專利名稱：一種用于診斷或輔助診斷遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱病的蛋白組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于診斷或輔助診斷遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱病的蛋白組合物。
背景技術(shù)：
立克次體病是一種嚴(yán)重威脅人類健康的人獸共患自然疫源性疾病，在歷史上曾嚴(yán)重威脅人類的健康，當(dāng)今仍是造成人類發(fā)病和死亡的重要病因之一，其由立克次體引起，經(jīng)蝶傳播的感染性疾病。黑龍江立克次體(Rickettsia heilongjiangensis)是我國新發(fā)現(xiàn)的斑點(diǎn)熱群立克次體，引起蝶傳遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱(Far-eastern tick-borne spotted fever),其疫區(qū)主要分布在我國東北地區(qū)、俄羅斯遠(yuǎn)東及日本。
在我國，斑點(diǎn)熱報(bào)告較少，其重要原因是誤診和漏診現(xiàn)象相當(dāng)普遍。斑點(diǎn)熱常被誤診為上呼吸道感染、瘧疾、鉤端螺旋體病、斑疹傷寒、恙蟲病等熱性病。造成誤診和漏診的原因其一是斑點(diǎn)熱還未被大多數(shù)人所了解，包括醫(yī)務(wù)人員在內(nèi)；其二是實(shí)驗(yàn)室診斷方法，包括間接免疫熒光(IFA)技術(shù)，酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)技術(shù)等，這些檢測方法特異性較高，但對樣本需求量大、步驟較為繁瑣費(fèi)時(shí)、并且都需要純化的立克次體全菌作為抗原，而培養(yǎng)、純化立克次體的防護(hù)要求高，工藝復(fù)雜，成本昂貴，因此難以被廣泛推廣和使用。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種具有如下I)或2)功能的的蛋白組合物；1)用于診斷或輔助診斷遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱??；
2)用于檢測或輔助檢測黑龍江立克次體(Rickettsia heilongjiangensis)感染樣本。本發(fā)明提供的蛋白組合物，由如下5種蛋白組成:RplA蛋白、RplY蛋白、OmpA蛋白、OmpB蛋白和GroEL蛋白；
所述RplA蛋白為如下Ι-a)或l_b):
1-a)為序列表中序列I的氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)；
Ι-b)為將序列表中序列I所示的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由l_a衍生的蛋白質(zhì)；
所述RpH蛋白為如下2-a)或2_b):
2-a)為序列表中序列2的氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)；
2-b)為將序列表中序列2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由2-a衍生的蛋白質(zhì)；
所述OmpA蛋白為如下3_a)或3_b):
3-a)為序列表中序列3的氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)；
3-b)為將序列表中序列3所示的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由3-a衍生的蛋白質(zhì)；
所述OmpB蛋白為如下4_a)或4_b):
4-a)為序列表中序列4的氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)；
4-b)為將序列表中序列4所示的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由4-a衍生的蛋白質(zhì)；
所述GroEL蛋白為如下5-a)或5-b):
5-a)為序列表中序列5的氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)；
5-b)為將序列表中序列5所示的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由5-a衍生的蛋白質(zhì)。
上述一個(gè)或 幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加為不超過10個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加。
上述蛋白組合物中，所述遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱病是由黑龍江立克次體(Rickettsiaheilongjiangensis)弓丨起的蝶傳遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱(Far-eastern tick-borne spotted fever)。在本發(fā)明的實(shí)施例中黑龍江立克次體(Rickettsia heilongjiangensis)為黑龍江立克次體(Rickettsia heilongjiangensis) 054 型株。
上述檢測或輔助檢測的樣本為人或動(dòng)物的血樣本。
