血液相關脂肪酸譜的建立方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種血液相關脂肪酸譜的建立方法，包括以下步驟：1）選擇研究對象，并將已脫離研究對象身體的血漿、血清或血小板中的總脂肪酸成分進行提取、分離、濃縮，從而得到總脂；2）、將總脂用薄層層析法分離磷脂、甘油三酯；3）、將分離得到的磷脂、甘油三酯進行甲酯化；4）、將甲酯化脂肪酸采用氣相色譜分離法測定脂肪酸成分；5）、將脂肪酸進行圖譜分析、SPSS數據統(tǒng)計分析；6）、將分析所得的數據進行整理、總結。本發(fā)明創(chuàng)立了一種簡單有效且實用的脂肪酸譜的建立方法；建立了健康人與目前流行的慢性疾病的脂肪酸譜，對人類健康和脂肪攝入提供了強有力的指導作用。
【專利說明】血液相關脂肪酸譜的建立方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)學、流行病學領域，具體的說，涉及采用氣相色譜建立一種測定血液相關(血漿，血清，血小板，紅細胞等)的總酯、磷脂膜、或甘油三酯的脂肪酸譜，并對與脂代謝相關的慢性疾病(糖尿病、代謝綜合癥、高脂血癥、非酒精性脂肪肝、高血壓等)人群的脂肪酸譜進行了分析，從而建立相關的脂肪酸譜。即，本發(fā)明涉及健康人群和慢性病患者血液脂肪酸譜的建立方法。
【背景技術】
[0002]隨著中國經濟的快速發(fā)展，人們的日常飲食結構逐漸西方化，上個世紀中葉營養(yǎng)不良型疾病為主的形勢已經轉變到現在營養(yǎng)過剩型慢性疾病的盛行和快速增長，與膳食相關的疾病已經躍居為居民死亡的主要原因。膳食的要求也從滿足溫飽過渡到各種營養(yǎng)素合理攝入的健康飲食，通過合理的膳食指導來防治非傳染性慢性疾病，顯得越來越重要。飲食和生活方式在慢性病的病情演化中起到很重要的作用，營養(yǎng)調節(jié)可以改變慢性病的病情發(fā)展。
[0003]目前還沒有中國人飲食中的脂肪酸類型的數據，因為人們在家中并不能準備所有的食物，而且食物中攝入的脂肪數量高度可變，所以還沒有一個精確的方法去評價飲食中的各個脂肪酸攝入情況，因此這就需要采用生物標記物來提高評估的準確性。今年來，在長期的脂肪酸攝入量的模式中，組織脂肪酸(血清/血漿、動物脂肪、血小板和紅細胞)被用來作為合適的生物標記物。
[0004]血漿或血清磷脂脂肪酸水平主要受到飲食因素的影響，尤其是n-3多不飽和脂肪酸(n_3polyunsaturated fatty acids, n_3PUFA)。研究表明，補充 n_3PUFA 能夠增加組織磷脂多不飽和脂肪酸的含量，但是不同人群膳食脂肪酸攝入量不一樣，而且膳食脂肪酸需要在體內進行一系列的生理反應才能進入細胞膜。
[0005]研究表明，增加n-3PUFA攝取量可阻止心率不齊的發(fā)生，降低血栓的發(fā)生概率，降低血清甘油三酯水平，舒緩動脈粥樣硬化斑的生長，增強血管內皮細胞功能，降低血壓，減少炎癥的發(fā)生。
[0006]多不飽和脂肪酸(PUFA)在血多細胞生理功能中起著重要作用，例如PUFA是細胞膜的組成成分，同時也是許多重要的炎癥調節(jié)因子，如花生四烯酸等的前體。PUFA能夠影響細胞膜的流動性和和膽固醇含量以及影響細胞信號分子的生成，大量的研究表明多不飽和脂肪酸與眾多復雜的疾病有關。磷脂多不飽和脂肪酸組成與心血管疾病、代謝綜合癥、2型糖尿病、血型同型半胱氨酸等相關。
[0007]因此，建立一種簡單易行且有效的脂肪酸譜的方法勢在必行，而且通過建立慢性病相關的脂肪酸譜，對膳食脂肪的攝入進行指導，從而減少相關慢性病的發(fā)生，為人們的健康生活多一層保障是有著重大意義的。

【發(fā)明內容】
