吡啶甲酸鉻原料藥中雜質限度檢測的高效液相色譜分析方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種吡啶甲酸鉻原料藥中雜質限度檢測的高效液相色譜分析方法，它采用配有紫外檢測器的液相色譜儀，以辛基鍵合硅膠為填充柱，流動相為0.5%～2.0%質量濃度的醋酸水溶液與乙腈的混合液，紫外檢測器波長200～300nm；將50mg吡啶甲酸鉻樣品加入60ml甲醇超聲溶解后，加入甲醇稀釋至100ml搖勻，再經0.45μm濾膜過濾后作為供試品溶液；將1ml供試品溶液加甲醇稀釋至100ml后搖勻，再經0.45μm濾膜過濾后作為自身對照品溶液；量取供試品溶液和對照品溶液，分別進樣10μl，記錄色譜圖，然后按外標法以峰面積計算各雜質的含量。本發(fā)明吡啶甲酸鉻與合成吡啶甲酸鉻的起始物、中間體和產生的雜質能實現完全分離，峰形和分離度良好，靈敏度和準確度高，可滿足吡啶甲酸鉻原料藥雜質限度的分析。
【專利說明】吡啶甲酸鉻原料藥中雜質限度檢測的高效液相色譜分析方 法 【技術領域】
[〇〇〇1] 本發(fā)明涉及液相色譜分析方法，具體涉及一種檢測吡啶甲酸鉻原料藥中雜質限度 的液相色譜法分析方法。 【背景技術】
[0002] 吡啶甲酸鉻（CrPic)是一種用于2型糖尿病的補充或供選擇的藥物，實驗證據顯 示，CrPic在通過p38 MAPK活化作用攝取葡萄糖方面有影響。鉻被認為可以增強胰島素機 能，導致2型糖尿病中胰島素敏感性增強。2005年8月，美國食品與藥物管理局（FDA)批 準了吡啶甲酸鉻的生產，并確認了它可安全用于人類抗胰島素和II型糖尿病治療。在我國 保健品市場上，吡啶甲酸鉻已被允許加入到保健食品中。
[0003] 藥品在生產、貯存或運輸中，由于貯存時間過長，包裝保管不善，在外界條件影響 下，如日光、空氣、溫度和濕度等因素，或微生物的作用使藥品發(fā)生變質，如不能監(jiān)測其雜質 限度變化，有可能會對人體造成危害。目前，市場上銷售的吡啶甲酸鉻，主要用于食品和保 健品的添加劑使用，檢測項目只涉及一般理化檢查和含量檢查，沒有雜質控制檢查。批啶甲 酸鉻做為原料藥，必須對其雜質限度變化進行靈敏、準確的檢測，制定吡啶甲酸鉻原料藥質 量標準。而國內外的文獻中沒有對吡啶甲酸鉻原料藥中雜質限度進行分析的報道。
[0004] 如CN 102926534 A中報道了吡啶甲酸鉻含量的高效液相分析方法，該分析 方法定量分析準確，加標回收率試驗得到的平均回收率為98. 28%，精密度試驗得到的 RSD%=0. 69,可以滿足吡啶甲酸鉻的含量分析。但此文獻未對吡啶甲酸鉻中的雜質分析進行 報道。
[0005] Michael Koll 等人在文獻 A validated method for analysis of chromi picolinate in nutraceuticals by reversed phase high performance liquid chromatography報道了保健食品中批陡甲酸鉻的高效液相分析方法，批陡甲酸鉻濃度 為0. 125-12. 5mg/ml的濃度范圍內線性良好，相關系數為0.999。Sung-11 Kim等人在文 獻 Determination of Chromium(III) Picolinate Using High Performance Liquid Chromatography-Mltraviolet Spectrophotometry 中報道了利用 ESI-MS 和 HPLC 對食品 中吡啶甲酸鉻定性的研究。
[0006] Sung-11 Kim 等人在文獻 Determination of Chromium (III) Picolinate Using High Performance Liquid Chromatography-Ultraviolet Spectrophotometry 中報道了 利用ESI-MS和HPLC對食品中吡啶甲酸鉻定性的研究。
【發(fā)明內容】

[0007] 針對現有技術缺陷，本發(fā)明提供一種檢測吡啶甲酸鉻中雜質限度的分析方法。
[0008] 本發(fā)明技術方案是這樣實現的：它采用配有紫外檢測器的液相色譜儀，其特征在 于以辛基鍵合硅膠為填充柱，流動相為〇. 5%?2. 0%質量濃度的醋酸水溶液與乙腈的混合 液，其醋酸水溶液與乙腈的體積比為92:8?70:30,紫外檢測器波長200?300nm ; 將50mg吡啶甲酸鉻樣品加入60ml甲醇超聲使其充分溶解后，加入甲醇稀釋至100ml 搖勻，再經0. 45 μ m濾膜過濾后作為供試品溶液； 將lml上述供試品溶液加甲醇稀釋至100ml后搖勻，再經0. 45 μ m濾膜過濾后作為自 身對照品溶液； 分別量取上述供試品溶液和對照品溶液，進樣10 μ 1，流速lml/min，柱溫30°C，記錄色 譜圖，然后按外標法以峰面積計算各雜質的含量。
