用于合成醋酸格拉替雷的質(zhì)譜內(nèi)標(biāo)的多肽的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于合成醋酸格拉替雷（又稱共聚物-1）的質(zhì)譜內(nèi)標(biāo)的多肽，其制備方法和用途。
【專利說明】用于合成醋酸格拉替雷的質(zhì)譜內(nèi)標(biāo)的多肽

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及用于合成醋酸格拉替雷(又稱共聚物-1)的質(zhì)譜內(nèi)標(biāo)的多肽，其制備方 法和用途。具體而言，本發(fā)明涉及用于在醋酸格拉替雷合成過程中，作為中間體分子量測定 的內(nèi)標(biāo)的多肽，其制備方法和用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 自身免疫類疾病是指，生物機體的免疫系統(tǒng)將一些機體本身的組織當(dāng)作"外來物" 進行攻擊的現(xiàn)象。通常這種疾病可以通過阻礙生物機體T細胞和B細胞對機體自身組織的 反應(yīng)，得到緩解。這些早期的免疫反應(yīng)是通過抗原結(jié)合到主要組織相容性抗原復(fù)合物（MHC) 分子上促進的，并通過T細胞表達出來。自身免疫類疾病就是機體本身的組織和蛋白質(zhì)被 當(dāng)作"自抗原"，被機體免疫系統(tǒng)攻擊。例如：多發(fā)性硬化癥，就是免疫系統(tǒng)攻擊隔離和保護 神經(jīng)的髓鞘的疾病。這種疾病發(fā)展到失去髓鞘，就會帶來神經(jīng)元和運動神經(jīng)功能喪失。
[0003] 很多藥物開發(fā)出來用于治療自身免疫類疾病，包括多發(fā)性硬化癥。醋酸格拉替雷 是一個由丙氨酸、谷氨酸、賴氨酸和酪氨酸組成的多肽的混合物。它的氨基酸摩爾比大約是 0· 392 ?0· 462:0. 129 ?0· 153:0. 300 ?0· 374:0. 086 ?0· 100,平均分子量大約 5000 ? 9000道爾頓。US5800808中描述了共聚物-1和其三元共聚物(丙氨酸、谷氨酸、賴氨酸和酪 氨酸中任意三種組成的多肽的混合物）的平均分子量最佳范圍和合成工藝。
[0004] 最早，Teitelbaum 等在 Eur. J. Immun.，1，242, 1971 中描述了合成共聚物-1 的方 法是由溶于1，4-二氧六環(huán)的L-丙氨酸的N-羧酸酐、L-酪氨酸的N-羧酸酐、γ -谷氨酸 芐酯的N-羧酸酐和三氟乙酰基賴氨酸的N-餘酸酐制各保護的醋酸格柃替雷（保護的共聚 物-〇〇然后用33%溴化氫的乙酸溶液除去谷氨酸殘基上的γ-芐基保護基，同時部分的 切斷多狀的狀鏈，得到三氟乙酰某醋酸格柃替雷（三氟乙酰某共聚物-1)。然后用哌啶水溶 液除去賴氨酸殘基上的三氟乙?；Ｗo基，得到粗共聚物-1。最后，經(jīng)過透析，將溶液凍干， 即得到共聚物-1原料藥。
[0005] 為了能夠確保得到的共聚物-1或三元共聚物具有藥效，就必須準確的知道多肽 混合物在合成過程中的平均分子量分布和變化。已有常規(guī)方法可以得到共聚物-1的平均 分子量，但是就整個工藝的過程控制而言，這類方法不適合。因為保護的共聚物和三氟乙酰 基共聚物都不溶于水，而共聚物-1易溶于水，常規(guī)方法也是在水體系中測量共聚物-1的平 均分子量。而且通常用于測定分子量的柱色譜法還會因待測產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)、組成等不同而存 在一定誤差。
[0006] 因此，本領(lǐng)域中仍然需要更加準確地在共聚物-1合成過程中測量中間體的分子 量，尤其是保護的共聚物和三氟乙?；簿畚锏姆肿恿浚_得到共聚物-1合成過程中平 均分子量和分子量分布變化的規(guī)律，從而加強對共聚物-1合成過程中的中間體質(zhì)量控制。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明就是為了在合成共聚物-1的過程中，加強工藝控制，找到保護的共聚 物-1、三氟乙?；簿畚?1和共聚物-1的分子量之間的關(guān)系和變化規(guī)律。所以，準確的測 量保護的共聚物和三氟乙?；簿畚锏钠骄肿恿亢头肿恿糠植季陀葹橹匾?。本發(fā)明中 利用了兩個系列的合成多肽的作為內(nèi)標(biāo)，確定了色譜柱的校正系數(shù)，得到了比較準確的分 子量，為找到保護的共聚物、三氟乙?；簿畚锖凸簿畚?1的分子量之間的關(guān)系和變化規(guī) 律提供了可靠的數(shù)據(jù)支持。
[0008] 在一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種用于醋酸格拉替雷合成的內(nèi)標(biāo)品1，包括選 自以下的3-7條多肽：
[0009] 表1.內(nèi)標(biāo)肽系列（其中TFA表示三氟乙?；?，Bn表示芐基，NEt2表示碳端是 N，N-二乙基酰胺）