[0008]本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種血液相關脂肪酸譜的建立方法。本發(fā)明的方法簡單易行，有效可信；采用本發(fā)明的方法建立中國慢性病人群的血液相關脂肪酸譜，以便對人們的膳食脂肪攝入進行指導，從而減少慢性病的發(fā)生。
[0009]為了解決上述技術問題，本發(fā)明提供一種血液相關脂肪酸譜的建立方法，包括以下步驟:
[0010]I)選擇研究對象，并將已脫離研究對象身體的血漿、血清或血小板中的總脂肪酸成分進行提取、分離、濃縮，從而得到總脂；
[0011]2)、將總脂用薄層層析法分離磷脂、甘油三酯；
[0012]3)、將分離得到的磷脂、甘油三酯進行甲酯化；
[0013]4)、將甲酯化脂肪酸采用氣相色譜分離法測定脂肪酸成分；
[0014]5)、將脂肪酸進行圖譜分析、SPSS數據統(tǒng)計分析；
[0015]6)、將分析所得的數據進行整理、總結。
[0016]作為本發(fā)明的血液相關脂肪酸譜的建立方法的改進:研究對象為哺乳動物，例如為人。
[0017]作為本發(fā)明的血液相關脂肪酸譜的建立方法的改進:該脂肪酸譜的建立方法適用于建立器官的脂肪酸譜；該器官包括心、肝、脾、腎、大腦、脂肪。
[0018]本發(fā)明在采用GC分析血液中脂肪酸的成分，建立相關的脂肪酸譜。
[0019]脂肪酸譜的建立方法是:獲得血液——血液分離為血漿、血清或血小板——血液儲存于_80°C——總脂肪成分的提取——總酯分離——總酯濃縮——(磷脂的分離)(如果測定總酯脂肪酸的話，此步驟可以省略，直接甲酯化)一脂肪酸甲酯化一甲酯物的提取、純化一色譜純正己烷，進GC——圖譜分析——數據統(tǒng)計——脂肪酸譜完成。
[0020]首先聲明，雖然本發(fā)明中涉及使用血液(新鮮血液)；但針對的只是已脫離人體的新鮮血液，其具體獲取過程本身并不屬于本發(fā)明的內容。本發(fā)明對其采集方法的詳細描述只是為了更清楚地介紹生物材料的準備過程，但該描述并不意味著相關技術手段也屬本發(fā)明要求保護的內容。
[0021]在本發(fā)明中，遵守以下規(guī)則:
[0022]I)研究得到倫理委員會的批準；
[0023]2 )嚴格按照標準選擇受試對象；
[0024]3)受試對象簽署書面同意書；
[0025]4)按照建立血液相關脂肪酸譜的方法進行分析；
[0026]5)分析相關脂肪酸與慢性病之間的關系；
[0027]6)作出結論。
[0028]本發(fā)明的立的相關慢性病脂肪酸譜的方法，并不局限于本發(fā)明中案例中的糖尿病、代謝綜合癥、高血壓、高脂血癥、非酒精性脂肪肝等慢性病，也包括目前臨床上認定的其他慢性病。
[0029]具體如下:
[0030]一、血液采集及總酯提取
[0031]本發(fā)明中，血液采集的方法為常規(guī)體檢的方法。即:受試對象近期內無急性病、夕卜傷、手術等意外情況，在采血前24h內不飲酒、不做劇烈運動，采血前一晚10點鐘開始禁食，于次日早上9點至10點之間在醫(yī)院有專業(yè)醫(yī)師嚴格按照臨床標準進行血液采集，采取肘正中靜脈血。
[0032]本發(fā)明中，受試者血樣取血為全血(靜脈全血)5mL于抗凝管中，充分混勻，IOOOr/min離心5min,分離血衆(zhòng)，_80°C儲存待用。
[0033]本發(fā)明中，血清的分離方法:取5mL靜脈全血，靜置2h，IOOOrpm離心IOmin分離血清，-20°C儲存待用。
[0034]本發(fā)明中，血小板的分離方法:取全血(靜脈全血)5mL于3.5%抗凝管(I:9)中，充分混勻，IOOOrpm離心5分鐘,吸取血衆(zhòng)于另一試管中，3000rpm離心15min,棄去上層血衆(zhòng)，加3mL生理鹽水,混勻，3000rpm離心15min,棄去上清液，_80°C待用。
