一種生物樣本的保存和分析前預處理方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種生物樣本的保存和分析前預處理方法，該方法是把生物樣本加入到樣本管的樣本室中，所述的樣本管管內(nèi)中部填充有填充段將樣本管分隔成上部的樣本室和下部的溶出液接收室；冷凍干燥使生物樣本吸附在填充段的填充材料表面，再在樣品管內(nèi)充氮氣或抽真空進行密封保存；生物樣本處理時，直接在樣本室中加入含內(nèi)標的有機溶劑，有機溶劑從樣本室流經(jīng)填充段對生物樣本進行溶出后，流入溶出液接收室，對所得的溶出液進樣進行分析測試；該方法使生物樣保存的穩(wěn)定性提高，降低樣本保存條件要求，并且該方法操作簡單，流程短，同時還可以提高樣本前處理的富集和純化效率，提高方法靈敏度、精密度和準確性。
【專利說明】一種生物樣本的保存和分析前預處理方法
【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生物樣本的保存和分析前預處理方法；屬于藥物領域。
【背景技術(shù)】
[0002]藥物動力學研究(包含生物等效性和生物利用度研究)無論在臨床前研究、臨床研究還是在上市后臨床應用研究中都十分重要，可以揭示藥物在不同種屬動物、不同人群中的經(jīng)時變化規(guī)律。藥物動力學研究中的生物樣本是指在研究過程中采集的血樣、尿樣、糞樣及其他體液和組織樣本。這些樣本需要在低溫冷凍條件下保存，以確保在完成分析測試前及以后一段時間內(nèi)的穩(wěn)定性。有些樣本甚至在_80°C的條件下仍不夠穩(wěn)定。這種方法不經(jīng)需要昂貴的設備和大量的能量消耗，還無法保證樣本的穩(wěn)定性。這些冷凍保存的樣本，在分析測試前，需要解凍后進行前處理。前處理的目的是除去生物樣本中的蛋白質(zhì)等生物雜質(zhì)，保留待測物。目前的方法有蛋白沉淀法、液液萃取法、固相萃取法等。這些方法不或多或少存在純化效率不高，操作復雜繁瑣、無法制定標準操作的缺點。尋找一種既可以保證樣本穩(wěn)定性，又節(jié)能環(huán)保，既有利于提高后期前處理純化效率，又有可以制定標準操作的樣本處理方法具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種能在溫和條件下穩(wěn)定保存生物樣本和簡化生物樣本檢測前預處理流程，提高前處理時生物樣本的富集和純化效率的方法。
[0004]本發(fā)明提供了一種生物樣本的保存和分析前預處理方法，該方法是把定量的生物樣本加入到樣本管的樣本室中，所述的樣本管管內(nèi)中部填充有一段由玻璃纖維、硅膠、鍵合硅膠或纖維素填充材料構(gòu)成的填充段，所述填充段將樣本管分隔成上部的樣本室和下部的溶出液接收室；進行冷凍干燥使生物樣本吸附在填充段的填充材料表面，再在樣品管內(nèi)充氮氣或抽真空，進行密封保存；進行生物樣本處理時，直接在樣本室中加入含內(nèi)標的有機溶劑，有機溶劑從樣本室流經(jīng)填充段對吸附在填充材料表面的生物樣本進行溶出后，流入溶出液接收室，溶出液接收室所得的溶出液采取直接進樣或者吹干后定容進樣進行分析測試；所述的有機溶劑不溶解填充材料和生物樣本中的生物雜質(zhì)。
[0005]本發(fā)明的生物樣本的保存和分析前預處理方法還包括以下優(yōu)選技術(shù)方案:
[0006]優(yōu)選的有機溶劑為甲醇、乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿中的一種或幾種。
[0007]所述的填充材料與生物樣本的質(zhì)量之比為1:0.2?1:3。
[0008]所述的冷凍干燥是在-50?_20°C下真空干燥。
[0009]所述的冷凍干燥時間為10?30h。
[0010]所述的有機溶劑的用量為0.2?3mL。
[0011]所述的分析測試所用的儀器為高效液相色譜儀、氣相色譜儀或高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀中的一種。
[0012]所述的生物樣本為含藥生物樣本，如血樣、尿樣、生物組織或唾液中的一種。[0013]所述的保存可以根據(jù)實際情況采用冷凍、冷藏或室溫保存。
[0014]所述的有機溶劑流經(jīng)填充段時可以采用超聲輔助溶出。
[0015]所述的填充段中填充材料具有大量可供溶液自由通過的微孔，也可以通過離心加快溶液流經(jīng)填充段的速率。
[0016]所述的生物樣本加入到樣本管的樣本室中后可以采用超聲分散處理，使生物樣本更好地分散吸附在填充材料表面。
