一種高效液相色譜檢測(cè)血液中氯丙嗪含量的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物醫(yī)療【技術(shù)領(lǐng)域】，提供了一種高效液相色譜檢測(cè)血液中氯丙嗪含量的方法，包括配制1mg/ml的的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液、1mg/ml的的安定內(nèi)標(biāo)溶液、空白標(biāo)樣、正常人血液標(biāo)樣、病人血液標(biāo)樣，放入色譜儀里繪制色譜圖，根據(jù)色譜圖判斷病人血液里面是否含有氯丙嗪；然后根據(jù)色譜圖繪制氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線，再將病人血液標(biāo)樣色譜圖中的氯丙嗪峰值、安定內(nèi)標(biāo)溶液峰值與氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，計(jì)算出病人血液中的氯丙嗪含量。本發(fā)明有效解決了色譜圖中雜峰多、靈敏度低、精確度低、成本高、繪制出的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍較小、過(guò)氧化物多影響氯丙嗪穩(wěn)定提取的問題。
【專利說(shuō)明】一種高效液相色譜檢測(cè)血液中氯丙嗪含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)療【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種高效液相色譜檢測(cè)血液中氯丙嗪含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]氯丙嗪屬二甲胺族分噻嗪類藥物，鎮(zhèn)靜作用明顯，可產(chǎn)生較強(qiáng)的抗膽堿作用及中度的錐體外系癥狀，止吐作用較強(qiáng)，可制止多種原因引起的嘔吐，為抗精神病藥的代表藥物，小劑量可作為鎮(zhèn)吐藥使用。
[0003]氯丙嗪口服易吸收，但吸收不規(guī)則，個(gè)體差異甚大，吸收速度受胃內(nèi)食物和抗膽堿藥的影響，吸收后2?4h血藥濃度達(dá)到高峰；氯丙嗪肌內(nèi)注射吸收迅速，15?30min血藥濃度達(dá)到高峰。氯丙嗪脂溶性高，易透過(guò)血腦屏障，腦內(nèi)濃度可達(dá)血漿濃度的10倍，但是主要代謝在肝臟，易產(chǎn)生藥物殘留，殘留的氯丙嗪和部分具有原藥活性的代謝物，能夠引起白細(xì)胞減少和粒細(xì)胞缺乏癥，從而引起人體肝臟、腎臟的病變，還會(huì)引起眼部并發(fā)癥等。
[0004]目前，市場(chǎng)上存在的氯丙嗪血液濃度的測(cè)試方法中，濃度較低的點(diǎn)很難提取，例如5、10、20ng/ml的含量點(diǎn)不能在標(biāo)準(zhǔn)曲線上繪制出來(lái)，并且標(biāo)準(zhǔn)曲線的最高點(diǎn)的濃度為160ng/ml，臨床上有很多病人的氯丙嗪含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)該最高點(diǎn)，故此線性范圍過(guò)窄；過(guò)氧化物多，使對(duì)過(guò)氧化物敏感的氯丙嗪的提取率不穩(wěn)定。
[0005]因此，生物醫(yī)療【技術(shù)領(lǐng)域】急需一種雜峰少、靈敏度高、精確度高、能夠繪制出較大線性范圍的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線、成本低廉、降低過(guò)氧化物存在率，能夠穩(wěn)定提取氯丙嗪的高效液相色譜檢測(cè)血液中氯丙嗪含量的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了克服現(xiàn)有氯丙嗪含量檢測(cè)不準(zhǔn)確的缺點(diǎn)，本發(fā)明提供一種高效液相色譜檢測(cè)血液中氯丙嗪含量的方法，技術(shù)方案如下:
[0007]—種高效液相色譜檢測(cè)血液中氯丙嗪含量的方法，其特征在于，包含以下步驟:
[0008]第一步，配制Img / ml的的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液；
[0009]首先，稱取分析純氯丙嗪500mg，放入500mL容量瓶中，然后將色譜純甲醇倒入裝有氯丙嗪的容量瓶中，稀釋至500ml，搖勻；
[0010]第二步，配制lmg/ml的的安定內(nèi)標(biāo)溶液；