[0010]

【權(quán)利要求】
1. 一種用于醋酸格拉替雷合成的內(nèi)標(biāo)品，包括選自以下的3-7條多肽： TV-35-PR AK (TFA)K (TFA)YAK (TFA)K (TFA)E (Bn)K (TFA)AAK (TFA)K (TFA )AYK (TFA)K (TFA)E (Bn)AK (TFA)AK (TFA)AAE (Bn)AAAK (TFA)E (Bn)AAYE (Bn) A-NEt2 TV-45-PR AK (TFA)K (TFA)YAK (TFA)K(TFA)AK(TFA)AE(Bn)K(TFA)AK(TF A)K (TFA)AYK (TFA)AAE (Bn)AK(TFA)K(TFA)AAK(TFA)YE(Bn)K (TFA)AAAE (Bn) K (TFA)AAAK(TFA)E(Bn)AAYE(Bn)A-NEt2 TV-56-PR AK (TFA)K (TFA)YAK (TFA)K (TFA)E (Bn)K (TFA)AYAK (TFA)K (TF A) AE (Bn) K (TFA) AAK (TFA) K (TFA) AE (Bn) AK (TFA) AYK (TFA) AA E (Bn) AK (TFA) K(TFA)K(TFA)AE(Bn)AK(TFA)YK (TFA)AE (Bn)AA K(TFA)AAAK(TFA)E(Bn) AAYE(Bn)A-NEt2 TV-66-PR AK (TFA)K (TFA)YAK (TFA)K (TFA)E (Bn)K (TFA)AYAK (TFA)AK (T FA) K (TFA) AE (Bn) AK (TFA) AAK (TFA) K (TFA) AK (TFA) AE (Bn) AK (TFA) K (TFA) YAK(TFA)AAK(TFA)AE(Bn)K(TFA)K (TFA)E (Bn) YA AAE(Bn)AK(TFA)YK (TFA) AE (Bn)AAK (TFA)AAAK(TFA)E(Bn)A AYE (Bn)A_NEt2 TV-77-PR AK (TFA)K (TFA)YAK (TFA)K (TFA)E (Bn)K (TFA)AYAK (TFA)K(TF A) AE (Bn) K (TFA) AAK (TFA) K (TFA) AE (Bn) AK (TFA) AYK (TFA) AA E (Bn) AK (TFA) K (TFA) K (TFA) AK (TFA) AE (Bn) AK (TFA) K (TFA) YA K (TFA) AAK (TFA) AE (Bn) K(TFA)K(TFA)E(Bn)YAAAE(Bn)AK(TF A)YK(TFA)AE(Bn)AAK(TFA)AAAK(TFA) E (Bn)AAYE(Bn)A-NEt2 TV-86-PR AK (TFA)K (TFA)YAK (TFA)K (TFA)E (Bn)K (TFA)AYAK (TFA)K (TF A) AE (Bn) K (TFA) AAK (TFA) K (TFA) AE (Bn) AK (TFA) AYK (TFA) AA E (Bn) AK (TFA) K (TFA) K (TFA) AK (TFA) AE (Bn) AK (TFA) K (TFA) YA K (TFA) AAK (TFA) AE (Bn) K(TFA)K(TFA)E(Bn)YAAAE (Bn)AK (TF A)YK(TFA)AE(Bn)AAK(TFA)K (TFA) AYK (TFA)AE (Bn)AAK(TFA) AAAK (TFA)E(Bn)AAYE(Bn)A_NEt2 和 TV-109-PR AK (TFA)K (TFA)YAK(TFA)K(TFA)AE (Bn)K(TFA)AYAK(TFA)K(T FA) AK (TFA) AAK (TFA) E (Bn) K (TFA) K (TFA) AYAK (TFA) K (TFA) E (Bn) AK (TFA) AYK(TFA)AAE(Bn)AK(TFA)K(TFA)K(TFA)AK (TFA )AE(Bn)AK(TFA)K(TFA) YAK(TFA)E(Bn)AAK(TFA)AK (TFA)K (TF A)E(Bn)AYK(TFA)AE(Bn)AK (TFA) K (TFA)YAK (TFA)AAK(TFA)A E (Bn)K (TFA)K (TFA)E(Bn)YAAAE(Bn)AK(TFA) K(TFA)AE(Bn)AA K(TFA)AYK(TFA)AE(Bn)AAK(TFA)AAAK(TFA)E(Bn) AAYE(Bn) A_NEt2 其中TFA表示三氟乙酰基，Bn表示芐基，NEt2表示碳端是N，N-二乙基酰胺。
