專利名稱：一種使用拭子采集體液檢測(cè)丙型肝炎的檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型是涉及生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種使用拭子采集體液檢測(cè)丙型肝炎的檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
丙型肝炎的傳染源主要為急性臨床型和無癥狀的亞臨床病人，慢性病人和丙型肝炎病毒病毒攜帶者。一般病人發(fā)病前12天，其血液即有感染性，并可帶毒12年以上。HCV主要血源傳播，國外30-90%輸血后肝炎為丙型肝炎，我國輸血后肝炎中丙型肝炎占1/3。此外還可通過其他方式如母嬰垂直傳播，家庭日常接觸和性傳播等。輸入含HCV或HCV-RNA的血漿或血液制品，一般經(jīng)6-7周潛伏期例急性發(fā)病，臨床表現(xiàn)全身無力，胃納差，肝區(qū)不適，1/3病人有黃疸，ALT升高，抗HCV抗體陽性。臨床丙型肝炎病人50%可發(fā)展為慢性肝炎，甚至部分病人會(huì)導(dǎo)致肝硬及肝細(xì)胞癌。其余約半數(shù)病人為自限性，可自動(dòng)康復(fù)。丙型肝炎發(fā)病機(jī)理仍未十分清楚，當(dāng)HCV在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制引起肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能改變或干擾肝細(xì)胞蛋白合成，可造成肝細(xì)胞變性壞死，表明HCV直接損害肝臟，導(dǎo)致發(fā)病起一定作用。但多數(shù)學(xué)者認(rèn)為細(xì)胞免疫病理反應(yīng)可能起重要作用，發(fā)現(xiàn)丙型肝炎與乙型肝炎一樣，其組織浸潤細(xì)胞以CD3+為主，細(xì)胞毒T細(xì)胞(TC)特異攻擊HCV感染的靶細(xì)胞，可引起肝細(xì)胞損傷。臨床觀察資料表明，人感染HCV后所產(chǎn)生的保護(hù)性免疫力很差，能再感染不同，甚至部分病人會(huì)導(dǎo)致肝硬化及肝細(xì)胞癌。其余約半數(shù)病人為自限性，可自動(dòng)康復(fù)。目前對(duì)丙型肝炎病毒檢測(cè)的主要方法是對(duì)血液樣本進(jìn)行采集檢測(cè)抗體，在膠體金的檢測(cè)方法中，有檢測(cè)丙型肝炎病毒IgG的報(bào)道，但使用口腔液拭子進(jìn)行IgG檢測(cè)尚未有相關(guān)報(bào)道。和傳統(tǒng)試劑相比，使用口腔液拭子進(jìn)行IgG檢測(cè)具有采樣容易，減少患者的痛苦，減少檢測(cè)人員的工作量的優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型的目的是提供一種使用拭子采集體液檢測(cè)丙型肝炎的檢測(cè)試劑盒，具有采樣容易、操作簡便、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強(qiáng)、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)用新型提供一種使用拭子采集體液檢測(cè)丙型肝炎的檢測(cè)試劑盒，其特征在于塑料支撐板(7) —端連接上樣墊(I)，上樣墊(I)的一端緊密壓接含有標(biāo)記丙型肝炎病毒特異性的抗原的膠體金墊(2)，膠體金墊(2) —端緊密壓接硝酸纖維素(NC)膜(3)，硝酸纖維素膜包被有相互分離的檢測(cè)線T線(5)和質(zhì)控C線(6)，檢測(cè)線T(5)為包被在NC膜上的抗人IgG抗體，質(zhì)控(C)線(6)為包被在NC膜上的抗丙型肝炎病毒特異性的抗原的抗體，硝酸纖維素膜的另一端連接吸樣墊(4)形成試紙。所述的一種使用拭子采集體液檢測(cè)丙型肝炎的檢測(cè)試劑盒，其特征在于其抗體的包被方法為:以0.0lM ρΗ7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)將抗人IgG抗體配制成5mg/ml的溶液，用噴膜儀在NC膜下部以1-1.5ul/cm的參數(shù)進(jìn)行劃線，包被T線，同時(shí)在NC膜上部包被丙型肝炎病毒抗體作為C線，劃線后將NC膜在干燥間，溫度20-25°C，濕度小于30%，干燥2-5小時(shí)。將標(biāo)記好抗原的膠體金顆粒制成膠體金墊，與包被抗體的硝酸纖維素膜和其他輔料制備成試紙條。所述的一種使用拭子采集體液檢測(cè)丙型肝炎的檢測(cè)試劑盒，其特征在于其檢測(cè)方法為:用口腔拭子尼龍墊端從嘴的上牙齦一角開始，從左慢慢壓拭到右，用時(shí)5到6秒，然后，從右慢慢壓拭到左，用時(shí)5到6秒，反復(fù)3次，然后反轉(zhuǎn)口腔拭子，從嘴的下牙齦一角開始，重復(fù)上述過程，壓拭力度，以受檢者有酸脹感，且無明顯不適為準(zhǔn)；壓拭后，立即將口腔拭子浸入樣本緩沖液中，先后讓拭子的兩面緊貼試管壁，上下刮擦6-8次，管內(nèi)液體即為口腔液樣本，將試紙條平放，在上樣墊上加入IOOul樣品，使膠體金溶解并在NC膜上層析，然后用肉眼直接觀察在15分鐘內(nèi)C、T線的出現(xiàn)情況，并判定檢測(cè)結(jié)果。本實(shí)用新型的有益效果是:提供一種使用拭子采集體液檢測(cè)丙型肝炎的檢測(cè)試劑盒。和傳統(tǒng)試劑相比，使用口腔液拭子進(jìn)行IgG檢測(cè)具有采樣容易，減少患者的痛苦，減少檢測(cè)人員的工作量的優(yōu)點(diǎn)。

