胺(HDAOS)、N，N-二甲基-3-甲基苯胺、N，N-二(3-磺基丙基)-3，5-二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)-3-甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)-3，5-二甲氧基苯胺、N-(3-磺基丙基)-3，5-二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)_3，5- 二甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙基)-3-甲氧基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙基)苯胺、N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N'-琥珀酰乙二胺(EMSE)、N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N '-乙酰乙二胺、N-乙基-N- (2-羥基-3-磺基丙基)-4-氟-3，5- 二甲氧基苯胺(F-DAOS)中的任一種；所述苯酚類化合物選自苯酚、4-氯苯酚、3-甲基苯酚、3-羥基-2，4，6-三碘苯甲酸(HTIB)中的任一種。
[0026]在一個具體的實施方案中,所述助色劑的使用濃度選自l-10mmol/L。所述助色劑選自4-氨基安替比林(4-AAP)或3-甲基-2-苯并噻唑啉酮肼。
[0027]在一個具體的實施方案中，所述POD的使用濃度為1-50KU/L。
[0028]在一個具體的實施方案中，所述CEH的使用濃度為1-50KU/L。
[0029]在一個具體的實施方案中，所述第一防腐劑的使用濃度為0.1-lml/L，所述第二防腐劑的使用濃度為0.l-2g/L。且所述第一防腐劑選自山梨酸鉀、苯甲酸鈉、亞硝酸鈉、Proclin系列中的任一種或多種；所述第二防腐劑為疊氮鈉。
[0030]在一個具體的實施方案中，所述第一保護劑的使用濃度選自l-10g/L，所述第二保護劑的使用濃度選自l_20g/L，且所述第一保護劑和所述第二保護劑各自獨立的選自甘油、白蛋白、蔗糖、NaCl, EDTA中的任一種或多種。保護劑通過與酶的基團結(jié)合，能夠降低其它成分對酶的抑制作用，提高酶的效率；或者與酶發(fā)生鍵合作用，穩(wěn)定酶的構(gòu)象；或者與重金屬離子結(jié)合，避免重金屬對酶活性的抑制；或者促進反應的進行。
[0031]在一個具體的實施方案中，所述第一緩沖液和所述第二緩沖液的使用濃度各自獨立的選自0.01-0.5mol/L，pH各自獨立的選自6.0-8.0，且所述第一緩沖液的溶劑和所述第二緩沖液的溶劑各自獨立地選自三羥甲基氨基甲烷緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑、Good’s緩沖劑、硼酸緩沖劑中的任一種或多種。其中，所述Good’ s緩沖劑選自2-嗎啉乙磺酸(MES)、二(2-羥基)亞氨基三(羥甲基)甲烷(Bis-Tris)、N-(2-乙酰胺)亞氨基二乙酸(ADA)、哌嗪-N，V -二(2-乙烷磺酸)(PIPES)、N-(2-乙酰胺)_2_氨基甲磺酸(BES)、3-嗎啉代丙磺酸(MOPS) ,N-[H (羥甲基)甲基]-2-氨基甲磺酸(TES)、2-[4-(2-羥甲基)-1-哌嗪]乙烷磺酸(HEPES)、3-[N，N ' -二(2-羥甲基)氨]_2_羥基丙磺酸(DIPSO) ,N-[H (羥甲基)甲基]-2-羥基-3-氨基丙磺酸(TAPSO)、哌嗪-N，-二(2-羥基丙磺酸)(POPSO)、3-[4-(2-羥甲基)-1_哌嗪]-2-羥基丙磺酸(HEPPSO)、3-[4_(2_羥甲基)_1_哌嗪]丙磺酸[(H)EPPS]、N-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸(Tricine)、N，V -二(2-羥甲基)甘氨酸(Bicine)、N-三(羥甲基)甲基_3_氨基丙磺酸(TAPS)、N-環(huán)己基-2-氨基甲磺酸(CHES)、N-環(huán)己基-3-氨基-2-羥基丙磺酸(CAPSO)、N-環(huán)己基-3-氨基丙磺酸(CAPS)中的任一種或多種。
[0032]在本發(fā)明的一個具體的實施方案中，第一試劑包括如上所述的表面活性劑1、所述表面活性劑I1、聚陰離子、Mg2+、第一防腐劑、第一保護劑、第一緩沖液、顯色劑、CAT、C0D、抗壞血酸氧化酶、膽紅素氧化酶和α-S⑶；第二試劑包括如上所述的第二緩沖液、第二保護劑、第二防腐劑、助色劑、POD和CEH。
[0033]在測定HDL-C時，許多廠家把表面活性劑I和表面活性劑II分別放置在Rl和R2中，沒有考慮表面活性劑的復配作用，或者考慮了復配作用，但是這些廠家忽略了測定過程中的酶反應是一個極快速的反應，兩種表面活性劑在復配的同時，酶同樣作用于非HDL，造成測試結(jié)果不準確。
[0034]而在本發(fā)明中的反應的第一階段，兩種表面活性劑同時在Rl中混合，混合后的表面活性劑通過疏水鍵、氫鍵等作用，所述表面活性劑的CMC值、HLB值等都會有復雜的變化，因而表面活性劑I和II的作用也不再是簡單的1+1 = 2的結(jié)果，而是具有協(xié)同增效作用。例如，把表面活性劑I和表面活性劑II復配添加在第一試劑中，表面活性劑I為掩蔽非HDL的主要表面活性劑，而表面活性劑II 一方面輔助表面活性劑I抑制非HDL的解離，另一方面又促進HDL的釋放，使得HDL在僅有第一試劑參與反應的第一階段就釋放完全，并與非HDL的掩蔽同步進行。
[0035]對于表面活性劑復配的HLB值，有研究通過公式(I)計算得到，但計算結(jié)果和實驗測量結(jié)果最多可以相差1-2個HLB值，同時復配方案較少，沒有形成最佳復配方案。
[0036]

【權(quán)利要求】