[0011]首先，稱取分析純安定lOOmg，放入IOOmL容量瓶中，然后將去離子水倒入裝有安定的容量瓶中，稀釋至100ml，搖勻。
[0012]第三步，配制17.6 ii g/ml維生素C ;
[0013]首先，稱取維生素Cl.76mg，放入IOOmL容量瓶中，將去離子水加入裝有維生素C的容量瓶中，稀釋至100ml，搖勻；
[0014]第四步，配制2129.6ml流動(dòng)相；
[0015]首先將甲醇1400ml、冰醋酸5.2ml、四甲基乙二胺4.4ml25000ml的容量瓶中，然后向裝有甲醇、冰醋酸、四甲基乙二胺的容量瓶中倒入720ml去離子水，搖勻。
[0016]第五步，取500 ii I正常人的血清加入IOml具塞抽提管中，作為空白標(biāo)樣；
[0017]第六步，取500iU正常人的血清加入IOml具塞抽提管中，然后量取150ng安定內(nèi)標(biāo)溶液，倒入裝有正常人血清的具塞抽提管中，作為標(biāo)樣I ;
[0018]第七步，取500iil正常人的血清加入IOml具塞抽提管中，然后依次量取300ng氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液，倒入裝有正常人血清的具塞抽提管中，作為標(biāo)樣2 ；
[0019]第八步，取500iU正常人的血清加入IOml具塞抽提管中，然后量取150ng安定內(nèi)標(biāo)溶液，分別與10ng、50ng、100ng、200ng、300ng、600ng氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液，一起倒入裝有病人血清的具塞抽提管中，作為標(biāo)樣3、4、5、6、7、8 ；
[0020]第九步，取500iU病人的血清加入IOml具塞抽提管中，然后量取150ng安定內(nèi)標(biāo)溶液，倒入裝有病人血清的具塞抽提管中，作為標(biāo)樣9 ；
[0021]第十步，首先分別向空白標(biāo)樣、標(biāo)樣1、2、3、4、5、6、7、8、9中加入維生素ClOO yl，搖勻后再分別加入2mol/l氫氧化鈉500 Ul，再加入色譜純乙醚4.5ml，漩渦振蕩3分鐘，靜置20分鐘；
[0022]第十一步，分別從離心后的空白標(biāo)樣、標(biāo)樣1、2、3、4、5、6、7、8、9中移取3.5ml上清液至10支潔凈的IOml具塞抽提管中，放置于50°C下水浴，并在氮?dú)饬飨抡舭l(fā)至完全干燥；
[0023]第十二步，首先將取出的殘留物分別用250 Ul流動(dòng)相漩渦混勻、溶解，然后將溶解物分別吸入10支尖底離心管中；
[0024]第十三步，分別從10支尖底離心管中取出100 ill，放入10支試管中，再將10支試管放入色譜儀中進(jìn)行光譜測(cè)量，得出10張色譜圖；
[0025]第十四步，根據(jù)空白標(biāo)樣、標(biāo)樣1、標(biāo)樣2、標(biāo)樣3的比較可以判斷出環(huán)己烷羧酸內(nèi)標(biāo)溶液的峰值，氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰值；進(jìn)一步地，根據(jù)標(biāo)樣3的色譜圖可以判斷出標(biāo)樣9中是否含有氯丙嗪；進(jìn)一步地，色譜儀根據(jù)標(biāo)樣3、4、5、6、7、8的色譜圖繪制出氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線；進(jìn)一步地，色譜儀根據(jù)色譜圖中氯丙嗪的峰值、安定內(nèi)標(biāo)溶液的峰值、氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出標(biāo)樣9中氯丙嗪的含量。
[0026]如上的一種高效液相色譜檢測(cè)血液中氯丙嗪的方法，其中，空白標(biāo)樣的色譜圖為一條接近于平滑的直線。
[0027]如上的一種高效液相色譜檢測(cè)血液中氯丙嗪的方法，其中，氯丙嗪的出峰時(shí)間為8.14±0.55 分。
[0028]如上的一種高效液相色譜檢測(cè)血液中氯丙嗪的方法，其中，氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率為 0.9998±0.0002。
[0029]本發(fā)明的有益效果是:
[0030]1.本發(fā)明實(shí)驗(yàn)過(guò)程中加入了維生素C，能夠有效的消除過(guò)氧化物，更加穩(wěn)定的提取出病人血液中的氯丙嗪。
[0031]2.能夠繪制出氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線，與病人的氯丙嗪色譜圖相比較，從而計(jì)算出氯丙
