專利名稱：銀杏葉及其提取物的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥材的質(zhì)量控制方法，具體涉及銀杏葉及其提取物的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
銀杏葉為銀杏科植物銀杏Ginkgo biloba L.的干燥葉，秋季葉尚綠時采收。性味:甘、苦、澀、平。具有活血化瘀，通絡(luò)止痛、斂肺平喘，化濁降脂的功效。目前2010版《中國藥典》銀杏葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定:總黃酮醇苷是通過HPLC-UV法測定酸水解后槲皮素、山柰酚和異鼠李素的含量來控制的，該方法不僅前處理繁瑣，耗時長，而且不能充分反映黃酮類活性成分；現(xiàn)有技術(shù)銀杏葉中的萜內(nèi)酯成分是以HPLC-ELSD法測定，該方法供試品溶液制備需經(jīng)酸性氧化鋁柱前處理，同樣處理復(fù)雜；且沒有銀杏酚酸類成分的質(zhì)量控制方法也未能全面檢測銀杏葉的活性成分。因此，為了充分控制好銀杏葉藥材及其提取物及其制劑的臨床安全性，維護(hù)患者的利益，很有必要在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)之上研究設(shè)計出能準(zhǔn)確全面檢測銀杏葉及其制劑有效成分的檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的:本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)篩選，采用超高效液相色譜檢測，該檢測方法可以同時檢測銀杏葉中的黃酮、萜內(nèi)酯和酚酸3類成分，共24種活性化合物。該方法檢測靈敏度高，穩(wěn)定性好，可以客觀、全面、準(zhǔn)確地評價銀杏葉藥材及其提取物與制劑的質(zhì)量，對控制質(zhì)量和保證療效具有重要意義。技術(shù)方案:為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:一種銀杏葉的質(zhì) 量控制方法，其包括以下步驟:(I)樣品溶液的制備精密稱取銀杏葉或銀杏葉提取物，加入甲醇，超聲或加熱回流提取，過濾，取續(xù)濾液過0.22 μ m濾膜，得樣品溶液；(2)對照品溶液的制備分別精密稱定表沒食子酸兒茶素、兒茶素、表兒茶素、蘆丁、異槲皮苷、白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯C、槲皮素3-0-α -L-葡萄糖基-β -D-1，2_鼠李糖苷、槲皮苷、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯Α、木犀草素、槲皮素、療菜素、山柰酹、異鼠李素、穗花杉雙黃酮、去甲銀杏雙黃酮、芫花素、銀杏雙黃酮、異銀杏雙黃酮、金松雙黃酮、白果新酸、白果酸24種對照品置于量瓶中，用濃度為709Γ80%甲醇溶解稀釋，制得各單一對照品儲備液；然后分別量取不同體積單一對照品溶液，混合稀釋制成系列濃度混合對照品溶液，于4°C保存，備用；(3)液相色譜圖的獲取將步驟(I)制備得到的樣品溶液和步驟(2)制備得到的混合對照品溶液，分別進(jìn)行超高效液相色譜檢測，獲得樣品和對照品的色譜圖，進(jìn)行定性定量分析；所用超高效液相色譜參數(shù)設(shè)置如下:
儀器:WatersACQUITY UPLC 系統(tǒng)；固定相:WatersACQUITY BEH C18 色譜柱；流動相:0.1°/Γ2%濃度的甲酸水溶液和乙腈；梯度洗脫；流速:0.4 0.5mL/min ;進(jìn)樣量:lyL;檢測器:Xevo TQ檢測器；離子化模式:ESr/ESI+ ;檢測方式:多反應(yīng)檢測；毛細(xì)管電壓:3.0kV ;離子源溫度:150°C ;脫溶劑氣溫度:5500C ;脫溶劑氣流量:1000L;錐孔氣流量:50L.h-1 ;碰撞氣流量:0.15mL.mirf1。作為優(yōu)選方案，以上所述的銀杏葉的質(zhì)量控制方法，步驟(3)所述的梯度洗脫程序如表I所示:表I梯度洗脫 程序表
權(quán)利要求
1.一種銀杏葉的質(zhì)量控制方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)樣品溶液的制備 精密稱取銀杏葉或銀杏葉提取物，加入甲醇，超聲或加熱回流提取，過濾，取續(xù)濾液過0.22 μ m濾膜，得樣品溶液； (2)對照品溶液的制備分別精密稱定表沒食子酸兒茶素、兒茶素、表兒茶素、蘆丁、異槲皮苷、白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯C、槲皮素3-0-a-L-葡萄糖基-β-D-l，2-鼠李糖苷、槲皮苷、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯Α、木犀草素、槲皮素、芹菜素、山柰酚、異鼠李素、穗花杉雙黃酮、去甲銀杏雙黃酮、芫花素、銀杏雙黃酮、異銀杏雙黃酮、金松雙黃酮、白果新酸、白果酸24種對照品置于量瓶中，用濃度為709Γ80%甲醇溶解稀釋，制得各單一對照品儲備液；然后分別量取不同體積單一對照品溶液，混合稀釋制成系列濃度混合對照品溶液，于4°C保存，備用； (3)液相色譜圖的獲取 將步驟(1)制備得到的樣品溶液和步驟(2)制備得到的混合對照品溶液，分別進(jìn)行超高效液相色譜檢測，獲得樣品和對照品的色譜圖，進(jìn)行定性定量分析； 所用超高效液相色譜參數(shù)設(shè)置如下: 儀器:Waters ACQUITY UPLC 系統(tǒng)； 固定相:Waters ACQUITY BEH C18 色譜柱； 流動相:0.1°/Γ2%濃度的甲酸水溶液和乙腈；梯度洗脫；流速:0.4 0.5 mL/min ;進(jìn)樣量:1 μ L ； 檢測器:Xevo TQ檢測器； 離子化模式:ESI—/ESI+;檢測方式:多反應(yīng)檢測；毛細(xì)管電壓:3.0 kV;離子源溫度:150。。;脫溶劑氣溫度:5500C ;脫溶劑氣流量:1000 L.h-1 ;錐孔氣流量:50 L.h-1 ;碰撞氣流量:0.15 mL.mirf1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉的質(zhì)量控制方法，其特征在于， 步驟(3)所述的梯度洗脫程序如表I所示: 表1梯度洗脫程序表
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉的質(zhì)量控制方法，其特征在于， 步驟(1)樣品溶液的制備方法為:精密稱取銀杏葉或銀杏葉提取物，加入6-10倍濃度為70-80%的甲醇，超聲或加熱回流提取2 3次，每次1-2小時，合并提取液，過濾，取續(xù)濾液過0.22 μπι濾膜，得樣品溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉的質(zhì)量控制方法，其特征在于，步驟(1)所述的銀杏葉提取物為銀杏葉的水提取物或者乙醇提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種銀杏葉及其提取物的質(zhì)量控制方法，本發(fā)明通過大量實(shí)驗(yàn)篩選，采用超高效液相色譜檢測，該檢測方法可以同時檢測銀杏葉及其提取物中的黃酮、萜內(nèi)酯和酚酸3類成分，共24種活性化合物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法檢測靈敏度高，穩(wěn)定性好，可以客觀、全面、準(zhǔn)確地評價銀杏葉藥材及其提取物與制劑的質(zhì)量，對控制質(zhì)量和保證臨床療效具有重要意義。
文檔編號G01N30/02GK103175912SQ20131004671
公開日2013年6月26日 申請日期2013年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月6日
發(fā)明者段金廒, 錢大瑋, 尚爾鑫, 唐于平, 宿樹蘭 申請人:南京中醫(yī)藥大學(xué)