2. -種用于醋酸格拉替雷合成的內(nèi)標(biāo)品，包括選自以下的3-7條多肽： TV-35-TFA AK (TFA)K (TFA)YAK(TFA)K(TFA)ΕΚ(TFA)AAK(TFA)K(TFA) A YK (TFA)K (TFA)EAK(TFA)AK(TFA)AAEAAAK(TFA)EAAYEA- OH TV-45-TFA AK (TFA)K (TFA)YAK (TFA)K(TFA)AK(TFA)AEK(TFA)AK(TFA) K (TFA)AYK(TFA)AAEAK (TFA)K (TFA)AAK (TFA)YEK (TFA)A AAEK (TFA) AAAK(TFA)EAAYEA-OH TV-56-TFA AK (TFA)K (TFA)YAK(TFA)K(TFA)EK(TFA)AYAK(TFA)K(TFA) AEK(TFA)AAK(TFA)K(TFA)AEAK(TFA)AYK(TFA)AAEAK(TF A)K(TFA)K(TFA) AEAK (TFA)YK (TFA)AEAAK(TFA)AAAK(TF A)EAAYEA-OH TV-66-TFA AK (TFA)K (TFA)YAK(TFA)K(TFA)EK(TFA)AYAK(TFA)AK(TF A)K(TFA)AEAK(TFA)AAK(TFA)K(TFA)AK(TFA)AEAK(TFA)K (TFA)YAK(TFA) AAK(TFA)AEK (TFA)K (TFA)EYAAAEAK(TFA )YK(TFA)AEAAK(TFA)AAAK(TFA) EAAYEA-OH TV-77-TFA AK (TFA)K (TFA)YAK(TFA)K(TFA)EK(TFA)AYAK(TFA)K(TFA) AEK (TFA)AAK (TFA)K(TFA)AEAK(TFA)AYK(TFA)AAEAK(TF A)K (TFA) K(TFA)AK (TFA)AEAK(TFA)K(TFA)YAK(TFA)AAK( TFA)AEK(TFA)K(TFA) EYAAAEAK (TFA)YK(TFA)AEAAK(TFA )AAAK (TFA)EAAYEA-OH TV-86-TFA AK(TFA)K(TFA)YAK(TFA)K(TFA)EK(TFA)AYAK(TFA) K(TFA) AEK (TFA)AAK(TFA)K(TFA)AEAK(TFA)AYK(TFA)AAEAK(TF A)K(TFA) K(TFA)AK(TFA)AEAK(TFA)K(TFA)YAK(TFA)AAK( TFA)AEK (TFA)K (TFA) EYAAAEAK (TFA)YK(TFA)AEAAK(TFA )K(TFA)AYK(TFA)AEAAK(TFA)AAAK(TFA) EAAYEA-OH 和 TV-109-TFA AK (TFA)K (TFA)YAK (TFA)K(TFA)AEK(TFA)AYAK(TFA)K(TF A)AK (TFA)AAK(TFA)EK(TFA)K(TFA)AYAK(TFA)K(TFA)EAK (TFA)AYK(TFA) AAEAK (TFA)K(TFA)K(TFA)AK(TFA)AEAK(T FA)K (TFA)YAK(TFA)EAAK(TFA) AK(TFA)K(TFA)EAYK (TFA) AEAK(TFA)K(TFA)YAK(TFA)AAK(TFA)AEK(TFA) K(TFA)ΕΥ AAAEAK(TFA)K(TFA)AEAAK(TFA)AYK(TFA)AEAAK (TFA)A AAK(TFA)EAAYEA-OH。
3. 權(quán)利要求1所述的內(nèi)標(biāo)品，其中所述多肽全部由L-氨基酸組成或全部由D-氨基酸 組成。
4. 權(quán)利要求2所述的內(nèi)標(biāo)品，其中所述多肽全部由L-氨基酸組成或全部由D-氨基酸 組成組成。
5. 權(quán)利要求1或3所述的內(nèi)標(biāo)品用作在醋酸格拉替雷合成過程中測量保護的醋酸格拉 替雷的平均分子量和分子量分布的內(nèi)標(biāo)的用途。
6. 權(quán)利要求2或4所述的內(nèi)標(biāo)品用作在醋酸格拉替雷合成過程中測量三氟乙酰基醋酸 格拉替雷的平均分子量和分子量分布的內(nèi)標(biāo)的用途。
7. -種用于在醋酸格拉替雷合成過程測量保護的醋酸格拉替雷的平均分子量和分子 量分布的方法，其中使用權(quán)利要求1或3所述的內(nèi)標(biāo)品作為內(nèi)標(biāo)。
8. -種用于在醋酸格拉替雷合成過程測量三氟乙酰基醋酸格拉替雷的平均分子量和 分子量分布的方法，其中使用權(quán)利要求2或4所述的內(nèi)標(biāo)品作為內(nèi)標(biāo)。
9. 權(quán)利要求5或6所述的用途，其中所述分子量是使用柱色譜法測定的。
10. 權(quán)利要求7所述的方法，其中所述分子量是使用柱色譜法測定的。
【文檔編號】G01N30/02GK104098655SQ201310120693
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2013年4月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年4月9日
【發(fā)明者】李國弢, 唐洋明, 覃亮政, 韋暢勇, 馬亞平, 袁建成 申請人:深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司