嗪含量。
[0032]3.本發(fā)明使用的實(shí)驗(yàn)儀器少、操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、精確度高。
[0033]4.本發(fā)明采用色譜儀生成的色譜圖雜峰少，具有更好的辨識(shí)度。
[0034]5.本發(fā)明檢測(cè)成本低廉，提高了經(jīng)濟(jì)效益?！緦＠綀D】

【附圖說(shuō)明】
[0035]下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明:
[0036]圖1是本發(fā)明的空白標(biāo)樣產(chǎn)生的色譜圖。
[0037]圖2是本發(fā)明的標(biāo)樣I產(chǎn)生的色譜圖。
[0038]圖3是本發(fā)明的標(biāo)樣2產(chǎn)生的色譜圖。
[0039]圖4是本發(fā)明的標(biāo)樣3產(chǎn)生的色譜圖。
[0040]圖5是本發(fā)明的標(biāo)樣9產(chǎn)生的色譜圖。
[0041]圖6是本發(fā)明根據(jù)標(biāo)樣3、4、5、6、7、8色譜圖繪制出的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0042]為了使本發(fā)明的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達(dá)成目的與功效易于明白了解，下面結(jié)合具體圖示，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
[0043]本發(fā)明的具體實(shí)施步驟如下:
[0044]第一步，配制Img / ml的的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液；
[0045]首先，稱取分析純氯丙嗪500mg，放入500mL容量瓶中，然后將色譜純甲醇倒入裝有氯丙嗪的容量瓶中，稀釋至500ml，搖勻。
[0046]第二步，配制lmg/ml的的安定內(nèi)標(biāo)溶液；
[0047]首先，稱取分析純安定lOOmg，放入IOOmL容量瓶中，然后將去離子水倒入裝有安定的容量瓶中，稀釋至100ml，搖勻。
[0048]第三步，配制17.6 U g/ml維生素C ；
[0049]首先，稱取維生素Cl.76mg，放入IOOmL容量瓶中，將去離子水加入裝有維生素C的容量瓶中，稀釋至100ml，搖勻；
[0050]第四步，配制2129.6ml流動(dòng)相；
[0051 ] 首先將甲醇1400ml、冰醋酸5.2ml、四甲基乙二胺4.4ml25000ml的容量瓶中，然后向裝有甲醇、冰醋酸、四甲基乙二胺的容量瓶中倒入720ml去離子水，搖勻。
[0052]第五步，取500iil正常人的血清加入IOml具塞抽提管中，作為空白標(biāo)樣；
[0053]第六步，取500iU正常人的血清加入IOml具塞抽提管中，然后量取150ng安定內(nèi)標(biāo)溶液，倒入裝有正常人血清的具塞抽提管中，作為標(biāo)樣I ;
[0054]第七步，取500 U I正常人的血清加入IOml具塞抽提管中，然后依次量取300ng氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液，倒入裝有正常人血清的具塞抽提管中，作為標(biāo)樣2 ；
[0055]第八步，取500iU正常人的血清加入IOml具塞抽提管中，然后量取150ng安定內(nèi)標(biāo)溶液，分別與10ng、50ng、100ng、200ng、300ng、600ng氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液，一起倒入裝有病人血清的具塞抽提管中，作為標(biāo)樣3、4、5、6、7、8 ；
[0056]第九步，取500 U I病人的血清加入IOml具塞抽提管中，然后量取150ng安定內(nèi)標(biāo)溶液，倒入裝有病人血清的具塞抽提管中，作為標(biāo)樣9 ；
[0057]第十步，首先分別向空白標(biāo)樣、標(biāo)樣1、2、3、4、5、6、7、8、9中加入維生素ClOO yl，搖勻后再分別加入2mol/l氫氧化鈉500 Ul，再加入色譜純乙醚4.5ml，漩渦振蕩3分鐘，靜置20分鐘；[0058]第 一步，分別從離心后的空白標(biāo)樣、標(biāo)樣1、2、3、4、5、6、7、8、9中移取3.5ml上清液至10支潔凈的IOml具塞抽提管中，放置于50°C下水浴，并在氮?dú)饬飨抡舭l(fā)至完全干燥；