含有上述蛋白組合物的蛋白芯片也是本發(fā)明保護(hù)的范圍。
上述蛋白芯片為用于診斷或輔助診斷遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱病的蛋白芯片；
所述遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱病具體是由黑龍江立克次體(Rickettsia heilongjiangensis)引起的蝶傳遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱(Far-eastern tick-borne spotted fever)
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種制備所述蛋白芯片的方法。
本發(fā)明提供的蛋白芯片，將上述的蛋白組合物中的5種蛋白作為5種檢測點(diǎn)與陽性質(zhì)控點(diǎn)和陰性質(zhì)控點(diǎn)一起點(diǎn)制在基底上，得到蛋白芯片。
上述蛋白芯片中，所述蛋白以蛋白溶液的形式點(diǎn)制在基底上；
上述蛋白溶液為將蛋白溶解于洗脫緩沖液得到的溶液；上述每I升洗脫緩沖液組成:將 NaH2PO4.H20、NaCl、咪唑、0.3L 甘油和水混合，NaH2PO4.H2O 終濃度為 50mmol/L、NaCl終濃度為300mmol/L、咪唑終濃度為250mmol/L，用NaOH調(diào)節(jié)pH至8.0，用水定容至1L，得到洗脫緩沖液。
上述蛋白芯片檢測的樣本為人或動(dòng)物的血樣本。
上述蛋白芯片中，所述基底可為任何制備蛋白芯片時(shí)所用的基底，具體可如醛基化玻片。
上述蛋白芯片中，所述陰性質(zhì)控對照可為任何本領(lǐng)域中常用的陰性質(zhì)控對照，具體可如水、PBS緩沖液，還具體可為蛋白洗脫緩沖液或轉(zhuǎn)入空載體pET-32a(+)的BL21(DE3)的細(xì)胞裂解液。
其中，轉(zhuǎn)入空載體pET_32a(+)的BL21(DE3)的細(xì)胞裂解液按照如下方法制備:將轉(zhuǎn)入空載體pET-32a(+)的BL21(DE3)接入氨芐青霉素抗性(Amp+)的LB液體培養(yǎng)基中，37°C震搖過夜，次日按1:100接種新鮮氨芐青霉素抗性(Amp+)的LB液體培養(yǎng)基，37°C震搖至0D600 = 0.4，加入誘導(dǎo)劑IPTG，濃度為0.4mM，于37°C繼續(xù)震搖4小時(shí)，得到發(fā)酵液。取誘導(dǎo)表達(dá)的發(fā)酵液100ml,8000rpm/min離心5min,集菌,棄上清液。用30ml裂解緩沖液重懸菌體，以25%振幅超聲破碎(超3s，停9s) I小時(shí)，得到轉(zhuǎn)入pET-32a(+)的BL21 (DE3)的細(xì)胞裂解液。
每I升裂解緩沖液按照如下方法制備:將NaH2PO4.H2O, NaCl、咪唑和水混合，NaH2PO4.H2O終濃度為50mmol/L、NaCl終濃度為300mmol/L、咪唑終濃度為10mmol/L，用NaOH調(diào)節(jié)pH至8.0，用水定容至1L，得到裂解緩沖液。
上述蛋白芯片中，所述陽性質(zhì)控點(diǎn)由人源IgG或IgM或除人外的其它動(dòng)物來源的IgG或IgM點(diǎn)制而成，本發(fā)明的實(shí)施例中陽性質(zhì)控點(diǎn)為2個(gè)，為由鼠源IgG和人源IgG點(diǎn)制。
本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種具有如下I)或2)功能的的試劑盒；
I)用于診斷或輔助診斷遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱病；
2)用于檢測或輔助檢測黑龍江立克次體(Rickettsia heilongjiangensis)感染樣本。
上述檢測或輔助檢測的樣本為人或動(dòng)物的血樣本。
本發(fā)明提供的試劑盒，包括上述的蛋白組合物或上述的蛋白芯片。
上述試劑盒還包括熒光素標(biāo)記的二抗、封閉液和漂洗液；
所述試劑盒為如下I)或2):
I)所述的試劑盒由是上述的蛋白組合物、所述封閉液、所述漂洗液和所述熒光素標(biāo)記的二抗組成；
2)所述的試劑盒由上述的蛋白芯片、所述封閉液、所述漂洗液和所述熒光素標(biāo)記的二抗組成。
所述封閉液按照如下方法制備得到:將BSA溶于pH值為7.4的PBS緩沖液中，BSA與PH值為7.4的PBS緩沖液的配比為Ig:100ml，得到的溶液即為封閉液；
漂洗液:PBST緩沖液。
上述熒光素標(biāo)記的二抗為Cy5標(biāo)記的羊抗人IgG或Cy5標(biāo)記的羊抗除人以外其它動(dòng)物來源的IgG ;在本發(fā)明的實(shí)施例中熒光素標(biāo)記的二抗為Cy5標(biāo)記的羊抗鼠IgG。
每I升磷酸鹽緩沖液(pH值為7.4的PBS緩沖液)按照如下方法制備:將Sg NaCl,0.2gKCl、3.53gNa2HP04.12Η20、0.24g KH2PO4和水混合，用水定容至I升，得到的溶液的pH值為7.4，即得到PBS緩沖液。
每I升PBST緩沖液按照如下方法制備:將磷酸鹽緩沖液(PBS)與Tween-20混合，磷酸鹽緩沖液(PBS)與T ween-20的配比為I升:1ml，得到PBST緩沖液。
上述試劑盒中，所述遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱病是由黑龍江立克次體(Rickettsiaheilongjiangensis)弓丨起的蝶傳遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱(Far-eastern tick-borne spotted fever)。在本發(fā)明的實(shí)施例中黑龍江立克次體(Rickettsia heilongjiangensis)為黑龍江立克次體(Rickettsia heilongjiangensis) 054 型株。
