一種間接測定1,3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯含量的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及化學(xué)分析【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及一種1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯含量的間接測量方法。該方法直接測定1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯(OPO)的活性部分，從而進一步計算得出活性O(shè)PO的含量。該方法直接反映了OPO的有效性能，所以其含量直接對應(yīng)了OPO作為食品添加劑的有效性。所述方法間接測定消化后OPO形式，非常容易區(qū)分sn-2位P，對于非sn-2位P的同分異構(gòu)體，可容易識別，避免造假。
【專利說明】-種間接測定I，3-二油酸-2-驚桐酸甘油H醒含量的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及化學(xué)分析【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及一種乳品中1,3-二油酸-2-蹤擱酸甘 油H醋含量的間接測定方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 隨著經(jīng)濟的發(fā)展，生活水平的提高，對于嬰幼兒食品的消費量已經(jīng)越來越高。嬰幼 兒身體小，生理機能尚未成熟，但為了達到正常的生長發(fā)育，每公斤體重的熱量需求卻是成 人的二倍W上，若主要W糖類及蛋白質(zhì)供應(yīng)所需能量的話，每克只能供給16KJ的熱量，所 W食用量必須相當(dāng)大，對消化功能還不是很完善的嬰兒來說是一項不小的負(fù)擔(dān)；而油脂可 W供應(yīng)蛋白質(zhì)或糖類二倍W上的熱量即每克38KJ的熱量，因此脂肪在嬰幼兒食品中必不 可缺的物質(zhì)。
[0003] 1，3-二油酸-2-蹤擱酸甘油H醋（OPO)是2008年衛(wèi)生部新增加的一種新資源食 品，它是類似于母乳脂肪的一種甘油H醋。母乳脂肪中約70%的蹤擱酸連結(jié)在甘油H醋的 sn-2位上，而sn-1，3位主要是不飽和脂肪酸。蹤擱酸是人體重要的產(chǎn)能脂肪酸，它在甘油 H醋上的位置對其消化和吸收有很大的影響，sn-2位上的蹤擱酸能W sn-2位單甘脂的形 式被吸收，而sn-1，3位上的蹤擱酸則易與礦物質(zhì)（巧、鎮(zhèn)等）形成不溶性的鹽流失掉，同時 也造成礦物質(zhì)和能量的流失。
[0004] OPO甘油H醋在嬰兒腸道中的消化過程可W簡單描述為W下步驟：
[0005] a)脂肪內(nèi)切酶將位于甘油H醋1，3位的脂肪酸切除，形成2位-單甘脂。
[0006] b)不飽和的游離油酸可溶，并被有效吸收。
[0007] C) 2-位蹤擱酸單甘脂被有效吸收。
[0008] 而在牛乳中及市場上銷售的大多數(shù)嬰幼兒配方奶粉（添加普通植物油）的脂肪結(jié) 構(gòu)恰恰缺少OPO結(jié)構(gòu)脂肪結(jié)構(gòu)，其脂肪結(jié)構(gòu)多W POP、PP0、PPP、OOP結(jié)構(gòu)形式存在，該意味 著高達80%的蹤擱酸連在1、3位上，不飽和脂肪酸油酸連接在2位上。該些結(jié)構(gòu)在消化過 程中，優(yōu)先釋放出來1、3位上的蹤擱酸，會與腸道內(nèi)的礦物質(zhì)，如巧相結(jié)合，形成巧皂，被排 除體外，從而使嬰兒失去大量的功能蹤擱酸和珍貴的巧。
[0009] 因此，1，3-二油酸-2-蹤擱酸甘油H醋作為一種新型的食品添加劑，具有促進機 體對能量吸收，促進巧、鎮(zhèn)等骨骼礦物質(zhì)吸收，緩解嬰幼兒便秘等功能。目前，1,3-二油 酸-2-蹤擱酸甘油H醋的研究在國外已逐步從實驗室階段轉(zhuǎn)向工業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用，它主要 應(yīng)用于嬰幼兒配方食品中。
[0010] 目前許多國內(nèi)外研究者都開展了對嬰幼兒食品中脂肪的研究工作。1,3-二油 酸-2-蹤擱酸甘油H醋（OPO)是一種母乳化結(jié)構(gòu)脂肪，即將大量用于嬰幼兒配方食品中。按 照中華人民共和國衛(wèi)生部公告（2010年第1號）規(guī)定要求，1，3-二油酸2-蹤擱酸甘油H醋 適用范圍為嬰幼兒配方食品，較大嬰兒和幼兒配方食品，學(xué)齡前兒童配方食品，其強化量為 24?96g/kg，其量W 1，3-二油酸-2-蹤擱酸甘油H醋純品計。