[0035]本發(fā)明中，血液樣本的儲存溫度可以是_80°C、也可以是_20°C、-30°C、-40°C或-70。。;即-20 °C~ -80 °C o
[0036]本發(fā)明中，血液相關總脂肪成分提取的方法為:將血液樣本(血漿、血清或血小板)從_80°C超低溫冰箱中取出，放置常溫下解凍。解凍后，取血漿、血清或血小板0.5mL至20mL具塞試管中，加入IOml氯仿-甲醇混合液(氯仿:甲醇=l:lv/v)。充分搖勻樣品提取液，放A 4°C冰箱中靜置，充分浸提24小時后，進行總酯分離(如果樣本較少的話，可以按照樣本:液體=1:20的比例進行稀釋)。
[0037]本發(fā)明中，總酯分離的方法為:將樣品提取液過濾至IOOmL分液漏斗中(放置濾紙)，原萃取試管(即，20mL具塞試管)再用5mL氯仿-甲醇混合液(氯仿:甲醇=2:1的體積t匕)清洗，轉入分液漏斗；原萃取試管再用5mL氯仿清洗，轉入分液漏斗。除去濾紙后，再加入4mL生理鹽水至分液漏斗中。輕搖分液漏斗，并打開塞子放氣，重復，直到里外氣壓平衡。然后劇烈震蕩分液漏斗。分液漏斗靜置約4小時，兩個液面完全分開。然后收集下層有機相(氯仿層)至圓底蒸發(fā)瓶中，該下層有機相(氯仿層)中含有總酯。
[0038]總酯濃縮的方法為:將圓底蒸發(fā)瓶接取分液漏斗的下層有機相，于38°C水浴中抽真空旋轉蒸發(fā)，用2mL含BHA的氯仿(BHA的濃度為50mg/mL，BHA為丁基羥基茴香醚)洗滌三次后旋干至得數滴清亮透明油狀提取物，即為總酯。最后用5mL含BHA的氯仿(BHA的濃度為50mg/mL)溶解油狀提取物，并轉移至具塞試管(薄層層析)或總酯(直接甲酯化)特福倫試管中(按實驗目的而定)，渦旋振蕩器混勻待用(如不能及時測定，可以充氮后保存在-20°C環(huán)境中待測，二周內測完)。N2吹干具塞試管中的有機試劑，即得總酯濃縮物。
[0039]備注說明:
[0040]因為分液漏斗的特殊性，人工劇烈震蕩，以每分鐘120次的頻率，震蕩20s。(視液體融合的程度而決定力度大小，以將分液漏斗中的液體最大速度到達分液漏斗頂端和底端為準)。
[0041]輕輕震蕩是指將分液漏斗中的液體慢搖，分別緩慢到達分液漏斗的頂端和底端，每分鐘20?30次為宜。
[0042]本發(fā)明中，血液相關總脂肪成分提取的方法中，血液的解凍方法可以是常溫下解凍，也可以是流水解凍，也可以是冰浴下搖床震蕩解凍。
[0043]本發(fā)明中，血液相關總脂肪成分提取的試管可以是20mL，也可以是IOmL或者是其他規(guī)格。
[0044]本發(fā)明中，原萃取試管清洗時，氯仿-甲醇混合液、氯仿以及生理鹽水的體積比例為5:5:4。也可以是其他比例，但以該比例總酯浸提效果最好。
[0045]二、將總脂采用薄層層析法分離磷脂或甘油三酯:
[0046]將總酯濃縮物溶于IOOuL氯仿中，充分混勻，用毛細管點樣于20cm*20cm的硅膠板中。點樣點據底部邊緣2cm處作為基線，進行點樣。點樣完畢后，將硅膠板置于含展開液(石油醚:乙醚:乙酸=85:15:2，v/v/v)的層析缸中，以展開液擴展至距離層析板頂端2cm出結束，于通風櫥中晾干。然后將晾干后的層析板置于三外分析儀中觀察，具體條帶位置如示意圖1所示。刮板。按照試驗要求，刮取甘油三酯或磷脂條帶硅膠，置于IOmL特福倫試管中。
[0047]本發(fā)明中,娃膠板的制備方法:將7g娃膠快速溶于17?20g蒸懼水中，快速攪拌均勻，均勻涂抹于規(guī)格為20cm*20cm的玻璃板上(玻璃板要清洗干凈，蒸餾水潤洗，烘干，做板時不能有水潰存在。)水平放置(否則會導致玻璃板上硅膠厚度不一，影響分離效果)，室溫下凝結。待硅膠干后，樣品點樣前，將其放入100°C烘箱中活化90min，冷卻至常溫，待用。