上述的蛋白組合物在制備具有如下I)或2)功能的產(chǎn)品中的應(yīng)用也是本發(fā)明保護(hù)的范圍。上述應(yīng)用中，上述產(chǎn)品為蛋白芯片或試劑盒；I)用于診斷或輔助診斷遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱?。?)用于檢測或輔助檢測黑龍江立克次體(Rickettsia heilongjiangensis)感染樣本。
上述的蛋白芯片在制備具有如下I)或2)功能的產(chǎn)品中的應(yīng)用也是本發(fā)明保護(hù)的范圍。上述應(yīng)用中，上述產(chǎn)品為試劑盒；1)用于診斷或輔助診斷遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱??；2)用于檢測或輔助檢測黑龍江立克次體(Rickettsia heilongjiangensis)感染樣本。
上述檢測或輔助檢測的樣本為人或動(dòng)物的血樣本。
上述應(yīng)用中，所述遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱病是由黑龍江立克次體(Rickettsiaheilongjiangensis)弓丨起的蝶傳遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱(Far-eastern tick-borne spotted fever)。在本發(fā)明的實(shí)施例中黑龍江立克次體(Rickettsia heilongjiangensis)為黑龍江立克次體(Rickettsia heilongjiangensis) 054 型株。
本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了由5種蛋白組成的蛋白組合物及將這5種蛋白點(diǎn)制在基底上的蛋白芯片，運(yùn)用該組合物或芯片可以對遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱病人或動(dòng)物的血清進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的血清學(xué)分析診斷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，操作簡便，樣本用量少，省時(shí)省力，可以代替?zhèn)鹘y(tǒng)的繁瑣、累人、耗時(shí)的血清學(xué)診斷方法做遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱血清學(xué)診斷。


圖1為蛋白的電泳結(jié)果
圖2為蛋白RplA與各血清組中血清反應(yīng)熒光信號值分布散點(diǎn)圖
圖3為蛋白RpH與各血清組中血清反應(yīng)熒光信號值分布散點(diǎn)圖
圖4為蛋白OmpA與各血清組中血清反應(yīng)熒光信號值分布散點(diǎn)圖
圖5為蛋白OmpB與各血清組中血清反應(yīng)熒光信號值分布散點(diǎn)圖
圖6為蛋白GroEL與各血清組中血清反應(yīng)熒光信號值分布散點(diǎn)圖具體實(shí)施方式
下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
實(shí)施例中所用的黑龍江立克次體(Rickettsia heilongjiangensis)均為黑龍江立克次體 054 型株:在文獻(xiàn)“Changsong Duan, Yanfen Meng, Xile Wang, Xiaolu Xiong, andBohai Wen.2011.Exploratory Study on Pathogenesis of Far-Eastern Spotted Fever.Am.J.Trop.Med.Hyg.，85(3)，2011，pp.504 - 509.”中公開過，公眾可在法律及軍隊(duì)相關(guān)規(guī)定允許的范圍內(nèi)從中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所獲得。
實(shí)施例中所用的立氏立克次體(Rickettsia rickettsii)均為立氏立克次體 sheila smith 型株:在文獻(xiàn)“Ellison DWj Clark TRj Sturdevant DEj VirtanevaK，Porcella SF，et al.(2007)Genomic Comparisonof Virulent Rickettsia rickettsiiSheila Smith and Avirulent Rickettsia rickettsii 1wa.1nfection andimmunity76:542-550.”中公開過，公眾可在法律及軍隊(duì)相關(guān)規(guī)定允許的范圍內(nèi)從中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所獲得。
