半定量檢測4-氯苯氧乙酸的試紙條的制作方法
【專利摘要】本實用新型是一種半定量檢測4-氯苯氧乙酸（4-D）的試紙條，包括有樣品墊，膠體金墊，PVC板，硝酸纖維素膜和吸水墊，其中，PVC板上粘貼有硝酸纖維素膜，所述的硝酸纖維素膜上有檢測區(qū)和對照區(qū)，檢測區(qū)為檢測線（T線），對照區(qū)為質(zhì)控線（C線），硝酸纖維素膜的兩端側(cè)層疊粘貼有吸水墊和膠體金墊，膠體金墊上還層疊粘貼有樣品墊。本實用新型的有益效果在于：操作簡單、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強和適合現(xiàn)場檢測，而且還具有生產(chǎn)周期短、產(chǎn)量高、成本低等優(yōu)點，在免疫檢測【技術(shù)領(lǐng)域】具有良好的應(yīng)用前景。本試紙條，操作簡單、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強和適合現(xiàn)場檢測，而且還具有生產(chǎn)周期短、產(chǎn)量高、成本低等優(yōu)點。
【專利說明】半定量檢測4-氯苯氧乙酸的試紙條
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型屬于免疫化學(xué)檢測技術(shù)，具體來講，是一種半定量檢測4-氯苯氧乙酸(4-D)的試紙條，借助膠體金顯色的免疫層析反應(yīng)，以達到快速檢測農(nóng)產(chǎn)品、水、土壤中的4-氯苯氧乙酸農(nóng)藥殘留的目的。
【背景技術(shù)】
[0002]4-氯苯氧乙酸是在生產(chǎn)上廣泛使用的除草劑和植物生長調(diào)節(jié)劑，其在農(nóng)產(chǎn)品、水和土壤中的殘留危害不容忽視，如其在土壤、水中殘留超標，易引起棉花、某些蔬菜，對人類的健康造成較大危害，據(jù)報道，4-氯苯氧乙酸具潛在的致癌性、致突變性，是一種內(nèi)分泌干擾物質(zhì)，對免疫系統(tǒng)和生育系統(tǒng)具不良影響，人體攝入吸收后對眼睛、皮膚也有刺激作用，反復(fù)接觸后對肝、心臟有損壞作用，能引起驚厥等。鑒于此，有些國家和世界組織都在環(huán)境標準中對4-氯苯氧乙酸做出了嚴格的規(guī)定，世界衛(wèi)生組織2003年8月頒布《飲用水水質(zhì)指南》，規(guī)定飲用水中4-氯苯氧乙酸最大檢出濃度30ug/l。我國2001年頒布的《飲用水水質(zhì)衛(wèi)生規(guī)范》的非常檢出項目中，將4-氯苯氧乙酸的限制規(guī)定為0.03mg/l，對其檢出量的常規(guī)檢測分析只能是利用氣象色譜(GC)和高效液相色譜(HPLC)等儀器在實驗室操作，方法繁瑣，分析速度慢，成本高，要求儀器化程度高。隨著待檢樣品、特別是要求現(xiàn)場快速檢測樣品量和速遞增加，傳統(tǒng)的農(nóng)藥殘留手段難以適應(yīng)要求，因此，迫切需要開封和應(yīng)用高效率農(nóng)藥殘留分析技術(shù)。
[0003]通過大量資料檢索，注意到:4_ 二氯苯氧乙酸完全抗原和抗體的制備，并將該人工免疫抗原免疫家兔制備多克隆抗體，在此基礎(chǔ)上建立了間接酶聯(lián)免疫吸附測定檢測4-氯苯氧乙酸農(nóng)藥殘留的技術(shù)。該技術(shù)較GC、HPLC有較大革新，使檢測時間較短、成本大大較低，靈敏度提高，有利于在食品、土壤、水利環(huán)境中，4-氯苯氧乙酸農(nóng)藥殘留的快速檢測并推廣應(yīng)用，但其方法還存在操作還操作相對繁瑣、需要重復(fù)多次洗滌，需借助酶標儀讀數(shù)等，不能實現(xiàn)真正意義上的一步法快速測定。還有生物遺傳器是一種以生物活性單位為敏感元件，結(jié)合化學(xué)，物理轉(zhuǎn)換元件，對被分析物具有高度選擇性的儀器，農(nóng)藥殘留分析時靈敏度高，該法在即時檢驗領(lǐng)域可發(fā)揮很大作用，但因為該法仍需要一定的儀器設(shè)備條件，不易進一步降低檢測成本。