[0017]本發(fā)明的有益技術(shù)效果:本發(fā)明通過發(fā)明人的反復研究，最終確定一種不但能穩(wěn)定保存生物樣本，而且能通過簡單操作、較短流程，提高生物樣本分析前預處理時的富集和純化效率的方法，特別是含藥生物樣本如血樣、尿樣、唾液或生物組織等的保存和快速分析前處理方法。本發(fā)明方法采用特殊的PE樣品管(如附圖1)填裝玻璃纖維、硅膠、凝膠或纖維素等吸附劑，在結(jié)合本發(fā)明的冷凍干燥和密封保存處理，對生物樣本進行隔絕空氣和吸附水的雙重保護；樣本分析前處理時，利用生物樣本中蛋白質(zhì)等生物雜質(zhì)不溶于所選擇的有機溶劑的特點，直接加入含內(nèi)標的有機溶劑，進行溶解提取，溶出液直接進樣測定或者揮干定容后進樣測定；并且在溶劑溶出過程中將血漿中蛋白等物質(zhì)固定于載體上從而減少測試樣本中雜質(zhì)干擾，達到純化的目的。綜上所述，本發(fā)明方法可以使生物樣本在干燥、隔絕氧氣的條件下保存，大大提供穩(wěn)定性，降低樣本保存條件要求；該方法還可以大大簡化樣本處理的流程，使樣本處理操作標準化，同時還可以提高富集純化效率，提高方法靈敏度、精密度和準確性。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0018]【圖1】是本發(fā) 明中的樣本管；I為樣本室，2為填充材料，3為溶出液接收室?！揪唧w實施方式】
[0019]以下實施例是對本
【發(fā)明內(nèi)容】
的進一步說明，而不是對本發(fā)明保護范圍的限制。
[0020]本發(fā)明的研究目的是探索一種生物樣本常溫保存方法，以及進一步簡化生物樣本處理方法。血漿樣本中存在人體血液中的各種酶，在血漿的水環(huán)境中，酶催化藥物降解，導致血漿中藥物減少，無法達到長期保存的目的；雖然將血漿樣本置于低溫保存箱中可以減緩此過程，但是沒有解決根本問題。通過血漿加入載體(硅膠或玻璃纖維)中冷凍干燥的方法，血漿中水不再存在，酶無法催化藥物發(fā)生各種反應，可以達到長期保存血漿樣本的目的，甚至可以實現(xiàn)常溫保存。加入載體可使凍干過程更加迅速，并且在甲醇等溶劑洗脫過程中將血漿中蛋白等物質(zhì)固定于載體上從而減少測試樣本中雜質(zhì)干擾，達到純化的目的。
[0021]實施例1
[0022]冷凍干燥方法:分別選用麥考酚酸酯、莫達非尼、左乙拉西坦、煙酸作為模型藥物，配制含藥血漿。吸取200 μ L含藥血漿，置于中部填充有15層玻璃纖維材料的過濾管上部的樣本室中，超聲混勻。于_40°C下真空冷凍干燥28h，密封陰涼處保存待測。
[0023]樣本測試方法:在離心管上部的樣本室中加入500 μ L含內(nèi)標的甲醇，放置2分鐘，超聲5分鐘，離心，從溶出液接收室接收溶出液；再在離心管樣本室加入500 μ L含內(nèi)標的甲醇，同法處理。合并溶出液。吹干，200 μ L流動性定容，進樣測定。對照液處理:配制待測物及內(nèi)標理論濃度相同的對照溶液，直接進樣。每個樣本處理并測試3份。[0024]實施結(jié)果如表1:
[0025]表1.本發(fā)明方法冷凍干燥后直接溶解處理樣本的測試結(jié)果
[0026]
【權(quán)利要求】
1.一種生物樣本的保存和分析前預處理方法，其特征在于，把定量的生物樣本加入到樣本管的樣本室中，所述的樣本管管內(nèi)中部填充有一段由玻璃纖維、硅膠、鍵合硅膠或纖維素填充材料構(gòu)成的填充段，所述填充段將樣本管分隔成上部的樣本室和下部的溶出液接收室；進行冷凍干燥使生物樣本吸附在填充段的填充材料表面，再在樣品管內(nèi)充氮氣或抽真空進行密封保存；進行生物樣本處理時，直接在樣本室中加入含內(nèi)標的有機溶劑，有機溶劑從樣本室流經(jīng)填充段對吸附在填充材料表面的生物樣本進行溶出后，流入溶出液接收室，溶出液接收室所得的溶出液采取直接進樣或者吹干后定容進樣進行分析測試；所述的有機溶劑不溶解填充材料和生物樣本中的生物雜質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的有機溶劑為甲醇、乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿中的一種或幾種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的填充材料與生物樣本的質(zhì)量之比為 1:0.2 ~3。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的冷凍干燥是在-50~-20°C下真空干燥。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的有機溶劑的用量為0.2~3mL。
6.根據(jù)權(quán)利要 求1所述的方法，其特征在于，所述的分析測試所用的儀器為高效液相色譜儀、氣相色譜儀或高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1~6任一項所述的方法,其特征在于,所述的生物樣本為血樣、尿樣、生物組織或唾液中的一種。
【文檔編號】G01N1/28GK104020023SQ201410196074
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年5月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月9日
【發(fā)明者】程澤能, 余鵬 申請人:中南大學