[0048]本發(fā)明中，硅膠板可以自制，也可以購置。
[0049]本發(fā)明中，如需測定血液磷脂脂肪酸，則刮取磷脂帶硅膠，其位置為點樣處上下Icm0
[0050]本發(fā)明中，如果僅需測定總酯脂肪酸的含量，則不需要采用薄層層析，直接進入下一步-甲酯化。
[0051]三、將分離得到的磷脂或甘油三酯進行甲酯化:
[0052]在本發(fā)明中，包括甲酯化、甲酯物的提取、純化:
[0053]具體如下:
[0054]I)甲酯化:在含有刮板硅膠或總酯的IOmL特福倫試管中加入ImL甲苯和3mL的硫酸一甲醇溶液(硫酸濃度為0.9mol/L)，擰緊蓋子，震蕩搖勻，在70°C水浴條件下，甲酯化2個小時，每隔30min進行震蕩搖勻，加速甲酯化。
[0055]2)甲酯物的提取:甲酯化完后，加入2mL正己烷，再加入生理鹽水至管口處，擰緊蓋子，劇烈震蕩Imin (采用振動器)，2000rpm離心lOmin。將上層正己烷相用玻璃吸管小心吸出至一事先放有2mL蒸餾水的圓底試管中，振蕩混勻，靜置分層再將上層有機相轉移至事先裝有少量(約100?200mg)無水Na2SO4的尖頭離心管中。將上層有機相移入后，輕輕振蕩，若發(fā)現其中的無水似2504可以跳動，證明沒有水分吸過來。再將上層石油醚相轉移至一具塞試管中。
[0056]備注說明:如果無水Na2SO4F能跳動，且溶解，說明有水分吸過來，這需要重新靜置分層，吸取上層有機相，直至無水Na2SO4可以跳動。
[0057]上述為:用特福倫試管(是IOmL的試管)進行甲酯化。
[0058]3)甲酯物的純化:用正己烷?2mL快速過(2?5s過完)SPE固相萃取小柱，再將樣品快速過柱(2?5s過完)。用正己烷清洗具塞試管兩次(每次的用量分別為2mL，ImL)后，快速過柱。然后，用3mL5%乙醚-正己烷溶液緩慢清洗聚酰胺柱(即，SPE固相萃取小柱)，液體成滴收集到具塞試管。先用3mL氯仿:甲醇為2:1 (V:V)的溶液，再用3mL正己烷慢速清洗柱子，沖洗速度為成滴滴下。然后在38°C水浴下N2吹干；得到相應的脂肪酸甲酯。
[0059]本發(fā)明中，脂肪酸的甲酯化可以使不同比例的甲苯:硫酸甲醇的組合，本發(fā)明中的硫酸可以是硫酸，也可以是鹽酸。甲酯物的純化中的正己烷可以是石油醚。
[0060]四、將甲酯化脂肪酸采用氣相色譜分離法測定脂肪酸成分:[0061]在本發(fā)明中，脂肪酸的測定方法為:用100 正己烷重新融解氮吹干的脂肪酸甲酯至樣品瓶中，進樣L由島津氣相色譜儀(GC - 2010型)測定樣品的脂肪酸成分。
[0062]本發(fā)明中，采用的儀器可以是島津的氣相色譜儀，也可以是其他品牌或型號的氣相色譜儀。
[0063]本發(fā)明中，GC - 2010型氣相色譜的分析條件為:調節(jié)空氣到50，調節(jié)氫氣到75。調節(jié)Col (柱溫)到160°C，調節(jié)Det (監(jiān)測器溫度)到260°C，調節(jié)Aux (進樣口溫度)到2700C o 柱溫升溫程序:160°C (Omin) ;20°C/min、180°C (IOmin) ；20°C /min,220°C (5min)；20°C /min,230°C (16.5min)。
[0064]本發(fā)明中，氣相色譜的分析條件可以根據儀器不同而選擇不同的氣相分析條件，或者在原有條件的基礎上進行修改。原則為能夠將31種脂肪酸甲酯混合標樣(sigma)的圖譜清晰與完整的表現。本發(fā)明中，所用的脂肪酸混合標樣為31種脂肪酸甲酯標準品(sigma)，但該標準品也可以是37種脂肪酸甲酯混合標樣(sigma)，也可以是其他品牌或種類的脂肪酸混合標樣。