1.一種用于測定高密度脂蛋白中的膽固醇的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括第一試劑，所述第一試劑包括抑制非高密度脂蛋白溶解的表面活性劑I和溶解高密度脂蛋白的表面活性劑II，并且所述表面活性劑I和所述表面活性劑II混合后的親水疏水平衡值為13 ~14。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述表面活性劑I在所述第一試劑中的體積含量為0.1~3.0%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述表面活性劑II在所述第一試劑中的體積含量為0.1~3.0%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述表面活性劑I和所述表面活性劑II在所述第一試劑中的體積比為1:30~1:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4所述的試劑盒，其特征在于，所述表面活性劑I選自聚氧乙烯烷基醚、(聚氧丙烯-聚氧乙烯)嵌段聚合物和壬基酚聚氧乙烯醚中的一種或多種；和/或所述表面活性劑II選自聚氧乙烯基聯(lián)苯乙烯化苯基醚、聚氧乙烯烷基醚、失水山梨糖醇脂肪酸酯和聚氧乙烯油酸酯中的一種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述第一試劑還包括過氧化氫酶和膽固醇氧化酶。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述第一試劑還包括抗壞血酸氧化酶和/或膽紅素氧化酶。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述第一試劑還包括聚陰離子、Mg2+、α -環(huán)糊精硫酸鹽、顯色劑、第一防腐劑、第一保護劑和第一緩沖液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括第二試劑，所述第二試劑包括助色劑、過氧化物酶、膽固醇酯酶、第二防腐劑和第二緩沖液，并任選地包括第二保護劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的試劑盒，其特征在于，所述聚陰離子選自硫酸葡聚糖、硫酸葡聚糖鹽、肝素、肝素鹽、鎢磷酸、鎢磷酸鹽、硫酸寡糖、硫酸寡糖鹽和硫酸軟骨素中的一種或多種； 所述α-環(huán)糊精硫酸鹽選自鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、鎂鹽和鈣鹽中的任一種或多種； 所述顯色劑選自苯胺類化合物或苯酚類化合物；所述苯胺類化合物選自N-(3-磺基丙基)苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙基)-3-甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙基)_3，5-二甲基苯胺、N-乙基-N-(-3-磺基丙基)-3-甲基苯胺、N-(2-羥基-3-磺基丙基)_3，5- 二甲氧基苯胺、N，N- 二甲基-3-甲基苯胺、N, N- 二(3-磺基丙基)_3，5- 二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)-3-甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)_3，5- 二甲氧基苯胺、N-(3-磺基丙基)_3，5- 二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺基丙基)-3，5-二甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙基)-3-甲氧基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙基)苯胺、N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N’ -琥珀酰乙二胺、N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N’乙酰乙二胺和N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基丙基)-4_氟_3，5- 二甲氧基苯胺中的任一種；所述苯酚類化合物選自苯酚、4-氯苯酚、3-甲基苯酚和3-羥基-2，4，6-三碘苯甲酸中的任一種； 所述助色劑選自4-氨基安替比林或3-甲基-2-苯并噻唑啉酮肼；所述第一防腐劑選自山梨酸鉀、苯甲酸鈉、亞硝酸鈉和Proclin系列中的任一種或多種； 所述第二防腐劑為疊氮鈉； 所述第一保護劑和所述第二保護劑各自獨立地選自甘油、白蛋白、蔗糖、NaCl和乙二胺四乙酸二鈉中的任一種或多種； 所述第一緩沖液的溶劑和所述第二緩沖液的溶劑各自獨立地選自三羥甲基氨基甲烷緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑、Good’s緩沖劑和硼酸緩沖劑中的任一種或多種；其中，所述Good’s緩沖劑選自2-嗎啉乙磺酸、二(2-羥基)亞氨基三(羥甲基)甲烷、N-(2-乙酰胺)亞氨基二乙酸、哌嗪-N，N’ - 二(2-乙烷磺酸)、N-(2-乙酰胺)-2-氨基甲磺酸、3-嗎啉代丙磺酸、N-[三(羥甲基)甲基]-2-氨基甲磺酸(TES)、2-[4-(2-羥甲基)-1-哌嗪]乙烷磺酸、3-[N，N’ - 二(2-羥甲基)氨]-2-羥基丙磺酸、N-[三(羥甲基)甲基]-2-羥基-3-氨基丙磺酸、哌嗪-N，N’ - 二(2-羥基丙磺酸)、3-[4-(2_羥甲基)-1_哌嗪]-2-羥基丙磺酸、3-[4-(2-羥甲基)-1-哌嗪]丙磺酸[(H)EPPS]、N-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸、N，N’-二(2-輕甲基)甘氨酸、N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸、N-環(huán)己基-2-氨基甲磺酸、N-環(huán)己基-3-氨基-2-羥基丙磺酸和N-環(huán)己基-3-氨基丙磺酸中的任一種或多種。
11.根據(jù)權(quán)利要 求9所述的試劑盒，其特征在于，所述第二試劑中不包括表面活性劑。
【文檔編號】G01N33/92GK104076158SQ201410328097
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年7月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月10日
【發(fā)明者】袁錦云, 時敏, 韋銳, 葉強, 張華杰 申請人:深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學工程股份有限公司