[0004]膠體金免疫層析技術(shù)是近些年來發(fā)展起來的一種簡單，快速免疫學(xué)檢測方法，具靈敏、簡單、快熟、無需設(shè)備和儀器、經(jīng)濟適用、具高度特異性和敏感性、結(jié)果直觀可靠、試劑和樣品用量極少、不需專業(yè)人員操作，易于推廣使用，正可以滿足這種需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本實用新型的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種半定量檢測4-氯苯氧乙酸(4-D)的試紙條，改變4-氯苯氧乙酸農(nóng)藥殘留多步驟繁瑣的問題，實現(xiàn)廉價、一步快速檢測4-氯苯氧乙酸農(nóng)藥殘留。
[0006]本實用新型解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:半定量檢測4-氯苯氧乙酸(4-D)的試紙條，其特征在于包括有樣品墊，膠體金墊，PVC板，硝酸纖維素膜和吸水墊，其中，PVC板上粘貼有硝酸纖維素膜，所述的硝酸纖維素膜上有檢測區(qū)和對照區(qū)，檢測區(qū)為檢測線(T線)，對照區(qū)為質(zhì)控線(C線)，硝酸纖維素膜的兩端側(cè)層疊粘貼有吸水墊和膠體金墊，膠體金墊上還層疊粘貼有樣品墊。
[0007]按上述方案，所述的檢測線(T線)4有四條。
[0008]按上述方案，所述的檢測線(T線)從左至右依次為Tl線、T2線、T3線、T4線，檢測線(T線)中4-氯苯氧丁酸一BSA偶聯(lián)物溶液濃度按照T4線、T3線、T2線、Tl線的次序依次遞增，且包被有不同濃度4-氯苯氧丁酸一BSA偶聯(lián)物包被原的總量剛好可與金標墊上的金標抗體完全中和，用以檢測不同濃度的4-氯苯氧乙酸(4-D)農(nóng)藥殘留，對照區(qū)包被有羊抗鼠IgG多克隆抗體。
[0009]本實用新型選擇4-氯苯氧丁酸為4-氯苯氧乙酸抗體制備的半抗原，牛血清白蛋白(BSA)為載體蛋白，然后通過改良EDC法合成人工抗原4-氯苯氧丁酸一BSA。稱取4-氯苯氧丁酸60mg，加入0.05MPBCPH11以上)，攪拌使其緩慢溶解，之后調(diào)節(jié)pH值至7.2左右，力口入60mg suIf-NHS,充分混合，再加入90mgEDC，攪勻，靜置片刻，并將此反應(yīng)液I小時內(nèi)緩慢滴加到事先配好60mg9mlBSA溶液中，并4°C下攪拌反應(yīng)物過夜，0.15M NaCl透析三天，5_6次左右，紫外分光光度計測紫外法測定和計算偶聯(lián)物的結(jié)合比，得到適當結(jié)合比的4-氯苯氧丁酸-BSA偶聯(lián)物，-20°C下凍存。
[0010]本實用新型的有益效果在于:4_氯苯氧乙酸(4-D)檢測試劑條，操作簡單、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強和適合現(xiàn)場檢測，而且還具有生產(chǎn)周期短、產(chǎn)量高、成本低等優(yōu)點，在免疫檢測【技術(shù)領(lǐng)域】具有良好的應(yīng)用前景。本試紙條，操作簡單、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強和適合現(xiàn)場檢測，而且還具有生產(chǎn)周期短、產(chǎn)量高、成本低等優(yōu)點。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0011]圖1本實用新型的結(jié)構(gòu)圖；
[0012]圖2本實用新型的俯視圖；
[0013]圖3檢測4-氯苯氧乙酸(4-氯苯氧乙酸)，結(jié)果為陰性
[0014]圖4檢測4-氯苯氧乙酸(4-氯苯氧乙酸)，結(jié)果為低含量(20_100ng/ml)
[0015]圖5檢測4-氯苯氧乙酸(4-氯苯氧乙酸)，結(jié)果為中低含量(100-1000ng/ml)
[0016]圖6檢測4-氯苯氧乙酸(4-氯苯氧乙酸)，結(jié)果為中含量(l-10ug/ml)
[0017]圖7檢測4-氯苯氧乙酸(4-氯苯氧乙酸)，結(jié)果為高含量(> 10ug/ml)
[0018]圖中，I為樣品墊，2為膠體金墊，3為PVC板，4為測試線(T線，共4條)，5為質(zhì)控線(C線)，6為硝酸纖維素膜，7為吸水墊。
【具體實施方式】
[0019]下面結(jié)合附圖與實施例對本實用新型作進一步詳細描述。