[0059]第十二步，首先將取出的殘留物分別用250 Ul流動(dòng)相漩渦混勻、溶解，然后將溶解物分別吸入10支尖底離心管中；
[0060]第十三步，分別從10支尖底離心管中取出100 iil，放入10支試管中，再將10支試管放入色譜儀中進(jìn)行光譜測(cè)量，得出10張色譜圖；
[0061]第十四步，根據(jù)空白標(biāo)樣、標(biāo)樣1、標(biāo)樣2、標(biāo)樣3的比較可以判斷出環(huán)己烷羧酸內(nèi)標(biāo)溶液的峰值，氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰值，圖1是本發(fā)明的空白標(biāo)樣產(chǎn)生的色譜圖，為一條直線，圖2是本發(fā)明的標(biāo)樣I產(chǎn)生的色譜圖，101為安定內(nèi)標(biāo)溶液的產(chǎn)生的峰，圖3是本發(fā)明的標(biāo)樣2產(chǎn)生的色譜圖，102為氯丙嗪溶液產(chǎn)生的峰，圖4是本發(fā)明的標(biāo)樣3產(chǎn)生的色譜圖，既含有101安定內(nèi)標(biāo)溶液產(chǎn)生的峰，又含有102氯丙嗪溶液產(chǎn)生的峰；進(jìn)一步地，根據(jù)標(biāo)樣3、
4、5、6、7、8的色譜圖可以判斷出標(biāo)樣9中是否含有氯丙嗪產(chǎn)生的峰，隨即判斷出是否含有氯丙嗪；進(jìn)一步地，色譜儀根據(jù)標(biāo)樣3、4、5、6、7、8的色譜圖繪制出圖6，圖6是本發(fā)明的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線，圖5是本發(fā)明的標(biāo)樣9產(chǎn)生的色譜圖；進(jìn)一步地，色譜儀根據(jù)圖5中氯丙嗪的峰值、安定內(nèi)標(biāo)溶液的峰值、圖6中氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出標(biāo)樣9中氯丙嗪的含量。
[0062]下面舉例幾組具體實(shí)施例，說(shuō)明病人血液內(nèi)的氯丙嗪含量的測(cè)試:
[0063]實(shí)施例一:在以吸光度為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)的色譜圖上得出安定內(nèi)標(biāo)溶液在保留時(shí)間為6.045秒時(shí)的峰以及病人血液內(nèi)的氯丙嗪在保留時(shí)間為8.146秒時(shí)的峰，根據(jù)圖6中氯丙嗪的標(biāo)準(zhǔn)曲線，儀器自動(dòng)計(jì)算出病人血液內(nèi)的氯丙嗪含量為85.30239ng/ml。
[0064]實(shí)施例二:在以吸光度為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)的色譜圖上得出安定內(nèi)標(biāo)溶液在保留時(shí)間為6.067秒時(shí)的峰以及病人血液內(nèi)的氯丙嗪在保留時(shí)間為8.254秒時(shí)的峰，根據(jù)圖6中氯丙嗪的標(biāo)準(zhǔn)曲線，儀器自動(dòng)計(jì)算出病人血液內(nèi)的氯丙嗪含量為33.56788ng/ml。
[0065]實(shí)施例三:在以吸光度為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)的色譜圖上得出安定內(nèi)標(biāo)溶液在保留時(shí)間為5.992秒時(shí)的峰以及病人血液內(nèi)的氯丙嗪在保留時(shí)間為8.254秒時(shí)的峰，根據(jù)圖6中氯丙嗪的標(biāo)準(zhǔn)曲線，儀器自動(dòng)計(jì)算出病人血液內(nèi)的氯丙嗪含量為13.37199ng/ml。
[0066]以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說(shuō)明書中描述的支是說(shuō)明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其等同物界定。
【權(quán)利要求】