實(shí)施例中所用的普氏立克次體(Rickettsia prowazekii)均為普氏立克次體Madrid E 型株:在文獻(xiàn) “J.-Z.Zhang, J.-F.Haoj D.H.Walker, X.-J.Yu.(2006)A mutationinactivating the methyItransferase gene in avirulent Madrid E strain ofRickettsia prowazekii reverted to wild type in the virulent revertant strainEvir,Vaccine24:2317 - 2323.”中公開過，公眾可在法律及軍隊(duì)相關(guān)規(guī)定允許的范圍內(nèi)從中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所獲得。
實(shí)施例中所用的Q熱病原體(貝氏柯克斯體)(Coxiella burnetii)均為貝氏柯克斯體 Xinqiao I 相株:在文獻(xiàn) “Xiong Xj Wang Xj Wen B, Graves S，Stenos J (2012)Potential serodiagnostic markers for Q fever identified in Coxiella burnetiiby immunoproteomic and protein microarray approaches.BMC Microbiol 12:35.，，中公開過，公眾可在法律及軍隊(duì)相關(guān)規(guī)定允許的范圍內(nèi)從中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所獲得。
實(shí)施例中所用的恙蟲病東方體(Orientia tsutsugamushi)均為恙蟲病東方體Karp型株:在文獻(xiàn)“余躍飛，溫博海，牛東升等.恙蟲病東方體Karp株47kDa蛋白成熟肽的克隆與表達(dá)[J].汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，16(3):132-134.”中公開過，公眾可在法律及軍隊(duì)相關(guān)規(guī)定允許的范圍內(nèi)從中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所獲得。
實(shí)施例中所用立氏立克次體(Rickettsia rickettsii)、普氏立克次體(Rickettsia prowazekii)、Q 熱病原體(或貝氏柯克斯體)(Coxiella burnetii)、恙蟲病東方體(Orientia tsutsugamushi)感染小鼠血清均為中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所保存。公眾可在法律及軍隊(duì)相關(guān)規(guī)定允許的范圍內(nèi)從中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所獲得。
實(shí)施例1、5種抗原蛋白的制備
載體pET_32a(+)購自Novagen公司，產(chǎn)品目錄號為69015
載體pQE-30購自Qiagen公司，產(chǎn)品目錄號為33203。
大腸桿菌M15購自Novagen公司，產(chǎn)品目錄號為34210。
大腸桿菌BL21 (DE3)購自Novagen公司，產(chǎn)品目錄號為69450。
—、5種抗原蛋白的蛋白序列及編碼基因序列
5種抗原蛋白的蛋白的氨基酸序列及編碼基因的核苷酸序列如表I所示。
表I為蛋白及基因序列
權(quán)利要求
1.一種具有如下I)或2)功能的蛋白組合物，由如下5種蛋白組成:RplA蛋白、Rp；LY蛋白、OmpA蛋白、OmpB蛋白和GroEL蛋白； 1)用于診斷或輔助診斷遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱?。? 2)用于檢測或輔助檢測黑龍江立克次體(Rickettsiaheilongjiangensis)感染樣本；所述RplA蛋白為如下1-a)或1-b): 1-a)為序列表中序列I的氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)； Ι-b)為將序列表中序列I所示的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由l_a衍生的蛋白質(zhì)； 所述Rp；LY蛋白為如下2-a)或2-b): 2-a)為序列表中序列2的氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)； 2_b)為將序列表中序列2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由2-a衍生的蛋白質(zhì)； 所述OmpA蛋白為如下3-a)或3_b): 3-a)為序列表中序列3的氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)； 3_b)為將序列表中序列3所示的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由3-a衍生的蛋白質(zhì)； 所述OmpB蛋白為如下4-a)或4_b): 4-a)為序列表中序列4的氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)； 4_b)為將序列表中序列4所示的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由4-a衍生的蛋白質(zhì)； 所述GroEL蛋白為如下5_a)或5_b): 5-a)為序列表中序列5的氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)； 5_b)為將序列表中序列5所示的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由5-a衍生的蛋白質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白組合物，其特征在于:所述遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱病是由黑龍江立克次體(Rickettsia heilongjiangensis)引起的蝶傳遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱(Far-easterntick-borne spotted fever)。