[0065]備注說明:上述脂肪酸甲酯混合標樣為直接進樣，是為鑒定與分析樣品中的峰的位置時用到的。
[0066]37種脂肪酸甲酯混合標樣(sigma)為新推出的為含37種脂肪酸甲酯的混合標準品，是非等體積混合的標準品，含有反式脂肪酸的成分。
[0067]五、將脂肪酸進行圖譜分析、SPSS數據統(tǒng)計分析；
[0068]本發(fā)明中，脂肪酸的成分分析方法為:采用GC - 2010型氣相色譜儀測定脂肪酸，用杭州英譜科技開發(fā)有限公司HS色譜數據工作站V4.0采集譜圖，并處理分析所采集的譜圖數據。色譜峰采用混合的脂肪酸甲酯標樣(Sigma)來進行鑒定。定量方式采用面積法，定量方法為歸一法。
[0069]本發(fā)明中，譜圖采集處理采用采用與標準品保留時間對照的方法定性，即根據相對保留值定性；采用面積法定量，即運用面積歸一法求各色譜峰面積，并計算血漿中脂肪酸含量。
[0070]本發(fā)明中，數據統(tǒng)計分析采用SPSS進行分析，數據采用獨立樣本t檢驗，結果表示為MeaniSD值。P〈0.05確認為有顯著性差異。
[0071]在本發(fā)明中，數據統(tǒng)計分析的方法可以是SPSS，也可以是SAS、DPS, STATA, Excel等具有分析統(tǒng)計作用的軟件。
[0072]六、將分析所得的數據進行整理，總結。
[0073]為了建立中國慢性病人群的血液相關脂肪酸譜，首先在每個研究進行前需經過倫理委員會的批準。
[0074]本發(fā)明中，受試者均來自浙江地區(qū)，但是受試人群可以是全國范圍內。
[0075]為了建立中國人群慢性病人群的血液相關脂肪酸譜，該研究所有的受試者在實驗前均給予書面同意。
[0076]為了建立中國人群慢性病人群的血液相關脂肪酸譜，每一種慢性病人群及健康對照均按照標準嚴格篩選。
[0077]為了建立中國人群慢性病人群的血液相關脂肪酸譜，需要對樣本的生理參數進行檢測。[0078]本發(fā)明中，總樣本數為3764例，其中病例1444例，健康對照2320例。涉及慢性病包括2型糖尿病(病例781例，健康對照322例)，代謝綜合癥(病例262例，健康對照868例)，高脂血癥(病例86例，健康對照82例)，高血壓(病例214例，健康對照940例)，非酒精性脂肪肝(病例101例，健康對照108例)
[0079]本發(fā)明具有如下技術優(yōu)點:
[0080]1、本發(fā)明建立了一種系統(tǒng)、有效、可信的血液相關脂肪酸譜的建立方法；
[0081]2、本發(fā)明建立了人類血液相關脂肪酸譜與慢性病之間的關系的分析思路。
[0082]綜上所述，本發(fā)明創(chuàng)立了一種系統(tǒng)研究不同脂肪酸的攝入與健康人及慢性疾病之間的相關性的方法；創(chuàng)立了一種簡單有效且實用的脂肪酸譜的建立方法；建立了健康人與目前流行的慢性疾病的脂肪酸譜，對人類健康和脂肪攝入提供了強有力的指導作用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0083]下面結合附圖對本發(fā)明的【具體實施方式】作進一步詳細說明。
[0084]圖1是血液脂質提取物薄層層析示意圖譜。
[0085]圖2是31種脂肪酸混合標樣圖。
[0086]圖3是糖尿病人血漿磷脂脂肪酸GC圖。
[0087]圖4是正常人血漿磷脂脂肪酸GC圖。
【具體實施方式】
[0088]實施例1、2型糖尿病人群的血漿磷脂脂肪酸譜的建立方法
[0089]研究背景:
[0090]2型糖尿病(Type2Diabetes Mellitus, T2DM)是一種嚴重影響個人和社會的慢性疾病，其在全球急劇上升的發(fā)病率，使得人們對糖尿病的關注越來越多。據估計，到2030年全球將有近3.6億糖尿病患者，糖尿病引起的健康問題會對生活質量帶來巨大變化。體重增加，并伴隨MS相關癥狀是2型糖尿病最明顯最常見的臨床癥狀。研究表明，膳食因素在T2DM的發(fā)生和發(fā)展中起了重要作用。增加飲食中n-3多不飽和脂肪酸(n_3PUFA)的攝入，可以改善體內脂質構成，改善胰島素抵抗的狀況對男性醫(yī)療專業(yè)人員12年的跟蹤研究觀察到脂肪種類和患2型糖尿病的風險由明顯的聯系。飲食中n-6和n-3多不飽和脂肪酸的不平衡是胰島素抵抗、代謝綜合癥中血脂異常的一個重要因素。動物實驗報道喂養(yǎng)n-3多不飽和脂肪酸可以提高胰島素的敏感性，然而人類實驗表明使用n-6多不飽和脂肪酸降低胰島素的敏感性。2型糖尿病的前瞻性研究中報道總脂肪酸、或者特殊類型的脂肪酸和2型糖尿病發(fā)病風險沒有關系。動物學研究表明H-3PUFA可以降低或阻止胰島素抵抗，但是臨床研究結果不一致。動物學研究表明H-3PUFA可以減低或阻止胰島素抵抗，但是臨床結果卻不一致。因此，研究膳食成分中脂肪酸的攝入與T2DM之間的關系變得十分重要，，由于中國人飲食的復雜性和烹飪過程的隨意性，使得通過分析膳食成分來研究脂肪酸攝入與T2DM之間的關系十分困難。因為飲食會影響血漿脂肪酸成分的種類和數量，因此我們選擇血漿脂肪酸作為膳食脂肪酸攝入的生物標記物，以建立T2DM的脂肪酸譜，從而研究膳食脂肪酸與T2DM之間的關系，以便進一步從飲食上控制與預防T2DM的流行。
[0091]研究方法與結果分析[0092]1.研究經過浙江大學生物系統(tǒng)工程與食品科學學院倫理委員會的審核確認后，選擇受試對象，所有受試對象給予書面同意書。
[0093]2.選擇受試人群
[0094]研究對象:2型糖尿病病人:經嚴格篩選，選擇浙江省內，血糖水平穩(wěn)定在7.0~10.0mmol的不同年齡段(0-100yr)、不同性別(男、女)的2型糖尿病病人被納入研究對象。I型糖尿病人、具有心血管疾病史或動脈粥樣硬化史、腦血管疾病史，嚴重肝臟疾病和/或腎臟疾病以及血液疾病的人都被排除在外。所有的受試者均服用降糖藥。
[0095]健康對照:通過健康檢查、年齡和性別均匹配的健康對照受試者被納入此研究。通過對高血壓病、腎臟疾病、高脂蛋白血癥、血液癥、糖尿病、遺傳性心血管疾病過量飲酒和吸毒的嚴格篩查，322例健康人被納入研究對象。
[0096]3.樣本量:總樣本數為1103例，2型糖尿病患者為781例(其中男性為418例，女性為363例)，健康對照為322例(其中男性為161例，女性為161例)。
【權利要求】
1.血液相關脂肪酸譜的建立方法，其特征是包括以下步驟: 1)選擇研究對象，并將已脫離研究對象身體的血漿、血清或血小板中的總脂肪酸成分進行提取、分離、濃縮，從而得到總脂； 2)、將總脂用薄層層析法分離磷脂、甘油三酯； 3)、將分離得到的磷脂、甘油三酯進行甲酯化； 4)、將甲酯化脂肪酸采用氣相色譜分離法測定脂肪酸成分； 5)、將脂肪酸進行圖譜分析、SPSS數據統(tǒng)計分析； 6)、將分析所得的數據進行整理、總結。
2.根據權利要求1所述的血液相關脂肪酸譜的建立方法，其特征在于:研究對象為哺乳動物。
3.根據權利要求2所述的血液相關脂肪酸譜的建立方法，其特征在于:哺乳動物為人。
4.根據權利要求3所述的血液相關脂肪酸譜的建立方法，其特征在于:該脂肪酸譜的建立方法適用于建立器官的脂肪酸譜；該器官包括心、肝、脾、腎、大腦、脂肪。
【文檔編號】G01N30/88GK103616465SQ201310515767
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年10月28日 優(yōu)先權日:2013年10月28日
【發(fā)明者】李鐸, 楊靜, 黃濤 申請人:浙江大學