1.本發(fā)明的一種高效液相色譜檢測(cè)血液中氯丙嗪含量的方法，其特征在于，包含以下步驟: 第一步，配制Img / ml的的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液； 首先，稱取分析純氯丙嗪500mg，放入500mL容量瓶中，然后將色譜純甲醇倒入裝有氯丙嗪的容量瓶中，稀釋至500ml，搖勻； 第二步，配制lmg/ml的的安定內(nèi)標(biāo)溶液； 首先，稱取分析純安定lOOmg，放入IOOmL容量瓶中，然后將去離子水倒入裝有安定的容量瓶中，稀釋至100ml，搖勻； 第三步，配制17.6 u g/ml維生素C ； 首先，稱取維生素Cl.76mg,放入IOOmL 容量瓶中，將去離子水加入裝有維生素C的容量瓶中，稀釋至100ml，搖勻； 第四步，配制2129.6ml流動(dòng)相； 首先將甲醇1400ml、冰醋酸5.2ml、四甲基乙二胺4.4ml25000ml的容量瓶中，然后向裝有甲醇、冰醋酸、四甲基乙二胺的容量瓶中倒入720ml去離子水，搖勻； 第五步，取500 iil正常人的血清加入IOml具塞抽提管中，作為空白標(biāo)樣； 第六步，取500iU正常人的血清加入IOml具塞抽提管中，然后量取150ng安定內(nèi)標(biāo)溶液，倒入裝有正常人血清的具塞抽提管中，作為標(biāo)樣I ; 第七步，取500 u I正常人的血清加入IOml具塞抽提管中，然后依次量取300ng氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液，倒入裝有正常人血清的具塞抽提管中，作為標(biāo)樣2 ； 第八步，取500iU正常人的血清加入IOml具塞抽提管中，然后量取150ng安定內(nèi)標(biāo)溶液，分別與10ng、50ng、100ng、200ng、300ng、600ng氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液，一起倒入裝有病人血清的具塞抽提管中，作為標(biāo)樣3、4、5、6、7、8 ； 第九步，取500 ill病人的血清加入IOml具塞抽提管中，然后量取150ng安定內(nèi)標(biāo)溶液，倒入裝有病人血清的具塞抽提管中，作為標(biāo)樣9 ； 第十步，首先分別向空白標(biāo)樣、標(biāo)樣1、2、3、4、5、6、7、8、9中加入維生素ClOO yl，搖勻后再分別加入2mol/l氫氧化鈉500 u I,再加入色譜純乙醚4.5ml,鏇渦振蕩3分鐘,靜置20分鐘； 第十一步，分別從離心后的空白標(biāo)樣、標(biāo)樣1、2、3、4、5、6、7、8、9中移取3.5ml上清液至10支潔凈的IOml具塞抽提管中，放置于50°C下水浴，并在氮?dú)饬飨抡舭l(fā)至完全干燥； 第十二步，首先將取出的殘留物分別用250 Ul流動(dòng)相漩渦混勻、溶解，然后將溶解物分別吸入10支尖底離心管中； 第十三步，分別從10支尖底離心管中取出100 iil，放入10支試管中，再將10支試管放入色譜儀中進(jìn)行光譜測(cè)量，得出10張色譜圖； 第十四步，根據(jù)空白標(biāo)樣、標(biāo)樣1、標(biāo)樣2、標(biāo)樣3的比較可以判斷出環(huán)己烷羧酸內(nèi)標(biāo)溶液的峰值，氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰值；進(jìn)一步地，根據(jù)標(biāo)樣3的色譜圖可以判斷出標(biāo)樣9中是否含有氯丙嗪；進(jìn)一步地，色譜儀根據(jù)標(biāo)樣3、4、5、6、7、8的色譜圖繪制氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線；進(jìn)一步地，色譜儀根據(jù)色譜圖中氯丙嗪的峰值、安定內(nèi)標(biāo)溶液的峰值、氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出標(biāo)樣9中氯丙嗪的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的一種高效液相色譜檢測(cè)血液中氯丙嗪的方法，其特征在于，空白標(biāo)樣的色譜圖為一條接近于平滑的直線。
3.如權(quán)利要求1所述的一種高效液相色譜檢測(cè)血液中氯丙嗪的方法，其特征在于，氯丙嗪的出峰時(shí)間為8.14±0.55分。
4.如權(quán)利要求1所述的一種高效液相色譜檢測(cè)血液中氯丙嗪的方法，其特征在于，氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線的 斜率為0.9998 ±0.0002。
【文檔編號(hào)】G01N30/88GK103454368SQ201310405448
【公開日】2013年12月18日 申請(qǐng)日期:2013年9月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月9日
【發(fā)明者】馮娟, 甄燕 申請(qǐng)人:上海蘭衛(wèi)臨床檢驗(yàn)有限公司