3.含有權(quán)利 要求1或2所述蛋白組合物的蛋白芯片。
4.一種制備權(quán)利要求3所述蛋白芯片的方法，包括如下步驟:將權(quán)利要求1或2所述的蛋白組合物中的5種蛋白作為5種檢測點(diǎn)與陽性質(zhì)控點(diǎn)和陰性質(zhì)控點(diǎn)一起點(diǎn)制在基底上，得到蛋白芯片。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白芯片，其特征在于:所述蛋白以蛋白溶液的形式點(diǎn)制在基底上。
6.一種具有如下I)或2)功能的試劑盒，包括權(quán)利要求1或2所述的蛋白組合物或權(quán)利要求3所述的蛋白芯片； 1)用于診斷或輔助診斷遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱?。? 2)用于檢測或輔助檢測黑龍江立克次體(Rickettsiaheilongjiangensis)感染樣本。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒還包括熒光素標(biāo)記的二抗、封閉液和漂洗液；所述試劑盒為如下I)或2): 1)所述的試劑盒由權(quán)利要求1或2所述的蛋白組合物、所述封閉液、所述漂洗液和所述熒光素標(biāo)記的二抗組成； 2)所述的試劑盒由權(quán)利要求3或4所述的蛋白芯片、所述封閉液、所述漂洗液和所述熒光素標(biāo)記的二抗組成。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的試劑盒，其特征在于: 所述遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱病是由黑龍江立克次體(Rickettsia heilongjiangensis)引起的蝶傳遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱(Far-eastern tick-borne spotted fever)。
9.權(quán)利要求1或2所述的蛋白組合物在制備具有如下I)或2)功能的產(chǎn)品中的應(yīng)用；或權(quán)利要求3所述的蛋白芯片在制備具有如下I)或2)功能的產(chǎn)品中的應(yīng)用； 1)用于診斷或輔助診斷遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱?。? 2)用于檢測或輔助檢測黑龍江立克次體(Rickettsiaheilongjiangensis)感染樣本。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于:所述遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱病是由黑龍江立克次體(Rickettsia heilongjiangensis)弓丨起的蝶傳遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱(Far-eastern tick-bornespotte d fever)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于診斷或輔助診斷遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱病的蛋白組合物。本發(fā)明提供了提供的蛋白組合物，由如下5種蛋白組成RplA蛋白、RplY蛋白、OmpA蛋白、OmpB蛋白和GroEL蛋白；本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了由5種蛋白組成的蛋白組合物及將5這種蛋白點(diǎn)制在基底上的蛋白芯片，運(yùn)用該組合物或芯片可以對遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱病人或動(dòng)物的血清進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的血清學(xué)分析診斷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，操作簡便，樣本用量少，省時(shí)省力，可以代替?zhèn)鹘y(tǒng)的繁瑣、累人、耗時(shí)的血清學(xué)診斷方法做遠(yuǎn)東斑點(diǎn)熱血清學(xué)診斷。
文檔編號G01N33/68GK103149365SQ201310049378
公開日2013年6月12日 申請日期2013年2月7日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月7日
發(fā)明者齊永, 溫博海, 王錫樂, 熊小路, 段長松, 李佳明, 賈引軍, 龔文平, 焦俊 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所