[0011] 蹤擱酸是嬰兒生長最重要的脂肪酸，為機體的生長發(fā)育、大腦活動、新陳代謝提供 能量，蹤擱酸結(jié)合在甘油H醋的Sn-2位時最容易被嬰幼兒消化，能夠促進機體對能量物質(zhì) (脂肪）的吸收，而在Sn-I, 3位則大部分不能被吸收，該是因為Sn-I, 3位的蹤擱酸在膜脂 肪酶作用下形成游離的蹤擱酸，而蹤擱酸烙點（6：rc)高于人體體溫，在小腸的酸性環(huán)境下 容易與礦物質(zhì)發(fā)生皂化反應(yīng)，形成不溶性的鹽，最終被排出體外，但在Sn-2位上的蹤擱酸 則能W Sn-2蹤擱酸甘油單醋的形式被人體吸收。Sn-2位蹤擱酸還能夠促進巧、鎮(zhèn)等骨骼礦 物質(zhì)的吸收，促進嬰幼兒身體骨骼的生長，巧缺乏時容易引發(fā)倆傻病，人體維持神經(jīng)肌肉的 興奮、神經(jīng)沖動的傳導(dǎo)、也臟的正常搏動也需要的巧的參與。目前研究表明Sn-2位蹤擱酸 還對嬰幼兒的生長發(fā)育有促進作用，尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)Sn-2位蹤擱酸對嬰兒成長發(fā)育的不利 影響和副作用方面的研究。
[0012] 對1,3-二油酸-2-蹤擱酸甘油H醋（OPO)的定量檢測已有研究，但存在問題較 多?，F(xiàn)有檢測方法主要反映在檢測過程中，檢測對象是1,3-二油酸-2-蹤擱酸甘油H醋 (OPO)本身，由于OPO同分異構(gòu)體的存在，使得檢測過程中不可避免地混入OOP和/或P00。 該些OOP、POO會影響OPO的檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，干擾對產(chǎn)品有效性能的判斷。
[0013] 衛(wèi)生部規(guī)定了兩個重要參數(shù)：
[0014] OPO 含量>40 %
[0015] sn-2位蹤擱酸比例> 52 %
[0016] 均強調(diào)了蹤擱酸Sn-2位比例。母乳組成、臨床數(shù)據(jù)和國際法規(guī)均只規(guī)定Sn-2位 蹤擱酸比例作為有效衡量參數(shù)。所W，產(chǎn)品中OPO的分析方法應(yīng)回答兩個問題：即嬰兒的營 養(yǎng)需要和新的法規(guī)要求。
[0017] 因此，研究更為準(zhǔn)確的1,3-二油酸-2-蹤擱酸甘油H醋（OPO)檢測方法，有顯著 意義。


【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0018] 本發(fā)明描述了一種通過直接測定1,3-二油酸-2-蹤擱酸甘油H醋（OPO)的活性 部分（active化rm)，從而進一步計算得出OPO的含量的方法。
[0019] 所謂的OPO活性部分指消化后的0P0,即失去sn-l，3位油酸的0P0。
[0020] 同時，除了 sn-2位P，sn-l，3位0之外，測定脂肪中，還存在其它sn-l，3位P和 sn-2 位 0。
[0021] OPO甘油H醋在嬰兒腸道中的消化過程包括W下H個部分：
[0022] 1.脂肪內(nèi)切酶將位于甘油H醋1，3位的脂肪酸切除，形成2位-單甘脂。
[0023] 2.不飽和的游離油酸可溶，并被有效吸收。
[0024] 3. 2位-蹤擱酸單甘脂被有效吸收。
[0025] 因此，檢測嬰兒消化形式的0P0,即失去了 sn-1，3位油酸的0P0,也就是OPO活性 部分，直接反映了 OPO的有效性能，所W其含量直接對應(yīng)了 OPO作為食品添加劑的有效性。
[0026] 現(xiàn)有的直接檢測方法，必須分開同分異構(gòu)體0P0、OOP和P00,操作復(fù)雜，結(jié)果誤差 大，難W有效反映OPO的真實效能。
[0027] 如使用上述間接檢測方法，測定消化后OPO形式，則非常容易區(qū)分sn-2位P和 sn-2位0。OPO該種形式才是嬰兒真正需要的，對于非sn-2位P的同分異構(gòu)體，可容易識 另Ij，避免造假。
[0028] 本發(fā)明所述方法，可將嬰兒食品中的甘油H醋分離，通過酶解消化處理，然后進行 檢測sn-2位P和sn-1，3位的0,再通過計算可得。
[0029] 所述方法用于測定乳品中的0P0,該乳品包括但不限于液態(tài)奶、奶粉、嬰兒配方奶、 酸奶、酸奶油、冰洪淋。
[0030] 舉例：
[0031] 在消化后的混合物中有多少OPO ?