:圖1使用拭子采集體液檢測(cè)丙型肝炎的檢測(cè)試劑盒試紙結(jié)構(gòu)示意圖。附圖符號(hào)說明:1:上樣墊；2:膠體金墊；3:NC膜；4:吸樣墊5:檢測(cè) 線Tl ；6:質(zhì)控(C)線；7:塑料支撐板。圖2采集口腔液拭子結(jié)構(gòu)示意圖附圖符號(hào)說明:1:尼龍塾纟而;2:手持立而。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例:制備丙型肝炎的檢測(cè)試劑盒試紙將抗原實(shí)用膠體金標(biāo)記，制成膠體金墊，以0.0lM ρΗ7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)將抗人IgG抗體配制成5mg/ml的溶液,用噴膜儀在NC膜下部以1_1.5ul/cm的參數(shù)進(jìn)行劃線，包被T線，同時(shí)在NC膜上部包被丙型肝炎病毒抗體作為C線，劃線后將NC膜在干燥間，溫度20-25°C，濕度小于30%，干燥2-5小時(shí)。將膠體金墊和包被好的NC膜和其他輔料裝配成試紙條。將50例已確診丙肝病毒IgG抗體陽性的病人作為待檢者，將50例已確診丙肝病毒IgG抗體陰性的健康人作為對(duì)照組待檢者。用口腔拭子尼龍墊端從嘴的上牙齦一角開始，從左慢慢壓拭到右，用時(shí)5到6秒，然后，從右慢慢壓拭到左，用時(shí)5到6秒，反復(fù)3次，然后反轉(zhuǎn)口腔拭子，從嘴的下牙齦一角開始，重復(fù)上述過程，壓拭力度，以受檢者有酸脹感，且無明顯不適為準(zhǔn)；壓拭后，立即將口腔拭子浸入樣本緩沖液中，先后讓拭子的兩面緊貼試管壁，上下刮擦6-8次，管內(nèi)液體即為口腔液樣本，將試紙條平放，在上樣墊上加入IOOul樣品，使膠體金溶解并在NC膜上層析，然后用肉眼直接觀察在15分鐘內(nèi)C、T線的出現(xiàn)情況，并判定檢測(cè)結(jié)果。檢測(cè)結(jié)果的解釋:如果對(duì)照區(qū)內(nèi)的對(duì)照線沒有出現(xiàn)，檢測(cè)結(jié)果無效，如果僅在對(duì)照區(qū)出現(xiàn)一條線對(duì)照線，結(jié)果為陰性。如果檢測(cè)線和對(duì)照線都出現(xiàn)，即試紙上出現(xiàn)兩條線，則檢測(cè)結(jié)果為陽性。[0020]通過臨床血清檢測(cè)，IgG為陽性的樣本和IgG為陰性的樣本，本試劑檢測(cè)和臨床診斷結(jié)果完全一致。臨床檢測(cè)表明本試劑的性能和現(xiàn)有診斷手段相比無顯著性差異，適合用于臨床檢 測(cè)。
權(quán)利要求1.一種使用拭子采集體液檢測(cè)丙型肝炎的檢測(cè)試劑盒，其特征在于塑料支撐板(7) —端連接上樣墊(1)，上樣墊(I)的一端緊密壓接含有標(biāo)記丙型肝炎病毒特異性的抗原的膠體金墊(2)，膠體金墊(2) —端緊密壓接硝酸纖維素膜(3)，硝酸纖維素膜包被有相互分離的檢測(cè)線T線(5)和質(zhì)控C線(6)，檢測(cè)線T (5)為包被在硝酸纖維素膜上的抗人IgG抗體，質(zhì)控(C)線(6)為包被在硝酸纖維素膜上的抗丙型肝炎病毒特異性的抗原的抗體，硝酸纖維素膜的另一端連接吸樣墊(4 )形成試紙。
專利摘要本實(shí)用新型是涉及生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種使用拭子采集體液檢測(cè)丙型肝炎的檢測(cè)試劑盒，采用拭子采集口腔液，用膠體金標(biāo)記丙型肝炎病毒特異性重組抗原，包被抗人IgG抗體實(shí)現(xiàn)對(duì)口腔液中抗丙型肝炎病毒IgG抗體的檢測(cè)。具有操作簡便、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強(qiáng)、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N33/576GK203101399SQ20122059690
公開日2013年7月31日 申請(qǐng)日期2012年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月12日
發(fā)明者祁軍, 于佳, 關(guān)淳, 王馨, 劉振宇, 左鋒, 蘇麗, 韓婧娜, 劉寅 申請(qǐng)人:中華人民共和國天津出入境檢驗(yàn)檢疫局