[0020]實施例1
[0021]如圖1所示，半定量檢測4-氯苯氧乙酸(4-D)的試紙條，其特征在于包括有樣品墊I，膠體金墊2，PVC板3，硝酸纖維素膜6和吸水墊7，其中，PVC板3上粘貼有硝酸纖維素膜6，所述的硝酸纖維素膜上有檢測區(qū)和對照區(qū)，檢測區(qū)有四條檢測線(T線)4，對照區(qū)為質(zhì)控線(C線)5，硝酸纖維素膜6的兩端側(cè)層疊粘貼有吸水墊7和膠體金墊2，膠體金墊2上還層置粘貼有樣品塾I。
[0022]所述的檢測線(T線)從左至右依次為Tl線、T2線、T3線、T4線，檢測線(T線)中4-氯苯氧丁酸一BSA偶聯(lián)物溶液濃度按照T4線、T3線、T2線、Tl線的次序依次遞增，且包被有不同濃度4-氯苯氧丁酸一BSA偶聯(lián)物包被原，T線檢測線上包被原的總量剛好可與金標墊上的金標抗體完全中和，用以檢測不同濃度的4-氯苯氧乙酸(4-D)農(nóng)藥殘留，對照區(qū)包被有羊抗鼠IgG多克隆抗體。
[0023]根據(jù)競爭抑制免疫層析原理，在硝酸纖維素膜6上的檢測區(qū)包被不同濃度4-氯苯氧丁酸一BSA偶聯(lián)物，對照區(qū)包被羊抗鼠多克隆抗體。當樣品中不含4-氯苯氧乙酸時，玻璃纖維素膜上的膠體金抗4-氯苯氧乙酸抗體的量剛可使硝酸纖維素膜上4條檢測線顯色，質(zhì)控線也顯色；當待測物中有被測的抗原物質(zhì)(4-氯苯氧丁酸)時，該農(nóng)藥殘留就會與標記膠體金的抗4-氯苯氧丁酸抗體形成Ag-Ab-Au復(fù)合物，該復(fù)合物中抗4-氯苯氧丁酸抗體的活性位點將因被樣品溶液中的殘留藥物占據(jù)而無法與檢測區(qū)上的檢測線上的藥物抗原結(jié)合。
[0024]測定樣品時，將試紙條樣品吸收墊插入待測樣品中，停留10秒后取出平放，10分鐘后觀察結(jié)果。結(jié)果判斷方法是通過顯示與免疫層析膜上的條帶數(shù)量，來判定檢測樣品中4-氯苯氧乙酸的含量。所以當樣品中4-氯苯氧乙酸為低含量時(20-100ng/ml )，檢測線
1、2、3和質(zhì)控線顯色，檢測線4不顯色；樣品中4-氯苯氧乙酸為中低含量時(IOO-1OOOng/ml)，檢測線1、2和質(zhì)控線顯色，第3、4檢測線不顯色；樣品中4-氯苯氧乙酸為中含量時(Ι-lOug/ml)，檢測線I和質(zhì)控線顯色，檢測線2、3、4不顯色；樣品中4-氯苯氧乙酸為高含量時(> 10ug/ml),檢測線1、2、3、4均不顯色，只質(zhì)控線顯色，判定為陰性。該檢測在10分鐘內(nèi)完成，操作簡單、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強和適合現(xiàn)場檢測，而且還具有生產(chǎn)周期短、產(chǎn)量高、成本低等優(yōu)點。在免疫檢測【技術(shù)領(lǐng)域】具有良好的應(yīng)用前景。
[0025]總之，以上所述僅為本實用新型的較佳實施例，凡依本實用新型申請專利范圍所作的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本實用新型專利的涵蓋范圍。
【權(quán)利要求】
1.半定量檢測4-氯苯氧乙酸的試紙條，其特征在于包括有樣品墊(1)，膠體金墊(2)，PVC板(3 )，硝酸纖維素膜(6 )和吸水墊(7 )，其中，PVC板(3 )上粘貼有硝酸纖維素膜(6 )，所述的硝酸纖維素膜上有檢測區(qū)和對照區(qū)，檢測區(qū)為檢測線(4)，對照區(qū)為質(zhì)控線(5)，硝酸纖維素膜(6)的兩端側(cè)層疊粘貼有吸水墊(7)和膠體金墊(2)，膠體金墊(2)上還層疊粘貼有樣品墊(I)。
2.按權(quán)利要求1所述的半定量檢測4-氯苯氧乙酸的試紙條，其特征在于所述的檢測線(4)有四條。
【文檔編號】G01N33/558GK203519613SQ201320384056
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年6月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月28日
【發(fā)明者】陳琰, 周俊, 冷毅斌 申請人:武漢伊萊瑞特生物科技有限公司