[0032] 1個OPO分子可分離出；1個sn-2位的P和2個sn-1,3位的0。也就是說，對于 OPO形式的甘油H醋，消化后的sn-2位P與sn-1，3位的0應(yīng)保持1 : 2的物質(zhì)的量的關(guān) 系。
[0033] 如果（sn-2位巧/(sn-1，3位0)小于或等于1 : 2,說明消化后的結(jié)果中，存在OPO 之外的sn-1，3位的0,則應(yīng)W sn-2位P的含量為基準(zhǔn)，計算OPO的含量，即sn-2位P的物 質(zhì)含量就是OPO的物質(zhì)含量。
[0034] 如果（sn-2位巧/(sn-l，3位的0)大于1 : 2,說明消化后的結(jié)果中，存在OPO之 外的sn-2位P，則應(yīng)W sn-1，3位的0的含量為基準(zhǔn)，計算OPO的含量，即1/2 (sn-1，3位0) 的物質(zhì)含量就是OPO的物質(zhì)含量。
[00巧]簡單舉例，如果我們檢測得到一個sn-2位的P，和四個sn-1，3位的0,則根據(jù)上述 關(guān)系，我們可判斷只有一個OPO分子。如果我們檢測得到H個sn-2位的P，和四個sn-1，3 位的0,則根據(jù)上述關(guān)系，我們可計算得到有兩個OPO分子。
[0036] 在本發(fā)明所述方法中，sn-2位的P(蹤擱酸）、sn-2位的0(油酸）的含量，采用 GB/T24894-2010《動植物油脂甘H醋分子2-位脂肪酸組成的測定》進行檢測。
[0037] sn-l，3位的0(油酸）的測定，通過計算得到。通過脂肪酶水解得到單脂肪酸，采用 GB/T22223-2008《食品中總脂肪、飽和脂肪（酸）、不飽和脂肪（酸）的測定水解提取-氣 相色譜法》檢測總油酸含量，結(jié)合GB/T24894-2010測得的sn-2位油酸含量，其差值為sn-1， 3位的0(油酸）含量。
[0038] 通過上述方法得到的OPO含量，真實反映了乳品中1,3-二油酸-2-蹤擱酸甘油H 醋含量，從而反映了嬰兒配方奶對于有效提高寶寶對于能量和巧等礦物質(zhì)的吸收和利用的 指標(biāo)。通過應(yīng)用本發(fā)明方法，關(guān)注OPO含量，測定OPO的活性部分，更好地順應(yīng)了嬰兒天然 的營養(yǎng)需求，支持了嬰兒的健康成長。
[0039] 本發(fā)明使用間接測定法，既實現(xiàn)分析目的，同時滿足了營養(yǎng)要求，直接計算得到 OPO含量，避免了任何有效成分慘假的可能性。

【具體實施方式】：
[0040] 實施例1
[0041] 間接檢測OPO第一步：
[0042] 分析乳品混合物得到：
[0043] 1.總脂肪酸組成
[0044] 2. sn-2位脂肪酸組成
[0045] 使用GB/T24894-2010作為檢測方法，結(jié)果為：
[0046] 總的％ P = 3/9 = 33. 3% ;
[0047] sn-2 位的％ P = 1/3 = 33. 3%
[0048] 總的 ％ 0 = 6/9 = 66. 7 %
[0049] sn-2 位的 ％ 0 = 2/3 = 66. 7 %。
[0050] 實施例2
[0051] 間接檢測OPO第二步：
[005引根據(jù)結(jié)果計算：
[0053] 1.總脂肪中sn-2位P的含量
[0054] 2.總脂肪中sn-1+3的含量
[0055] (1) sn-2位P占總脂肪的比例：
[0056] 因為sn-2位的P占1/3的總脂肪酸，所W sn-2位P占總脂肪的比例；33. 3% /3 =11. 1%。
[0057] (2) sn-1+3位0占總脂肪的比例：
[0058] sn-2 位 0 占總脂肪的比例；66. 7% /3 = 22. 25%。
[0059] (總的％ 0)-(sn-2位的％ 0) = sn-1+3位的％ 0，所W sn-1+3位0占總脂肪的比 例；66. 7% -22. 25%= 44. 4%
[0060] 實施例3
[0061] 間接檢測OPO第H步：
[0062] 基于：
[006引 sn-2位P占總脂肪含量；11 %
[0064] sn-1+3位0占總脂肪含量；44. 4%
[0065] 計算 OPO ;
[006引 根據(jù)sn-2位P
[0067]根據(jù) sn-1+3 位 0
[006引我們選取相對低值作為限制性因子 [006引根據(jù)P計算的OPO ;
[0070] 每1 %的sn-2位的P含量，必然對應(yīng)3%的OPO含量，