[0009] 本發(fā)明有益效果在于：采用本發(fā)明分析方法，吡啶甲酸鉻與合成吡啶甲酸鉻的起 始物、中間體和產生的雜質能實現完全分離，峰形和分離度良好，靈敏度和準確度高，最大 單雜RSD值為8. 05%，總雜質RSD值為6. 82%，可以滿足吡啶甲酸鉻原料藥雜質限度的分析 要求。 【專利附圖】

【附圖說明】
[〇〇1〇] 圖1為本發(fā)明吡啶甲酸鉻原料藥中雜質高效液相色譜圖。 【具體實施方式】
[〇〇11] 以下結合具體實施對本發(fā)明做進一步詳述。
[0012] 實施例1 : 采用配有紫外檢測器的高效液相色譜儀(Waters e2695)(型號、生產廠家)，色譜柱為 辛基鍵合硅膠填料（Venusil MP-C8,250X4. 6mmX5 μ m)，流動相為0. 5%?2. 0%質量濃度 的醋酸水溶液與乙腈的混合液，其醋酸水溶液與乙腈的體積比為70:30?92:8,紫外檢測 器波長220nm ; 稱取吡啶甲酸鉻樣品50mg，置100ml量瓶中后，加入60ml甲醇超聲使其充分溶解，再加 入甲醇稀釋至100ml，搖勻，再經〇. 45 μ m濾膜過濾后作為供試品溶液；取上述供試品溶液 lml至100ml量瓶中，加甲醇稀釋至100ml，搖勻，再經0. 45 μ m濾膜過濾后作為自身對照品 溶液； 分別量取上述供試品溶液和對照品溶液，分別進樣10 μ 1，記錄色譜圖，然后按外標法 以峰面積計算各雜質的含量，本實施例色譜圖如圖1所示。
[0013] 實施例2: 本實施例與實施例1不同之處是，采用配有紫外檢測器的高效液相色譜儀，色譜柱為 辛基鍵合硅膠填料（Venusil MP-C8,250X4. 6mmX5ym)，流動相為1.0%質量濃度的醋 酸水溶液與乙腈的混合液，1. 〇%醋酸水溶液與乙腈的體積比為85:15,紫外檢測器波長 265nm ； 稱取吡啶甲酸鉻樣品50mg，置100ml量瓶中后，加入60ml左右甲醇超聲使其充分溶解， 再加入甲醇稀釋至l〇〇ml，搖勻，再經0. 45 μ m濾膜過濾后作為供試品溶液；取上述供試品 溶液lml至100ml量瓶中，加甲醇稀釋至100ml，搖勻，再經0. 45 μ m濾膜過濾后作為自身對 照品溶液； 量取上述供試品溶液和對照品溶液，分別進樣10 μ 1，記錄色譜圖，然后按外標法以峰 面積計算各雜質的含量。
[0014] 實施例3 : 本實施例與實施例1不同之處是，采用配有紫外檢測器的高效液相色譜儀，色譜柱 為辛基鍵合硅膠填料（Venusil MP-C8,250X4. 6mmX 5μπι)，流動相為1.5%質量濃度的 醋酸水溶液與乙腈的混合液，1.5%醋酸水溶液與乙腈的體積比為75:25,紫外檢測器波長 280nm ； 稱取吡啶甲酸鉻樣品50mg，置100ml量瓶中后，加入60ml左右甲醇超聲使其充分溶解， 再加入甲醇稀釋至l〇〇ml，搖勻，再經0. 45 μ m濾膜過濾后作為供試品溶液；取上述供試品 溶液lml至100ml量瓶中，加甲醇稀釋至100ml，搖勻，再經0. 45 μ m濾膜過濾后作為自身對 照品溶液； 量取上述供試品溶液和對照品溶液，分別進樣?〇μ 1，記錄色譜圖，然后按外標法以峰 面積計算各雜質的含量。
[0015] 按本實施例分別準確稱取6份供試品進樣，進行重復性試驗，結果如表1所示，計 算得最大單雜RSD值為8. 05%，總雜質RSD值為6. 82%，可以滿足吡啶甲酸鉻雜質限度的檢 測要求。
[0016] 表1 :6份供試品的高效液相檢測數據
【權利要求】
1.吡啶甲酸鉻原料藥中雜質限度檢測的高效液相色譜分析方法，它采用配有紫外檢測 器的液相色譜儀，其特征在于以辛基鍵合硅膠為填充柱，流動相為0. 5%?2. 0%質量濃度的 醋酸水溶液與乙腈的混合液，其醋酸水溶液與乙腈的體積比為92:8?70:30,紫外檢測器 波長200?300nm ; 將50mg吡啶甲酸鉻樣品加入60ml甲醇超聲使其充分溶解后，加入甲醇稀釋至100ml 搖勻，再經0. 45 μ m濾膜過濾后作為供試品溶液； 將lml上述供試品溶液加甲醇稀釋至100ml后搖勻，再經0. 45 μ m濾膜過濾后作為自 身對照品溶液； 分別量取上述供試品溶液和對照品溶液，進樣量1〇μ 1，流速lml/min，柱溫30°C，平行 檢測2次，記錄色譜圖，然后按外標法以峰面積計算各雜質的含量。
【文檔編號】G01N30/88GK104090055SQ201410058793
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年2月21日 優(yōu)先權日:2014年2月21日
【發(fā)明者】岳振路 申請人:河北富格藥業(yè)有限公司