[0071] 目P ;sn-2 位的 P 含量 X3 = 11. 1% X3 = 33. 3%。
[007引根據(jù)0計算OPO ;
[0073] 每1 %的sn-1+3位的0,必然對應(yīng)1. 5 %的OPO含量，
[0074] 目P ;sn-l+3 位的 0 含量 XI. 5 = 44. 4% *1. 5 = 66. 7%。
[0075] 根據(jù)P計算的OPO含量為33. 3%
[0076] 根據(jù)0計算的OPO含量為66. 7%
[0077] 因為33. 3 % < 66. 6 %，所W OPO含量為33. 3 %，即使用間接法測定了 W OPO形式 消化的物質(zhì)，結(jié)果正確。
[0078] 實施例4
[0079] 本實施例通過OPO含量的對比測定，W說明本發(fā)明方法對嬰兒配方奶中有效OPO 含量的測定的特點。樣品1、2、3來自InFat?，是AAK和化zymotec的合資公司領(lǐng)先油脂公 司（Advanced Lipids)的產(chǎn)品，是一種富含beta-蹤擱酸醋的脂質(zhì)配料。
[0080] 蹤擱油（palm oU)和母乳具有相似的脂肪酸組成，為市售產(chǎn)品，用W對比。
[0081] 測定：
[0082] 上述檢測采用GB/T22223-2008《食品中總脂肪、飽和脂肪（酸）、不飽和脂肪（酸） 的測定水解提取-氣相色譜法》、GB/T24894-2010《動植物油脂甘H醋分子2-位脂肪酸組 成的測定》進行檢測檢測。
[0083] 測定結(jié)果見下表：

【權(quán)利要求】
1. 一種間接測定1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯含量的方法，所述方法直接測定1， 3_二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯（ΟΡΟ)的活性部分（active form),從而進一步計算得出ΟΡΟ 的含量的方法；所謂的ΟΡΟ活性部分指消化后的0Ρ0,即失去sn-1，3位油酸的0Ρ0,所述的 進一步計算得出0P0的含量的方法為： a) 如果（sn-2位PV(sn-l，3位0)小于或等于1 : 2,則應(yīng)以sn-2位Ρ的含量為基準(zhǔn)， 計算0P0的含量，即sn-2位P的物質(zhì)含量就是0P0的物質(zhì)含量； b) 如果（sn-2位PV(sn-l，3位0)大于1 : 2,則應(yīng)以sn-l，3位的0的含量為基準(zhǔn)， 計算0P0的含量，即1/2 (sn-1，3位0)的物質(zhì)含量就是0P0的物質(zhì)含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法用于測定乳品中的0Ρ0,該乳 品包括但不限于液態(tài)奶、奶粉、嬰兒配方奶、酸奶、酸奶油、冰淇淋。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，0Ρ0的消化過程包括以下三個部分： 1) 脂肪內(nèi)切酶將位于甘油三酯1，3位的脂肪酸切除，形成2位-單甘脂； 2) 不飽和的游離油酸可溶，并被有效吸收； 3) 2位-棕櫚酸單甘脂被有效吸收。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，分析乳品混合物中sn-2位脂肪酸 組成的方法為GB/T24894-2010。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，分析乳品混合物中總脂肪酸組成的 方法為 GB/T22223-2008。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，所述sn-l，3位油酸含量的測定由 sn-2位油酸和總油酸含量的測定值計算得到。
【文檔編號】G01N33/04GK104237475SQ201410276891
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年6月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月19日
【發(fā)明者】劉漢霞, 張鳳霞, 馬小寧, 吳博隆, 仲維科, G·本迪羅 申請人:中國檢驗檢疫科學(xué)研究院綜合檢測中心, 安賽科有限公司